本文選題：GPR48 + 破骨細胞��； 參考：《華東師范大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：GPR48又名LGR4,屬G蛋白偶聯(lián)受體視紫紅質(zhì)家族。已有研究表明GPR48參與諸多生理功能調(diào)控,其缺失會引起多種器官發(fā)育不全、骨形成和重塑異常等。本實驗室前期研究結(jié)果顯示,Gpr48敲除小鼠骨量顯著下降,破骨細胞活性明顯上升；進一步研究發(fā)現(xiàn)GPR48負調(diào)控破骨細胞分化的主要機制是通過其胞外段與RANK競爭結(jié)合RANKL,從而抑制RANKL-RANK信號通路。在本文中,我們利用條件敲除的小鼠模型,在破骨細胞中特異敲除Gpr48,發(fā)現(xiàn)Gpr48 CKO小鼠的破骨細胞活性增強,骨量下降,進一步證明了GPR48在破骨細胞中的負調(diào)控作用。同時,我們研究了已報道的GPR48配體—-RSPOs和Norrin在GPR48負調(diào)控破骨細胞中的作用,結(jié)果顯示GPR48負調(diào)控破骨細胞分化不依賴RSPOs和Norrin,而是能通過激活RANKL誘導(dǎo)的經(jīng)典Gaq信號通路發(fā)揮作用。在相互作用方面,我們進一步分析了RANKL與GPR48胞外段結(jié)合的可能空間結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)RANKL與GPR48結(jié)合的區(qū)間與RSPOs有部分重疊,并通過競爭實驗確證了RANKL與RSPO-1能競爭性結(jié)合GPR48。但我們發(fā)現(xiàn)兩者與GPR48結(jié)合的機制是尚存差異。在此基礎(chǔ)之上,我們進而驗證了GPR48胞外段蛋白部分區(qū)段作為治療骨質(zhì)疏松潛在藥物的可能性。我們利用Opg-/-的小鼠骨質(zhì)疏松模型,也已發(fā)現(xiàn)GPR48胞外段蛋白能治療破骨細胞亢進引起的骨丟失。因此我們進一步探索RANKL與GPR48胞外段結(jié)合的有效區(qū)間,篩選出能有效抑制破骨細胞分化的GPR48胞外截短體。我們利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)和HEK293T真核細胞表達系統(tǒng)表達不同的GPR48胞外段截短體蛋白。我們發(fā)現(xiàn),缺失LRRNT-LRR3的GPR48胞外段蛋白抑制由RANKL誘導(dǎo)的破骨細胞分化并不明顯；缺失LRR14-LRR17的GPR48胞外段蛋白與RANKL的結(jié)合顯著下降。這提示我們RANKL與GPR48胞外段結(jié)合的關(guān)鍵有效的可能的區(qū)間是LRR3-LRR14。綜上所述,我們篩選出GPR48胞外段與RANKL作用的可能區(qū)間,為GPR48成為治療破骨細胞亢進相關(guān)疾病的潛在藥物提供了有效依據(jù)。
[Abstract]:Gpr48 is also known as LGR4 and belongs to the family of G - protein coupled receptor rhodopsin , which has been shown to be involved in many physiological functions .
In this paper , we have studied the possible spatial structure of the extracellular segment binding of RANKL , and the result shows that the mechanism of the binding of the extracellular segment of RANKL and the Gpr48 is not dependent on RSPOs and Norrin .
LRR14 - LRR17 deleted the binding of extracellular segment protein to RANKL in the LRR14 - LRR17 . This suggests that the key effective possible interval for binding of our RANKL to the extracellular segment of the GPRS 48 is LRR3 - LRR14 . In summary , we screened the possible intervals of the extracellular and RANKL inhibition of the gpr48 , which provides an effective basis for the treatment of a potential drug for the treatment of diseases associated with hyperthyroidism .

【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R68

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本文編號：1798083