本文選題：Syndecan-4 + 椎間盤　； 參考：《蘇州大學》2015年博士論文

【摘要】：第一部分退變腰椎間盤髓核組織Syndecan-4蛋白的表達目的:研究Syndecan-4在退變的腰椎間盤髓核組織中的表達,探討其與腰椎間盤退變的關系。方法:收集在骨科行腰椎后路減壓手術患者的椎間盤標本,共18例。所有標本按照Pfirrmann椎間盤退變分級標準進行分級,退變程度在Ⅳ-Ⅴ級的標本做為椎間盤退變組,共10例。退變程度在?-Ⅲ級的標本做為對照組,共8例。所有椎間盤標本分為兩份,一份置入液氮罐中保存,行RT-PCR檢測,另一份甲醛固定后,行組織學切片檢測。結果:免疫組織化學染色檢測發(fā)現(xiàn),對照組及退變組的椎間盤組織均有Syndecan-4蛋白的表達,但是退變組Syndecan-4表達明顯高于對照組。退變組標本Syndecan-4的平均光密度值也要高于對照組標本,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。RT-PCR結果也顯示,退變組椎間盤內(nèi)Syndecan-4的m RNA表達要明顯高于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:Syndecan-4在退變程度較高的椎間盤內(nèi)高表達,其可能參與椎間盤退變的過程。通過對Syndecan-4的研究,可以為將來在分子生物水平上治療腰椎間盤退變提供參考。第二部分Syndecan-4對人髓核細胞生物學行為的影響目的:研究Syndecan-4表達的變化,對于髓核細胞形態(tài)和增殖能力,以及對髓核細胞功能的影響,為后續(xù)細胞水平的椎間盤退變機制的研究提供實驗基礎。方法:分別使用構建好的Syndecan-4過表達和Syndecan-4抑制病毒轉染人類髓核細胞株,用倒置顯微鏡對這些髓核細胞進行動態(tài)觀察,記錄細胞形態(tài)的不同變化。通過CCK-8法分別檢測不同組別細胞的增殖情況。提取細胞總RNA和蛋白質,通過RT-PCR和Western Blot檢測髓核相關功能因子等的m RNA和蛋白水平。結果:不論在Syndecan-4過表達以及抑制情況下,髓核細胞的形態(tài)并沒有出現(xiàn)明顯的變化。CCK-8檢測顯示,Syndecan-4的表達變化也沒有對于髓核細胞的增殖能力產(chǎn)生明顯影響。Syndecan-4過表達后,Aggrecan、Collagen II和SOX-9的蛋白和m RNA水平均降低,而Collagen X蛋白及m RNA水平則表達升高。在Syndecan-4抑制的情況下結果恰恰相反。結論:Syndecan-4的表達變化并不影響髓核細胞的形態(tài)和增殖能力,但可以影響髓核細胞的功能,參與了椎間盤髓核細胞的退變過程。Syndecan-4的過表達可以促進髓核細胞的退行性改變。第三部分Syndecan-4對JNK/p53通路的影響目的:研究Syndecan-4對JNK通路以及下游的p53通路的影響,以及在髓核細胞退變過程中發(fā)揮作用。方法:在Syndecan-4過表達和抑制的髓核細胞株檢測JNK及p JNK蛋白的水平,以及p53蛋白及其靶基因mdm2和p21的水平。通過外源性的過表達p53以及阻斷JNK通路,抑制p53的表達,觀察髓核細胞的相關功能因子的改變。結果:Syndecan-4過表達能顯著增加JNK蛋白的磷酸化水平和總表達水平,而抑制Syndecan-4則能明顯降低其表達水平。同樣地,Syndecan-4過表達后,髓核細胞中的p53蛋白及其靶基因mdm2和p21的表達水平明顯增加。p53過表達能顯著降低Aggrecan、Collagen II蛋白和m RNA水平。阻斷JNK通路,抑制了p53的表達,髓核細胞的相關功能因子則明顯增加。結論:Syndecan-4可以激活JNK信號通路,進而激活下游的p53信號通路,促進髓核細胞的退變。抑制JNK信號通路的活性,下調(diào)p53的表達,可以緩解髓核細胞的退變。第四部分Syndecan-4在兔椎間盤退變模型中的作用目的:建立一個兔椎間盤退變模型,探討Syndecan-4在椎間盤退變中的作用,及可能存在的相關機制。方法:選取正常體重成年新西蘭大白兔,使用18G套管針造模,造模成功后,分別注入Syndecan-4 si RNA,Control si RNA及生理鹽水。8周后處死實驗動物,進行MRI,組織學檢查及免疫組化分析。結果:退變椎間盤內(nèi)注射Syndecan-4 si RNA后,MRI檢測顯示椎間盤信號強度改善,明顯好于對照組(p0.05)。免疫組化結果分析表明與對照組相比,椎間盤組織Collagen II含量明顯增加,JNK和p53陽性表達明顯減少(p0.05)。結論:椎間盤內(nèi)注射Syndecan-4 si RNA能延緩其退變,其機制主要是通過抑制Syndecan-4的生成,抑制JNK/p53途徑而實現(xiàn)的。
[Abstract]:The expression of Syndecan - 4 in the nucleus pulposus of lumbar intervertebral disc was studied . The results showed that the expression of Syndecan - 4 was significantly higher than that in the control group . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 .
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R681.5

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本文編號：2057635