本文選題：骨肉瘤 + 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5��； 參考：《蘭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景在骨肉瘤的診治過程中,如何有效地降低復(fù)發(fā)和控制轉(zhuǎn)移,提高患者的長(zhǎng)期生存率,是骨肉瘤治療的關(guān)鍵所在。在早期就能夠判斷骨肉瘤患者的預(yù)后,找到監(jiān)測(cè)骨肉瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的敏感標(biāo)記物是臨床上急需解決的問題。EKR5作為MAPK家族中的新成員,在腫瘤形成、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等機(jī)制方面具有重要的意義和潛在的研究?jī)r(jià)值,然而關(guān)于ERK5在骨肉瘤細(xì)胞侵襲及遷移方面的研究目前國(guó)內(nèi)外研究較少。目的探討ERK5在人骨肉瘤組織的表達(dá)及其臨床意義。然后,進(jìn)一步在體外細(xì)胞水平研究了ERK5對(duì)骨肉瘤細(xì)胞侵襲及遷移的作用,證實(shí)其在骨肉瘤中的生物學(xué)作用。方法第一部分:選取71例骨肉瘤組織和40例正常骨組織,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ERK5表達(dá),判斷其與骨肉瘤患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。使用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)3例新鮮骨肉瘤組織標(biāo)本中ERK5表達(dá)情況。第二部分:采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度的XMD8-92特異性抑制ERK5后對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖活性的影響;采用Transwell小室侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的XMD8-92抑制ERK5后骨肉瘤細(xì)胞侵襲和遷移力的變化;蛋白質(zhì)免疫印跡和免疫熒光法測(cè)定抑制ERK5后ERK5、p-ERK5、MMP-2、MMP-9、ERK1/2及p-ERK1/2的表達(dá)情況。結(jié)果第一部分:骨肉瘤組織中ERK5陽性表達(dá)率85.9%(61/71)明顯高于正常骨組織12.5%(5/40),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)顯示骨肉瘤組織中ERK5的表達(dá)水平較正常骨組織高(P值均0.05)。ERK5陽性表達(dá)與Enneking分期和轉(zhuǎn)移相關(guān)(P值均0.05)。Kaplan-Meier生存分析顯示在骨肉瘤組織中ERK5陽性表達(dá)組患者生存時(shí)間均短于陰性表達(dá)組(P0.05)。單因素COX回歸分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小、Enneking分期、轉(zhuǎn)移、ERK5陽性表達(dá)與患者總生存時(shí)間相關(guān)(P值均0.05);多因素COX回歸分析證實(shí)Enneking分期、轉(zhuǎn)移、ERK5蛋白的陽性表達(dá)可作為骨肉瘤患者獨(dú)立的預(yù)后因子(P值均0.05)。第二部分:CCK-8法顯示骨肉瘤MG-63細(xì)胞在XMD8-92濃度為1μM、5μM,時(shí)間為48小時(shí)時(shí)增殖活性明顯被抑制;Transwell小室侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5μM XMD8-92組穿過Transwell小室膜的細(xì)胞數(shù)明顯少于1μM XMD8-92及Control組;細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示24h后,Control組劃痕愈合較快,細(xì)胞遷移距離大;而5μM XMD8-92和1μM XMD8-92組MG-63細(xì)胞遷移距離明顯短于Control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:5μM和1μM XMD8-92可明顯使磷酸化ERK5(p-ERK5)的表達(dá)明顯降低,與Control組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.05)。而ERK5、ERK1/2和p-ERK1/2較Control組無明顯變化,說明XMD8-92特異性抑制ERK5后對(duì)ERK1/2的表達(dá)無明顯影響。XMD8-92抑制ERK5濃度為1μM和5μM時(shí),MMP-2、MMP-9的表達(dá)明顯下調(diào)(P值均0.05)。免疫熒光染色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與Control組相比,5μM XMD8-92和1μM XMD8-92組明顯抑制ERK5進(jìn)入細(xì)胞核,其表達(dá)明顯降低(P值均0.05)。同時(shí)MMP-2及MMP-9的表達(dá)明顯下調(diào)(P值均0.05)。結(jié)論ERK5在骨肉瘤組織中的高表達(dá),與骨肉瘤的病理特征及預(yù)后相關(guān);ERK5可能在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的過程中起著重要作用。XMD8-92抑制ERK5的表達(dá)可明顯降低骨肉瘤MG-63細(xì)胞的侵襲和遷移能力,表明ERK5對(duì)骨肉瘤的侵襲、遷移等生物學(xué)行為有重要影響。
[Abstract]:In the first part , we examined the expression of ERK562 and its clinical significance in osteosarcoma . The results showed that the expression of ERK562 was significantly higher in osteosarcoma . Compared with control group , the expression of MMP - 2 and MMP - 9 decreased significantly ( P < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R738

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9 朱U，

本文編號(hào)：2056820