【摘要】：背景與目的持續(xù)性術(shù)后痛是發(fā)生在一些常見的外科手術(shù)比如開胸術(shù),腹股溝疝修補術(shù),剖宮產(chǎn)術(shù)等手術(shù)后,發(fā)生率為4-13%,持續(xù)時間在3-30個月不等。持續(xù)性術(shù)后痛是一個重要的臨床問題,嚴重降低了病人的生活質(zhì)量,其發(fā)生機制還不明確。目前,離子通道受體在疼痛中的作用越來越受到重視,比如鉀離子通道受體、鈉離子通道受體等。鈉離子受體的其中一個亞型Nav1.7主要表達在周圍神經(jīng)系統(tǒng)脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中,負責傷害性信號的傳入,參與了多種類型的疼痛通路進程,但是在持續(xù)性術(shù)后痛中的作用機制不清楚。NF-κB是表達在多種類型的細胞中的重要的核轉(zhuǎn)錄因子,活化后的NF-κB進入細胞核內(nèi)通過與目標基因的啟動子區(qū)結(jié)合參與多種基因的調(diào)控,p65是NF-κB的一個常見的亞型,并且在疼痛的發(fā)生發(fā)展中參與了對多種炎癥介質(zhì)的調(diào)控。本研究旨在探討p65,Nav1.7在持續(xù)性術(shù)后痛中的作用,以及在持續(xù)性術(shù)后痛模型中p65是否參與對Nav1.7的調(diào)控。實驗方法首先,我們通過Western blot和免疫熒光染色檢測了模型大鼠同側(cè)L4-6 DRG中Nav1.7和p-p65(p65磷酸化)的表達,然后鞘內(nèi)注射ProTx-II(Nav1.7阻斷劑)或PDTC(p65抑制劑),檢測Nav1.7蛋白的表達和機械撤足閾值的變化,最后使用免疫共沉淀技術(shù)檢測p-p65是否可以與Nav1.7基因啟動子區(qū)結(jié)合。通過GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。實驗結(jié)果1 SMIR(皮膚肌肉切口牽拉)模型誘導了大鼠術(shù)側(cè)足底的機械性痛覺過敏incision組和naive組相比,機械撤足閾值沒有統(tǒng)計學意義;與incision組相比,SMIR組術(shù)側(cè)的機械撤足閾值在術(shù)后5天開始下降,直到術(shù)后20天;而對側(cè)的機械撤足閾值,SMIR組和incision組相比沒有統(tǒng)計學意義;三組之間的熱縮足潛伏期沒有統(tǒng)計學差異。2 DRG(脊髓背根神經(jīng)節(jié))中的Nav1.7參與了SMIR模型介導的機械性痛覺過敏Western blot檢測結(jié)果顯示,與術(shù)前大鼠相比,術(shù)后10天,15天,20天,大鼠術(shù)側(cè)L4-6 DRG Nav1.7的表達量明顯增高。為了確認是否上調(diào)的Nav1.7在SMIR介導的痛覺過敏中起作用,我們通過鞘內(nèi)注射Nav1.7阻斷劑ProTx-II,發(fā)現(xiàn)ProTx-II可以有效的緩解SMIR模型介導的機械性痛覺過敏。3 Nav1.7主要表達在CGRP、IB4、NF-200標記的陽性細胞上為了確認Nav1.7在DRG神經(jīng)元中的表達類型,我們使用了免疫熒光雙染的方法,發(fā)現(xiàn)Nav1.7與CGRP、IB4、NF-200標記的細胞共標,通過Imagej軟件分析,發(fā)現(xiàn)80%的Nav1.7陽性細胞是小直徑神經(jīng)元,17%的Nav1.7陽性細胞是中直徑神經(jīng)元,僅有3%的Nav1.7陽性細胞是大直徑神經(jīng)元。4 P-p65在SMIR模型DRG中高表達有研究報道,p-p65參與了神經(jīng)病理性疼痛和炎性疼痛的進程。本研究中我們檢測了DRG中p-p65在SMIR模型介導的持續(xù)性術(shù)后痛中的作用。我們發(fā)現(xiàn)PDTC可以阻止SMIR模型大鼠的機械性痛覺過敏。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)與incision組相比,SMIR模型大鼠術(shù)側(cè)L4-6 DRG中的核蛋白p-p65在術(shù)后10天、15天高表達,而PDTC預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)p-p65的高表達。5 P-p65通過上調(diào)大鼠DRG中Nav1.7的表達參與了SMIR模型介導的持續(xù)性術(shù)后痛我們知道,p65是一種很重要的核轉(zhuǎn)錄因子,參與了多種目的基因的轉(zhuǎn)錄。為了進一步驗證p-p65是否在持續(xù)性術(shù)后痛中參與了對Nav1.7的調(diào)控,我們通過鞘內(nèi)注射PDTC來檢測Nav1.7的表達變化,結(jié)果顯示,在術(shù)后10天和15天,PDTC可以阻止Nav1.7的上調(diào)。接著我們做了免疫熒光雙染,發(fā)現(xiàn)p-p65與CGRP,NF-200和IB-4共表達。免疫共沉淀結(jié)果顯示,p-p65在引物2,7,8,9可以與SCN9A基因啟動子區(qū)結(jié)合。結(jié)論p-p65介導Nav1.7的上調(diào)參與了SMIR介導的持續(xù)性術(shù)后痛。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R614

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本文編號：2290805