本文選題：脊髓康 + 大鼠��； 參考：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)后神經(jīng)再生困難是世界性難題,目前認(rèn)為主要與中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境內(nèi)抑制性因素相關(guān)。Nogo蛋白、髓磷脂相關(guān)糖蛋白(myelin-associated glycoprotein, MAG)和少突膠質(zhì)細(xì)胞髓磷脂糖蛋白(oligodendrocyte myelin glycoprotein, OMgp)目前被認(rèn)為是影響脊髓損傷修復(fù)的髓磷脂抑制因子,三者均可與Nogo受體(nogo receptor, NgR)結(jié)合,能抑制成熟中樞神經(jīng)元軸突再生及誘導(dǎo)生長(zhǎng)錐潰變,從而達(dá)到抑制脊髓損傷修復(fù)。其中,Nogo蛋白抑制作用最為明顯,針對(duì)Nogo-NgR通路在脊髓損傷修復(fù)中作用機(jī)制探討已成為目前國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。中藥“脊髓康”作為我們臨床經(jīng)驗(yàn)方,前期研究發(fā)現(xiàn)具有鎮(zhèn)痛、抗炎、促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)等作用。然而,“脊髓康”促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)的作用機(jī)制尚不清楚。為此,本研究通過制備大鼠脊髓損傷模型,觀察脊髓損傷后脊髓組織中Nogo-NgR通路的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化,探討“脊髓康”能否通過干預(yù)Nogo-NgR信號(hào)通路改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境以促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)再生。目的按照改良Allen's法制備脊髓損傷模型,觀察大鼠脊髓損傷后脊髓組織中Nogo、NgR的免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況,探討Nogo-NgR信號(hào)通路在神經(jīng)再生過程中的作用和意義；觀察中藥“脊髓康”對(duì)大鼠脊髓損傷后脊髓組織病理組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(growth associated protein-43, GAP-43)及Nogo-A、NgR的影響,探討其促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)再生的作用機(jī)制。方法1、將108只SD大鼠隨機(jī)分成正常組(N組)、假手術(shù)組(A組)和模型組(B組),每組36只。N組不做任何處理,A組咬除T10棘突及椎板,避免損傷脊髓,B組按照改良Allen's法造模,分別于干預(yù)后24h、3d、7d、14 d處死大鼠,每組9只,以免疫組化及Western blottingting檢測(cè)各組大鼠脊髓組織中Nogo-A、NgR蛋白的表達(dá)變化,以熒光定量PCR檢測(cè)：Nogo-A、NgR mRNA的表達(dá)變化。2、將180只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A)、模型組(B)、強(qiáng)的松組(C)、脊髓康高劑量組(D)、脊髓康中劑量組(E)、脊髓康低劑量組(F),每組30只。B、C、D、E、F組均按照改良Allen's法制備脊髓損傷模型,麻醉蘇醒后C組大鼠灌胃給藥強(qiáng)的松0.06g/(kg.d), D組給藥“脊髓康”50g/(kg.d),E組給藥“脊髓康"25g/(kg.d),F組給藥“脊髓康”12.5g/(kg.d), A組和B組均給予同等劑量的生理鹽水灌胃。觀察各組大鼠在3d、7d、14d時(shí)間點(diǎn)HE染色、透視電鏡、細(xì)胞凋亡、GAP-43蛋白、Nogo-A、NgR蛋白及mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果1、Nogo-NgR信號(hào)通路在大鼠脊髓損傷組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR顯示,與假手術(shù)組比較,SCI后24h模型組Nogo-A、NgR蛋白和mRNA表達(dá)較低,3d后下降至最低,7d后迅速上升達(dá)到高峰,至14d逐漸下降,但仍高于假手術(shù)組。2、“脊髓康”對(duì)大鼠脊髓損傷后組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響HE染色顯示,SCI后3d模型組出現(xiàn)明顯脊髓組織結(jié)構(gòu)破壞,神經(jīng)元固縮、壞死,7d時(shí)脊髓組織結(jié)構(gòu)進(jìn)一步破壞,并可見膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn),14d時(shí)脊髓組織膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較7d增多,并見較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。而強(qiáng)的松組及脊髓康高、中、低組在各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織結(jié)構(gòu)損傷均較模型組輕微,尤以強(qiáng)的松組和脊髓康中劑量組明顯。透視電鏡顯示,SCI后3d模型組出現(xiàn)神經(jīng)元細(xì)胞膜破裂,線粒體腫脹明顯,染色質(zhì)邊集及核碎裂,髓鞘結(jié)構(gòu)紊亂,7d時(shí)損傷呈進(jìn)行性加重。而強(qiáng)的松組及脊髓康高、中、低組在各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織結(jié)構(gòu)損傷均較模型組輕微,尤以強(qiáng)的松組和脊髓康中劑量組明顯。3、“脊髓康”對(duì)大鼠脊髓損傷后細(xì)胞凋亡及GAP-43蛋白的影響細(xì)胞凋亡免疫組化顯示,SCI后各時(shí)間點(diǎn),模型組凋亡細(xì)胞數(shù)均為最多(P0.01)。術(shù)后3d時(shí)強(qiáng)的松組凋亡細(xì)胞數(shù)最少(P0.05),術(shù)后7d時(shí)強(qiáng)的松組與高劑量組療效優(yōu)于其余各組,術(shù)后14d時(shí)強(qiáng)的松組與中劑量組療效較優(yōu)。GAP-43蛋白免疫組化顯示,脊髓損傷各組在各時(shí)間點(diǎn)GAP-43蛋白表達(dá)均出現(xiàn)不同程度增高,且均在7d時(shí)達(dá)到最高(P0.05)。在3d、7d、14d各時(shí)間點(diǎn),強(qiáng)的松組和中劑量組GAP-43蛋白表達(dá)均明顯高于模型組(P0.01)。在7d、14d時(shí),脊髓康高、低劑量組GAP-43蛋白表達(dá)亦明顯高于模型組(P0.05)4、中藥“脊髓康”調(diào)節(jié)Nogo-NgR信號(hào)通路的機(jī)制研究免疫組化、Western blottingting及熒光定量PCR顯示,大鼠SCI后3d時(shí)模型組、強(qiáng)的松組及脊髓康高、中、低各組Nogo-A、NgR蛋白及mRNA表達(dá)量較低,7d時(shí)表達(dá)量明顯增高,14d時(shí)出現(xiàn)不同程度下降。與模型組比較,SCI后3d、7d、14d時(shí)強(qiáng)的松組和脊髓康中劑量組Nogo-A、NgR蛋白及mRNA表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.大鼠SCI后,Nogo-A、NgR蛋白在早期一過性下降后均在7d時(shí)上升達(dá)到最高峰,并可持續(xù)保持高水平表達(dá),可能是造成脊髓損傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)再生困難的重要原因之一。2.“脊髓康”可減少SCI后細(xì)胞凋亡,維持髓鞘板層結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定,上調(diào)GAP-43蛋白的表達(dá),抑制脊髓損傷區(qū)Nogo和NgR蛋白的表達(dá)。其中,脊髓康中劑量組療效優(yōu)于低、高劑量組,與強(qiáng)的松相似。這可能是“脊髓康”改善軸突再生微環(huán)境,從而阻斷髓鞘源神經(jīng)再生抑制因子作用,促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:In this study , the effects of Nogo receptor ( Nogo receptor ) on spinal cord injury were investigated .
Methods One hundred and eighty SD rats were randomly divided into normal group ( group N ) , model group ( group A ) and model group ( group B ) . The changes of apoptosis , GAP - 43 protein , Nogo - A , nR protein and mRNA were observed . Results 1 . The expression of Nogo - A , NR protein and mRNA in spinal cord injury of rats were lower than those in sham operation group . The expression of GAP - 43 protein in spinal cord injury group was significantly higher than that in model group ( P0.05 ) . At 7 d , 7 d , 14 d , the expression of GAP - 43 protein in the group of prednisone group and middle dose group was significantly higher than that in model group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R651.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1889749