本文選題：Modic改變 + 椎間盤退變　； 參考：《川北醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過免疫組化、PCR、Western blot等方法,檢測伴Modic改變下腰痛患者腰椎間盤終板、髓核組織中AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表達情況。探討其在Modic改變及腰椎間盤退變發(fā)生中的作用。方法:研究川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院2015年10月~2016年6月因下腰痛或腰椎間盤退變性疾病行手術治療病人MRI,將發(fā)生Modic改變的患者納入實驗組,未發(fā)生Modic改變的患者納入對照組。收集上述病人術中切取的終板及髓核組織。采用H.E染色對椎間盤細胞進行鑒定并觀察細胞密度及退變情況。分別采用免疫組化、RT-PCR、Western Blot方法檢測終板、髓核組織中AIM2、NLRP3炎性體及其下游因子Caspase-1、IL-1β的表達情況。測得數據應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件處理,統(tǒng)計作圖應用Graph Pad Prism 6.0軟件,計量資料用均數±標準差表示,正態(tài)性檢驗采用單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗,組間比較采用獨立樣本t檢驗,相關性分析采用Pearson相關分析,P0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結果:1.H.E染色結果:對照組髓核細胞主要以類軟骨細胞及成纖維細胞為主,分別呈圓形或扁卵圓形,胞核較大,有“核團聚”現象;基質呈不均勻波浪形。實驗組髓核細胞密度較對照組明顯降低,有新生血管長入。對照組的終板細胞以軟骨細胞為主,位于軟骨陷窩中,軟骨囊和細胞之間有較大空隙;胞核較小,呈橢圓形;基質均勻分布。實驗組軟骨終板出現裂隙,有新生血管長入,軟骨囊和細胞之間的空隙尤為明顯,細胞密度較對照組降低。2.免疫組織化學染色結果:AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β這四種蛋白均表達于髓核、終板細胞的細胞質和細胞核。AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β在發(fā)生Modic改變的髓核、終板中均呈強陽性表達。AIM2在未發(fā)生Modic改變的髓核、終板中分別呈中等陽性及陰性表達,NLRP3在未發(fā)生Modic改變的髓核、終板中分別呈中等陽性及弱陽性表達,Caspase-1在未發(fā)生Modic改變的髓核、終板中分別呈弱陽性及陰性表達,IL-1β在未發(fā)生Modic改變的髓核、終板中均呈中等陽性表達。3.RNA提取結果:通過液氮研磨、玻璃勻漿器研磨、塑料研磨棒研磨所提取的RNA濃度分別為(37.44±35.93)ng/μl、(208.0±41.24)ng/μl、(320.7±70.22)ng/μl;OD260/280值分別為(1.657±0.1272)、(1.463±0.1265)、(1.830±0.04262),OD260/230值分別為(0.1346±0.08283)、(0.4386±0.2653)、(0.6662±0.2512)。通過液氮研磨、玻璃勻漿器研磨提取的RNA在進行RNA完整性驗證時,未見任何條帶;而通過塑料研磨棒提取的新鮮組織的RNA,可見明亮的5S、18S、28S三個條帶。4.RT-PCR及Western blot測定結果:將發(fā)生Modic改變的終板、髓核分別與未發(fā)生Modic改變的終板、髓核相比,AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β的m RNA表達水平(P0.05)及蛋白表達水平(P0.01)均升高,差異具有統(tǒng)計學意義。將發(fā)生Modic改變的終板與髓核相比或者將未發(fā)生Modic改變的終板與髓核相比,AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β在終板和髓核的m RNA表達水平及蛋白表達水未見明顯升高,差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.對NLRP3、AIM2蛋白的平均相對灰度值進行Pearson相關性分析,結果顯示NLRP3、AIM2的相關系數為0.993,P=0.000,P0.01,具有統(tǒng)計學意義,兩者具備正相關關系。對AIM2蛋白與Caspase-1蛋白進行相關性分析,兩者相關系數為0.993,P=0.000,P0.01,具有統(tǒng)計學意義,兩者具備正相關關系。AIM2蛋白與IL-1β蛋白的相關系數為0.988,P=0.000,P0.01,具有統(tǒng)計學意義,兩者具備正相關關系。結論:1.成功地提取了新鮮的椎間盤髓核及終板組織的RNA。塑料研磨棒研磨法提取的RNA,濃度高、純度理想、結構完整,是分子生物學實驗的理想材料。2.發(fā)生Modic改變的終板、髓核分別與未發(fā)生Modic改變的終板、髓核相比,AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表達水平均顯著升高。且AIM2與NLRP3的蛋白表達水平呈正相關,表明AIM2及NLRP3信號通路共同促進了Modic改變的發(fā)生發(fā)展。3.在發(fā)生或未發(fā)生Modic改變的終板、髓核中,AIM2、NLRP3、Caspase-1、IL-1β在這兩個不同部位的表達水平無明顯差異。表明髓核與終板中的AIM2、NLRP3共同參與了Modic改變的發(fā)生發(fā)展。4.AIM2與NLRP3炎性體的發(fā)現或許可以為Modic改變或椎間盤退變提供新的治療靶點。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of Malloon in lumbar disc endplate and nucleus pulposus by immunohistochemistry , polymerase chain reaction ( PCR ) and Western blot . The mRNA concentration of IL - 1尾 in nucleus pulposus and endplate was ( 37.44 鹵 35.93 ) ng / 渭l , ( 203.7 鹵 41.24 ) ng / 渭l , ( 0.4386 鹵 0.2653 ) , ( 0.6662 鹵 0.2512 ) respectively . There was no significant difference between the expression levels of NLRP3 , Caspase - 1 and IL - 1尾 in the expression of mRNA and protein expression in the endplate and nucleus . The correlation coefficient between the two groups was 0.993 , P = 0.000 , P0.01 , and the correlation coefficient was 0.993 , P = 0.000 , P0.01 .
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R681.53

【參考文獻】

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本文編號：1990767