本文選題：BMSCs-MVs + 軟骨細(xì)胞��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:(1)培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探索及完善分離、提取及鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicle,BMSCs-MVs)系統(tǒng)方法;(2)通過(guò)BMSCs-MVs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng),通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)目的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑上下游信號(hào)分子的含量變化。分析所得以期探索BMSCs-MVs發(fā)揮增殖作用中P38-MAPK的調(diào)控機(jī)制。方法:(1)2月齡SD大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定;(2)BMSCs-MVs的分離和鑒定;(3)3月齡SD大鼠軟骨細(xì)胞的獲取;(4)選取多孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的12孔,分為四組,每組3孔。首先接種軟骨細(xì)胞。分組設(shè)置:A組:空白對(duì)照組;B組:BMSCs-MVs組;C組:P38-MAPK信號(hào)通路抑制劑組;D組:BMSCs-MVs+P38-MAPK信號(hào)通路抑制劑組,作用24小時(shí)后,提取各孔R(shí)NA,用RT-PCR分別檢測(cè)P38-MAPK信號(hào)通路上游特異性基因MKK3、MKK6;靶基因(抗凋亡基因Bcl-2);下游特異性基因cREB-1;凋亡執(zhí)行蛋白(Casp3)的表達(dá)。結(jié)果:(1)C組較A組上游特異性基因MKK3、MKK6較A組表達(dá)升高(P0.05)、下游特異性基因cREB-1表達(dá)下降(P0.05),證明P38-MAPK信號(hào)通道已被經(jīng)典抑制劑SB203580阻斷;(2)MKK3、MKK6在B組、C組、D組較A組表達(dá)均升高(P0.05);(3)下游特異性基因cREB-1在B組、C組、D組表達(dá)均下降(P0.05),以最后一組為最。(4)較之A組,B組、C組、D組靶基因(抗凋亡基因Bcl-2)表達(dá)升高(P0.05),凋亡執(zhí)行蛋白(Casp3)表達(dá)高低趨勢(shì)各有不同。結(jié)論:BMSCs-MVs對(duì)軟骨細(xì)胞的促增值作用可通過(guò)對(duì)抗軟骨細(xì)胞凋亡的層面保護(hù)軟骨細(xì)胞、特異性阻斷促凋亡的P38-MAPK信號(hào)通路實(shí)現(xiàn),但不能排除多基因、多通道的共同作用。
[Abstract]:Objective to culture bone marrow mesenchymal stem cells from bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of SD rats, to explore and perfect the isolation, extraction and identification of bone marrow mesenchymal stem cells-derived micromesenchymal stem cells (BMSCs) from bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs-MVs2) and to co-culture them with chondrocytes by BMSCs-MVs. The changes of upstream and downstream signal molecules in target signal transduction pathway were detected by RT-PCR technique. The aim of this study was to explore the regulatory mechanism of P38-MAPK in the process of BMSCs-MVs proliferation. Methods BMSCs was isolated from 2-month-old Sprague-Dawley rats. The culture and identification of BMSCs-MVs of Sprague-Dawley rats at the age of 3 months were used to isolate and identify the chondrocytes of Sprague-Dawley rats at the age of 3 months. The 12 holes in the porous cell culture plate were selected and divided into four groups with 3 holes in each group. Chondrocytes were first inoculated. Group A: control group: group B: BMSCs-MVs, group C, group C: P38-MAPK signal pathway inhibitor group, group D, group D: BMSCs-MVs P38-MAPK signal pathway inhibitor group, 24 hours after exposure. RT-PCR was used to detect the expression of upstream specific gene MKK3mK6 and target genes (anti-apoptotic gene Bcl-2N; downstream specific gene cREB-1; apoptotic executive protein casp3) of P38-MAPK signaling pathway. Results compared with A group, the expression of MKK3MKK6 gene in group C was higher than that in group A (P 0.05), and the expression of downstream specific gene cREB-1 was decreased (P 0.05). It is proved that the signal channel of P38-MAPK has been blocked by SB203580, a classical inhibitor, in group B, group C, and group D is higher than group A (P 0.05). The expression of downstream specific gene cREB-1 in group B and C was significantly lower than that in group A (P 0.05). The expression of target gene (anti-apoptotic gene Bcl-2) in group A was significantly higher than that in group B (P 0.05), and the expression trend of apoptotic executive protein (AEP) was different. Conclusion the proliferation of chondrocytes can be stimulated by the P38-MAPK signaling pathway of chondrocytes, which can be blocked by the protection of chondrocytes against chondrocyte apoptosis, but the co-action of multi-gene and multi-channel can not be excluded.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R684.3

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本文編號(hào)：1974601