本文選題：脊髓康 + 大鼠�。� 參考：《南京中醫(yī)藥大學》2015年博士論文

【摘要】：背景脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)后神經(jīng)再生困難是世界性難題,目前認為主要與中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境內(nèi)抑制性因素相關。Nogo蛋白、髓磷脂相關糖蛋白(myelin-associated glycoprotein, MAG)和少突膠質(zhì)細胞髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte myelin glycoprotein, OMgp)目前被認為是影響脊髓損傷修復的髓磷脂抑制因子,三者均可與Nogo受體(nogo receptor, NgR)結合,能抑制成熟中樞神經(jīng)元軸突再生及誘導生長錐潰變,從而達到抑制脊髓損傷修復。其中,Nogo蛋白抑制作用最為明顯,針對Nogo-NgR通路在脊髓損傷修復中作用機制探討已成為目前國內(nèi)外研究熱點。中藥“脊髓康”作為我們臨床經(jīng)驗方,前期研究發(fā)現(xiàn)具有鎮(zhèn)痛、抗炎、促進神經(jīng)營養(yǎng)因子表達等作用。然而,“脊髓康”促進脊髓損傷修復的作用機制尚不清楚。為此,本研究通過制備大鼠脊髓損傷模型,觀察脊髓損傷后脊髓組織中Nogo-NgR通路的動態(tài)表達變化,探討“脊髓康”能否通過干預Nogo-NgR信號通路改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境以促進脊髓損傷后神經(jīng)再生。目的按照改良Allen's法制備脊髓損傷模型,觀察大鼠脊髓損傷后脊髓組織中Nogo、NgR的免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR的動態(tài)表達情況,探討Nogo-NgR信號通路在神經(jīng)再生過程中的作用和意義；觀察中藥“脊髓康”對大鼠脊髓損傷后脊髓組織病理組織結構、細胞凋亡、生長相關蛋白(growth associated protein-43, GAP-43)及Nogo-A、NgR的影響,探討其促進脊髓損傷后神經(jīng)再生的作用機制。方法1、將108只SD大鼠隨機分成正常組(N組)、假手術組(A組)和模型組(B組),每組36只。N組不做任何處理,A組咬除T10棘突及椎板,避免損傷脊髓,B組按照改良Allen's法造模,分別于干預后24h、3d、7d、14 d處死大鼠,每組9只,以免疫組化及Western blottingting檢測各組大鼠脊髓組織中Nogo-A、NgR蛋白的表達變化,以熒光定量PCR檢測：Nogo-A、NgR mRNA的表達變化。2、將180只SD大鼠隨機分為假手術組(A)、模型組(B)、強的松組(C)、脊髓康高劑量組(D)、脊髓康中劑量組(E)、脊髓康低劑量組(F),每組30只。B、C、D、E、F組均按照改良Allen's法制備脊髓損傷模型,麻醉蘇醒后C組大鼠灌胃給藥強的松0.06g/(kg.d), D組給藥“脊髓康”50g/(kg.d),E組給藥“脊髓康"25g/(kg.d),F組給藥“脊髓康”12.5g/(kg.d), A組和B組均給予同等劑量的生理鹽水灌胃。觀察各組大鼠在3d、7d、14d時間點HE染色、透視電鏡、細胞凋亡、GAP-43蛋白、Nogo-A、NgR蛋白及mRNA的表達變化。結果1、Nogo-NgR信號通路在大鼠脊髓損傷組織中的動態(tài)表達及意義免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR顯示,與假手術組比較,SCI后24h模型組Nogo-A、NgR蛋白和mRNA表達較低,3d后下降至最低,7d后迅速上升達到高峰,至14d逐漸下降,但仍高于假手術組。2、“脊髓康”對大鼠脊髓損傷后組織形態(tài)結構的影響HE染色顯示,SCI后3d模型組出現(xiàn)明顯脊髓組織結構破壞,神經(jīng)元固縮、壞死,7d時脊髓組織結構進一步破壞,并可見膠質(zhì)細胞浸潤,14d時脊髓組織膠質(zhì)細胞數(shù)量較7d增多,并見較多炎癥細胞浸潤。而強的松組及脊髓康高、中、低組在各時間點脊髓組織結構損傷均較模型組輕微,尤以強的松組和脊髓康中劑量組明顯。透視電鏡顯示,SCI后3d模型組出現(xiàn)神經(jīng)元細胞膜破裂,線粒體腫脹明顯,染色質(zhì)邊集及核碎裂,髓鞘結構紊亂,7d時損傷呈進行性加重。而強的松組及脊髓康高、中、低組在各時間點脊髓組織結構損傷均較模型組輕微,尤以強的松組和脊髓康中劑量組明顯。3、“脊髓康”對大鼠脊髓損傷后細胞凋亡及GAP-43蛋白的影響細胞凋亡免疫組化顯示,SCI后各時間點,模型組凋亡細胞數(shù)均為最多(P0.01)。術后3d時強的松組凋亡細胞數(shù)最少(P0.05),術后7d時強的松組與高劑量組療效優(yōu)于其余各組,術后14d時強的松組與中劑量組療效較優(yōu)。GAP-43蛋白免疫組化顯示,脊髓損傷各組在各時間點GAP-43蛋白表達均出現(xiàn)不同程度增高,且均在7d時達到最高(P0.05)。在3d、7d、14d各時間點,強的松組和中劑量組GAP-43蛋白表達均明顯高于模型組(P0.01)。在7d、14d時,脊髓康高、低劑量組GAP-43蛋白表達亦明顯高于模型組(P0.05)4、中藥“脊髓康”調(diào)節(jié)Nogo-NgR信號通路的機制研究免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR顯示,大鼠SCI后3d時模型組、強的松組及脊髓康高、中、低各組Nogo-A、NgR蛋白及mRNA表達量較低,7d時表達量明顯增高,14d時出現(xiàn)不同程度下降。與模型組比較,SCI后3d、7d、14d時強的松組和脊髓康中劑量組Nogo-A、NgR蛋白及mRNA表達量差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1.大鼠SCI后,Nogo-A、NgR蛋白在早期一過性下降后均在7d時上升達到最高峰,并可持續(xù)保持高水平表達,可能是造成脊髓損傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)再生困難的重要原因之一。2.“脊髓康”可減少SCI后細胞凋亡,維持髓鞘板層結構的穩(wěn)定,上調(diào)GAP-43蛋白的表達,抑制脊髓損傷區(qū)Nogo和NgR蛋白的表達。其中,脊髓康中劑量組療效優(yōu)于低、高劑量組,與強的松相似。這可能是“脊髓康”改善軸突再生微環(huán)境,從而阻斷髓鞘源神經(jīng)再生抑制因子作用,促進脊髓損傷修復的作用機制之一。
[Abstract]:In this study , the effects of Nogo receptor ( Nogo receptor ) on spinal cord injury were investigated .
Methods One hundred and eighty SD rats were randomly divided into normal group ( group N ) , model group ( group A ) and model group ( group B ) . The changes of apoptosis , GAP - 43 protein , Nogo - A , nR protein and mRNA were observed . Results 1 . The expression of Nogo - A , NR protein and mRNA in spinal cord injury of rats were lower than those in sham operation group . The expression of GAP - 43 protein in spinal cord injury group was significantly higher than that in model group ( P0.05 ) . At 7 d , 7 d , 14 d , the expression of GAP - 43 protein in the group of prednisone group and middle dose group was significantly higher than that in model group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

【參考文獻】

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本文編號：1889749