本文選題：骨肉瘤 + 轉(zhuǎn)移　； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：【背景】骨肉瘤是最常見(jiàn)、高表達(dá)CXCR4、具有高肺轉(zhuǎn)移率的原發(fā)惡性骨腫瘤。目前的解剖學(xué)成像手段并不能在分子水平早期診斷病變,如能研發(fā)一種新的具有CXCR4靶點(diǎn)特異性的分子成像模式,對(duì)骨肉瘤原位及肺轉(zhuǎn)移病灶的早期診斷將大有裨益�！灸康摹坷肅XCR4作為分子靶點(diǎn)研發(fā)一種近紅外熒光分子成像造影劑,通過(guò)驗(yàn)證此造影劑與體內(nèi)外骨肉瘤細(xì)胞的結(jié)合特性以及探測(cè)體內(nèi)骨肉瘤肺部轉(zhuǎn)移灶的可行性,為早期檢測(cè)骨肉瘤及其肺轉(zhuǎn)移灶提供一種新的分子成像工具�！痉椒ā�1.合成能夠靶向CXCR4的肽段,并用IR-783近紅外熒光染料標(biāo)記的CXCR4靶點(diǎn)近紅外造影劑CXCR4-IR-783。利用q RT-PCR、蛋白免疫印記實(shí)驗(yàn)以及免疫細(xì)胞熒光化學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證兩種骨肉瘤細(xì)胞系(F5M2與F4)CXCR4的表達(dá)。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染(sh RNA)建立CXCR4敲除的穩(wěn)轉(zhuǎn)F5M2骨肉瘤細(xì)胞系用于驗(yàn)證此造影劑特異性實(shí)驗(yàn)。利用近紅外熒光共聚焦顯微鏡以及Kodak體內(nèi)多光譜成像系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證骨肉瘤細(xì)胞與此染料的結(jié)合實(shí)驗(yàn)。2.活體以及解剖后的裸鼠人骨肉瘤異種移植模型成像分別進(jìn)行CXCR4-IR-783近紅外熒光成像和(或)Micro CT成像。同時(shí)原位腫瘤以及解剖的器官和組織由HE染色進(jìn)行驗(yàn)證,并由免疫組織化學(xué)檢測(cè)骨肉瘤CXCR4的表達(dá)。3.體內(nèi)F5M2原位異種移植裸鼠模型的肺部轉(zhuǎn)移灶探測(cè)由Micro-CT、CXCR4靶點(diǎn)近紅外熒光成像以及18F-FDT PET完成。將動(dòng)物解剖后,各主要器官以及肺組織再次進(jìn)行近紅外體外熒光成像。骨肉瘤的肺部轉(zhuǎn)移灶最終由HE染色進(jìn)行驗(yàn)證,并由免疫組織化學(xué)檢測(cè)其CXCR4表達(dá)�！窘Y(jié)果】1.成功合成了一種CXCR4靶點(diǎn)的近紅外熒光造影劑:CXCR4-IR-783。骨肉瘤細(xì)胞水平結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)CXCR4-IR-783能夠特異結(jié)合于表達(dá)CXCR4的骨肉瘤細(xì)胞。同時(shí),CXCR4-IR-783與高表達(dá)CXCR4的骨肉瘤細(xì)胞結(jié)合表現(xiàn)出時(shí)間依賴性、劑量依賴性,且能夠探測(cè)出數(shù)量?jī)H為100個(gè)的F5M2細(xì)胞團(tuán)。2.CXCR4-IR-783可被人骨肉瘤異種移植裸鼠模型中表達(dá)CXCR4的原位腫瘤細(xì)胞吸收及內(nèi)化。其中高表達(dá)CXCR4的F5M2骨肉瘤荷瘤裸鼠獲得的靶點(diǎn)背景比(4.87)約為低表達(dá)CXCR4的F4骨肉瘤荷瘤裸鼠(2.24)的兩倍。同時(shí),CXCR4-IR-783表現(xiàn)出從體內(nèi)正常器官清除的時(shí)間依賴性。3.利用CXCR4-IR-783進(jìn)行的近紅外熒光成像可以探測(cè)到裸鼠原位種植F5M2骨肉瘤細(xì)胞4周后的自發(fā)性肺部轉(zhuǎn)移灶,同時(shí)利用18F-FDG PET并不能探測(cè)到這些轉(zhuǎn)移灶�！窘Y(jié)論】通過(guò)利用CXCR4靶點(diǎn)特異性近紅外造影劑CXCR4-IR-783進(jìn)行近紅外光學(xué)分子成像可以探測(cè)到CXCR4表達(dá)陽(yáng)性的骨肉瘤原位病灶以及較早期的骨肉瘤轉(zhuǎn)移灶。其可能成為探測(cè)骨肉瘤及其轉(zhuǎn)移的一種具有潛力的分子成像手段。如將此種成像手段結(jié)合解剖學(xué)成像手段將可提高骨肉瘤的早期檢出診斷率。
[Abstract]:Background Osteosarcoma is the most common, highly expressed CXCR 4, with high lung metastasis rate of primary malignant bone tumors. The present anatomical imaging methods can not be used for early diagnosis of lesions at the molecular level, such as the development of a new molecular imaging model with CXCR4 target specificity. It will be helpful for the early diagnosis of osteosarcoma in situ and lung metastases. [objective] to develop a near infrared fluorescence imaging contrast agent using CXCR4 as a molecular target. In order to provide a new molecular imaging tool for early detection of osteosarcoma and its lung metastases, the binding properties of the contrast medium with osteosarcoma cells in vivo and in vitro and the feasibility of detecting pulmonary metastasis in vivo were verified. [methods] 1. The peptide fragment which can target CXCR4 was synthesized and labeled with IR-783 near infrared fluorescent dye. CXCR4-IR-783was used as the target near infrared contrast agent. The expression of CXCR4 in two osteosarcoma cell lines (F5M2 and F4) was confirmed by Q RT-PCR, protein imprinting assay and immunocytofluorescence assay. CXCR4 knockout stably transformed F5M2 osteosarcoma cell line was established by lentivirus transfection (sh RNA) to verify the contrast agent specificity. Near infrared fluorescence confocal microscopy and Kodak multispectral imaging system were used to verify the binding of osteosarcoma cells to this dye. CXCR4-IR-783 near infrared fluorescence imaging and / or micro CT imaging were performed on xenotransplantation models of human osteosarcoma in vivo and after anatomy in nude mice. The expression of CXCR4 in osteosarcoma was detected by immunohistochemistry. The detection of lung metastasis in nude mice model of in vivo F5M2 orthotopic xenotransplantation was performed by micro-CT-CXCR4 target near infrared fluorescence imaging and 18F-FDT PET. After dissecting the animals, the main organs and lung tissues were re-imaged with NIR fluorescence imaging in vitro. The lung metastasis of osteosarcoma was finally verified by HE staining, and the expression of CXCR4 was detected by immunohistochemistry. [results] 1. A CXCR4 target near infrared fluorescent contrast agent: CXCR4-IR-783was successfully synthesized. Osteosarcoma cell level binding assay confirmed that CXCR4-IR-783 could specifically bind to osteosarcoma cells expressing CXCR4. The binding of CXCR4-IR-783 to osteosarcoma cells with high expression of CXCR4 was time-dependent and dose-dependent. Only 100 F5M2 cell clusters could be detected. 2. CXCR4-IR-783 could be absorbed and internalized by in situ tumor cells expressing CXCR4 in xenotransplantation of human osteosarcoma in nude mice. The target background of F5M2 osteosarcoma bearing nude mice with high expression of CXCR4 was about twice as high as that of F4 osteosarcoma bearing nude mice with low expression of CXCR4 (4.87) (2.24). At the same time, CXCR4-IR-783 showed a time dependence on the removal of normal organs from the body. Near-infrared fluorescence imaging using CXCR4-IR-783 could detect spontaneous pulmonary metastasis of F5M2 osteosarcoma cells implanted in situ in nude mice for 4 weeks. At the same time, 18F-FDG PET could not detect these metastatic foci. [conclusion] Near-infrared optical molecular imaging using CXCR4-IR-783 as a target specific contrast agent for CXCR4 can detect in situ lesions of osteosarcoma with CXCR4 positive expression. Early metastases of osteosarcoma. It may be a potential molecular imaging tool for detecting osteosarcoma and its metastasis. If this imaging method is combined with anatomical imaging, the early detection rate of osteosarcoma can be improved.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R738.1

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本文編號(hào)：2067150