【摘要】：目的探討microR NA-203(miR-203)對骨肉瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響及機(jī)制。方法通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定miR-203在正常成骨細(xì)胞hF OB及骨肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá),將MG-63細(xì)胞系分成miR-203組、Scramble組、RAB22A組、NC組,Lipofectamine 2000分別轉(zhuǎn)染miR-203 mimics、Scrambles、pcD NA3.1-RAB22A、空白對照質(zhì)粒;通過噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗測定增殖能力,細(xì)胞劃痕實(shí)驗測定遷移能力;通過Target Scan和雙熒光素酶實(shí)驗預(yù)測及驗證miR-203與RAB22A基因的靶向調(diào)節(jié)關(guān)系;RT-PCR測定RAB22A mR NA表達(dá)水平;Western blot測定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 miR-203在骨肉瘤細(xì)胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中較hF OB細(xì)胞系表達(dá)降低。MTT顯示,在培養(yǎng)48和72 h后,miR-203組相對細(xì)胞數(shù)少于Scramble組(P0.05);培養(yǎng)24 h后,Scramble組細(xì)胞相對劃痕面積小于miR-203組(P0.05);雙熒光素酶實(shí)驗示,miR-203與RAB22A基因存在靶向調(diào)節(jié)關(guān)系。RAB22A組相對劃痕面積小于NC組(P0.05);MTT顯示,在培養(yǎng)24、48和72 h后,RAB22A組相對細(xì)胞數(shù)多于NC組(P0.05);RAB22A組與NC組比較,E-cadherin下調(diào)表達(dá),N-cadherin上調(diào)表達(dá),Vimentin上調(diào)表達(dá)。結(jié)論 miR-203通過下調(diào)RAB22A基因表達(dá),抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖與遷移。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of microR NA-203 (miR-203) on proliferation and migration of osteosarcoma cells. Methods the expression of miR-203 in normal osteoblast hFOB and osteosarcoma cell line was determined by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). MG-63 cell line was divided into miR-203 group, scramble group, RAB22A group and NC group, respectively transfected with miR-203 mimicsScramblespcNA3.1-RAB22A, blank control plasmid. The proliferation ability was measured by MTT assay and the migration ability was measured by cell scratch assay. The target regulatory relationship between miR-203 and RAB22A gene was predicted and verified by Target scan and double luciferase assay. RT-PCR was used to detect the expression level of RAB22A mRNA. Western blot was used to detect the expression of E-cadherin N-cadherinnin Vimentin protein. Results the expression of miR-203 in osteosarcoma cell line SAOS-2OS-9607 U2OS and MG-63 was lower than that in HF-OB cell line. After 48 and 72 hours of culture, the number of relative cells in miR-203 group was less than that in scramble group (P0.05), the relative scratch area in scramble group was smaller than that in miR-203 group after 24 hours culture (P0.05), and the relative scratch area in RAB22A group was lower than that in NC group (P0.05). The number of relative cells in RAB22A group was higher than that in NC group (P0.05). The down-regulated expression of N-cadherin and Vimentin upregulation in RAB22A group were higher than those in NC group. Conclusion miR-203 inhibits the proliferation and migration of osteosarcoma cells by down-regulating RAB22A gene expression and inhibiting epithelial mesenchymal transformation.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科;
【分類號】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

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9 朱U，

本文編號：2121285