【摘要】：背景與目的持續(xù)性術(shù)后痛是發(fā)生在一些常見(jiàn)的外科手術(shù)比如開(kāi)胸術(shù),腹股溝疝修補(bǔ)術(shù),剖宮產(chǎn)術(shù)等手術(shù)后,發(fā)生率為4-13%,持續(xù)時(shí)間在3-30個(gè)月不等。持續(xù)性術(shù)后痛是一個(gè)重要的臨床問(wèn)題,嚴(yán)重降低了病人的生活質(zhì)量,其發(fā)生機(jī)制還不明確。目前,離子通道受體在疼痛中的作用越來(lái)越受到重視,比如鉀離子通道受體、鈉離子通道受體等。鈉離子受體的其中一個(gè)亞型Nav1.7主要表達(dá)在周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中,負(fù)責(zé)傷害性信號(hào)的傳入,參與了多種類型的疼痛通路進(jìn)程,但是在持續(xù)性術(shù)后痛中的作用機(jī)制不清楚。NF-κB是表達(dá)在多種類型的細(xì)胞中的重要的核轉(zhuǎn)錄因子,活化后的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)通過(guò)與目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合參與多種基因的調(diào)控,p65是NF-κB的一個(gè)常見(jiàn)的亞型,并且在疼痛的發(fā)生發(fā)展中參與了對(duì)多種炎癥介質(zhì)的調(diào)控。本研究旨在探討p65,Nav1.7在持續(xù)性術(shù)后痛中的作用,以及在持續(xù)性術(shù)后痛模型中p65是否參與對(duì)Nav1.7的調(diào)控。實(shí)驗(yàn)方法首先,我們通過(guò)Western blot和免疫熒光染色檢測(cè)了模型大鼠同側(cè)L4-6 DRG中Nav1.7和p-p65(p65磷酸化)的表達(dá),然后鞘內(nèi)注射ProTx-II(Nav1.7阻斷劑)或PDTC(p65抑制劑),檢測(cè)Nav1.7蛋白的表達(dá)和機(jī)械撤足閾值的變化,最后使用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)p-p65是否可以與Nav1.7基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。通過(guò)GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 SMIR(皮膚肌肉切口牽拉)模型誘導(dǎo)了大鼠術(shù)側(cè)足底的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏incision組和naive組相比,機(jī)械撤足閾值沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與incision組相比,SMIR組術(shù)側(cè)的機(jī)械撤足閾值在術(shù)后5天開(kāi)始下降,直到術(shù)后20天;而對(duì)側(cè)的機(jī)械撤足閾值,SMIR組和incision組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組之間的熱縮足潛伏期沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2 DRG(脊髓背根神經(jīng)節(jié))中的Nav1.7參與了SMIR模型介導(dǎo)的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與術(shù)前大鼠相比,術(shù)后10天,15天,20天,大鼠術(shù)側(cè)L4-6 DRG Nav1.7的表達(dá)量明顯增高。為了確認(rèn)是否上調(diào)的Nav1.7在SMIR介導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏中起作用,我們通過(guò)鞘內(nèi)注射N(xiāo)av1.7阻斷劑ProTx-II,發(fā)現(xiàn)ProTx-II可以有效的緩解SMIR模型介導(dǎo)的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。3 Nav1.7主要表達(dá)在CGRP、IB4、NF-200標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞上為了確認(rèn)Nav1.7在DRG神經(jīng)元中的表達(dá)類型,我們使用了免疫熒光雙染的方法,發(fā)現(xiàn)Nav1.7與CGRP、IB4、NF-200標(biāo)記的細(xì)胞共標(biāo),通過(guò)Imagej軟件分析,發(fā)現(xiàn)80%的Nav1.7陽(yáng)性細(xì)胞是小直徑神經(jīng)元,17%的Nav1.7陽(yáng)性細(xì)胞是中直徑神經(jīng)元,僅有3%的Nav1.7陽(yáng)性細(xì)胞是大直徑神經(jīng)元。4 P-p65在SMIR模型DRG中高表達(dá)有研究報(bào)道,p-p65參與了神經(jīng)病理性疼痛和炎性疼痛的進(jìn)程。本研究中我們檢測(cè)了DRG中p-p65在SMIR模型介導(dǎo)的持續(xù)性術(shù)后痛中的作用。我們發(fā)現(xiàn)PDTC可以阻止SMIR模型大鼠的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與incision組相比,SMIR模型大鼠術(shù)側(cè)L4-6 DRG中的核蛋白p-p65在術(shù)后10天、15天高表達(dá),而PDTC預(yù)處理可以逆轉(zhuǎn)p-p65的高表達(dá)。5 P-p65通過(guò)上調(diào)大鼠DRG中Nav1.7的表達(dá)參與了SMIR模型介導(dǎo)的持續(xù)性術(shù)后痛我們知道,p65是一種很重要的核轉(zhuǎn)錄因子,參與了多種目的基因的轉(zhuǎn)錄。為了進(jìn)一步驗(yàn)證p-p65是否在持續(xù)性術(shù)后痛中參與了對(duì)Nav1.7的調(diào)控,我們通過(guò)鞘內(nèi)注射PDTC來(lái)檢測(cè)Nav1.7的表達(dá)變化,結(jié)果顯示,在術(shù)后10天和15天,PDTC可以阻止Nav1.7的上調(diào)。接著我們做了免疫熒光雙染,發(fā)現(xiàn)p-p65與CGRP,NF-200和IB-4共表達(dá)。免疫共沉淀結(jié)果顯示,p-p65在引物2,7,8,9可以與SCN9A基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合。結(jié)論p-p65介導(dǎo)Nav1.7的上調(diào)參與了SMIR介導(dǎo)的持續(xù)性術(shù)后痛。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R614

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本文編號(hào)：2290805