本文選題：骨關(guān)節(jié)炎 + 基質(zhì)金屬蛋白酶13��； 參考：《華北理工大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的本實驗通過觀察降鈣素對白介素1β(IL-1β)誘導(dǎo)的大鼠軟骨細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、Ⅱ型膠原(ColⅡ)、p38、P-p38及c-myc表達的影響,探討降鈣素是否通過阻斷p38MAPK信號通路抑制IL-1β引起的大鼠軟骨細胞的炎性損傷。方法體外獲得、培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞。采用甲苯胺藍及免疫細胞化學(xué)染色方法鑒定軟骨細胞。MTT法檢測細胞增殖率,確定實驗所需降鈣素濃度。將第2代軟骨細胞分為7組,分別為:A組空白對照組,加入完全培養(yǎng)基;B組IL-1β誘導(dǎo)組,加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基;C組降鈣素對照組,加入含50ng/ml降鈣素的完全培養(yǎng)基;D組IL-1β+降鈣素干預(yù)組,加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加50ng/ml降鈣素;E組IL-1β+SB203580干預(yù)組,加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加10μmol/L SB203580;F組降鈣素+SB203580聯(lián)合對照組,加入含50ng/ml降鈣素和10μmol/L SB203580的完全培養(yǎng)基;G組IL-1β+降鈣素+SB203580聯(lián)合干預(yù)組,加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加入50ng/ml降鈣素和10μmol/L SB203580。24h后做相應(yīng)處理,用免疫細胞化學(xué)染色、Western Blot觀察和檢測MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38及c-myc的表達情況。結(jié)果1甲苯胺藍和ColⅡ免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果說明體外培養(yǎng)細胞為軟骨細胞,能夠用來進行下一步實驗;2 MTT結(jié)果提示濃度在50-500ng/ml范圍的降鈣素對軟骨細胞抑制率無顯著差異,故實驗中的降鈣素濃度選取50ng/ml濃度。3 Western Blot結(jié)果:1)各組p38表達無顯著差異(P0.05);P-p38在B組的表達顯著高于其它各組(P0.05),在D、E、G組的表達高于A組而低于B組(P0.05),D、E、G組間無顯著差異(P0.05);2)c-myc和MMP-13在B組的表達顯著高于其他各組(P0.05),在D、E組的表達高于A組而低于B組(P0.05),D、E組間無顯著差異(P0.05),在G組的表達低于B、D、E組而高于A組(P0.05);3)ColⅡ在B組的表達顯著低于其它各組(P0.05),在D、E、G組的表達低于A組而高于B組(P0.05),D、E、G組間無顯著差異(P0.05);各A、C、F組間無顯著差異(P0.05)。4對MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38及c-myc進行免疫細胞化學(xué)染色,其結(jié)果支持Western Blot結(jié)果。結(jié)論IL-1β可以體外誘導(dǎo)大鼠軟骨細胞發(fā)生炎性損傷。降鈣素對IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細胞炎性損傷具有一定的抑制作用,其機制之一可能是通過抑制p38MAPK信號通路的激活,從而下調(diào)MMP-13的表達,上調(diào)ColⅡ的表達。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of calcitonin on the expression of matrix metalloproteinase 13 (MMP-13), collagen 鈪，

本文編號：2104007