P2X3受體在神經(jīng)病理性疼痛中上調(diào)對(duì)JNK和P38活化的影響
本文選題:C-Jun + N。 參考:《第二軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文
【摘要】:目的:通過慢性背根神經(jīng)節(jié)壓迫(CCD)的大鼠神經(jīng)病理性疼痛(NP)模型,觀察P2X3受體激活后能否引起JNK和P38在DRG上表達(dá)和活化的改變,進(jìn)一步探討P2X3受體在NP中的作用機(jī)制。方法:1.用12只Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建NP模型(CCD)組(n=6)及其假手術(shù)(SHAM)組(n=6):在手術(shù)前1d,術(shù)后第1、4、7、10、14、21、28和35d測量雙側(cè)后足的50%機(jī)械縮腿痛閾閾值(50%MPWT)。2.檢測CCD大鼠術(shù)后28d內(nèi)的P2X3受體在DRG上的表達(dá)趨勢:用15只SD雄性大鼠隨機(jī)分成未處理大鼠(NAIVE)組(n=3)和構(gòu)建CCD模型(n=12);CCD大鼠隨機(jī)在術(shù)后第7d (POD07) (n=3)、術(shù)后第14d (POD14) (n=3)、術(shù)后第21d(POD21) (n=3)或術(shù)后第28d (POD28) (n=3)快速取材L4、L5 DRG,應(yīng)用蛋白定量檢測P2X3受體水平。3.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動(dòng)劑后引發(fā)的痛行為之一抬腿的持續(xù)時(shí)間變化:將36只SD雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建CCD組(18只)和SHAM組(18只),18只大鼠分別又隨機(jī)在術(shù)后第14d給予足底注射:H2O(n=6),p,y-meATP 100nmol (n=6)和β,γ-meATP 500nmol (n=6),體積均為501μl;檢測各組給藥后每分鐘抬腿時(shí)間(PLTPM)。4.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后JNK、pJNK (JNK磷酸化活化型)、P38和pP38(P38磷酸化活化型)在DRG上的表達(dá)變化:將9只SD雄性大鼠隨機(jī)分成NAIVE組(n=3)、SHAM組(n=3)和CCD組(n=3);快速取材L4和L5 DRG,應(yīng)用蛋白定量檢測JNK、pJNK、P38和pP38。5.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動(dòng)劑后P2X3、JNK、 pJNK、P38和pP38在DRG上的表達(dá)變化:將18只SD雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建CCD組(9只)和SHAM組(9只),9只大鼠分別又隨機(jī)在術(shù)后第14d給予足底注射:H2O(n=3), β,γ-meATP 100nmol (n=3)和β,γ-meATP 500nmol (n=3),體積均為50μl;快速取材L4和L5 DRG,應(yīng)用蛋白定量檢測P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38。結(jié)果:1.CCD模型大鼠術(shù)后第1、4、7、10、14、21、28、35d CCD組的手術(shù)側(cè)50%MPWT比較自身手術(shù)對(duì)側(cè)或SHAM組的手術(shù)側(cè)后足均顯著下降(P0.001);2.CCD模型大鼠DRG上P2X3在POD14組與NAIVE組比較表達(dá)增強(qiáng)(P0.05);3.在18只SHAM大鼠,給予β,γ-meATP 100nmol后第1min與給予H20比較PLTPM明顯增加(P0.01),在給予β,γ-meATP 500nmol后第1min與給予H2O比較PLTPM顯著增加(P0.001);在18只CCD大鼠,給予β,γ-meATP 100nmol后第1min與給予H2O比較PLTPM顯著增加(P0.001);給予β,γ-meATP 500nmol后第1、2、3、5min與給予H20比較PLTPM顯著增加(P0.001),第6min PLTPM增加(P0.05);此外,給予β,γ-meATP 500nmol的CCD大鼠和給予β,γ-meATP 500nmol的SHAM大鼠相比在給藥后第2min PLTPM顯著增加(P0.001)。4. NAIVE組、SHAM組和CCD組組間比較DRG上JNK、pJNK、P38和pP38都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變化。5.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動(dòng)劑后P2X3、JNK、 pJNK、P38和pP38在DRG上的表達(dá)變化:(1)P2X3:給予H2O的CCD大鼠和給予H20的SHAM大鼠相比表達(dá)增加(P0.05),給予β,γ-meATP 100nmol的CCD組和給予β,γ-meATP 100nmol的SHAM組比較明顯增加(P0.01);此外,給予β,γ-meATP 100nmol的CCD組與給予H2O的CCD組比較增加(P0.05)。(2)JNK:給予β,γ-meATP 100nmol的CCD組和給予β,γ-meATP 100nmol的SHAM組比較明顯增加(P0.01),給予β,γ-meATP 500nmol的CCD組和給予β,γ-meATP 500nmol的SHAM組比較增加(P0.05);此外在CCD大鼠,給予β,γ-meATP 100nmol和給予β,γ-meATP 500nmol均比較給予H2O表達(dá)增加(P0.05)。(3)pJNK:給予β,γ-meATP 500nmol的CCD組和給予β,γ-meATP 500nmol的SHAM組比較減少(P0.05)。(4)P38:多組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)pP38:給予β,γ-meATP 100nmol的CCD組和給予β,γ-me ATP 100nmol的SHAM組比較減少(P0.05)。結(jié)論:在CCD模型大鼠中P2X3受體激活后發(fā)生了JNK在DRG上表達(dá)總量的增加,而磷酸化活化量的減少;P38在DRG上表達(dá)無變化,而磷酸化活化量也減少;這提示NP中P2X3受體在DRG上激活可能會(huì)引起JNK和P38通路下調(diào)。
[Abstract]:Objective: To observe the changes in the expression and activation of JNK and P38 on DRG after P2X3 receptor activation in rats with chronic dorsal root ganglion compression (CCD), and to further explore the mechanism of the action of P2X3 receptor in NP. Method: 1. the NP model (CCD) was randomly constructed in 12 male rats with Sprague-Dawley (SD). ) and the sham operation (SHAM) group (n=6): before operation 1D, 1,4,7,10,14,21,28 and 35d after operation, the 50% mechanical contraction threshold (50%MPWT).2. of bilateral hind legs (50%MPWT).2. was used to detect the expression trend of P2X3 receptor within 28d in CCD rats: 15 male rats were randomly divided into untreated rats and constructed models. CD rats were randomly assigned to 7d (POD07) (n=3) after operation, 14d (POD14) (n=3) after operation, 21d (POD21) (n=3) or 28d (POD28) after operation. 36 SD male rats were randomly constructed in group CCD (18) and group SHAM (18 rats), and 18 rats were randomly injected at the foot of 14d after operation: H2O (n=6), P, y-meATP 100nmol (n=6), beta, and gamma -meATP 500nmol (501 mu). JNK, pJNK (JNK phosphorylation activation), P38 and pP38 (P38 phosphorylation activation type) expression on DRG: 9 male SD rats were randomly divided into NAIVE group (n=3), SHAM group (n=3) and groups. The expression changes of post P2X3, JNK, pJNK, P38 and pP38 on DRG: 18 male SD rats were randomly constructed in group CCD (9) and SHAM group (9), and 9 rats were randomly injected into the foot to be injected into the foot. The results of quantitative detection of P2X3, JNK, pJNK, P38, and pP38.: 1.CCD model rats were compared to the operative side of the 1,4,7,10,14,21,28,35d CCD group after operation, and the operation side of the side or SHAM group was significantly decreased (P0.001). The 2.CCD model rats were compared with those in the group, and 3. in 18 rats, After beta, 1min and H20 were significantly increased after gamma -meATP 100nmol (P0.01), and the comparison between 1min and H2O was significantly increased after giving beta and -meATP 500nmol (P0.001). Compared with H20, PLTPM was significantly increased (P0.001) and 6min PLTPM increased (P0.05). Moreover, the CCD rats given beta, gamma -meATP 500nmol and beta, gamma -meATP 500nmol SHAM rats were significantly increased. The changes of expression of P2X3, JNK, pJNK, P38 and pP38 on DRG after the operation of P2X3 receptor agonists were detected by.5. in CCD rats and SHAM rats after operation: (1) P2X3. P0.01); in addition, the CCD group that gave beta, gamma -meATP 100nmol increased (P0.05) compared with the CCD group giving H2O. (2) JNK: gave beta, the CCD group of gamma -meATP 100nmol and beta, gamma -meATP groups were significantly increased. D rats were given beta, gamma -meATP 100nmol and beta, and gamma -meATP 500nmol increased H2O expression (P0.05). (3) pJNK: gave beta, CCD group of gamma -meATP 500nmol and beta, gamma -meATP groups decreased. (4) there was no statistical significance between groups. (5) The SHAM group of -me ATP 100nmol decreased (P0.05). Conclusion: after the activation of P2X3 receptor in the CCD model rats, the total amount of JNK in DRG increased, and the activation amount of phosphorylation was reduced; P38 in DRG was not changed, and the activation amount of phosphorylation was also reduced. The road is down.
【學(xué)位授予單位】:第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R614
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,本文編號(hào):1806881
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