本文選題：基質(zhì)細(xì)胞衍生因子 + 髓核細(xì)胞��； 參考：《中國修復(fù)重建外科雜志》2017年01期

【摘要】：目的探討人退變髓核細(xì)胞(nucelus pulposus cells,NPCs)分泌的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell derived factorl,SDF-1)對血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cells,VECs)的增殖影響及其相關(guān)分子機(jī)制。方法將術(shù)中摘取的椎間盤組織分離、培養(yǎng)人退變NPCs,取第1代轉(zhuǎn)染SDF-1過表達(dá)慢病毒。取第2代細(xì)胞,轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染過表達(dá)SDF-1慢病毒后,種植于alvetex?三維培養(yǎng)支架上行三維培養(yǎng),并與人HMEC-1細(xì)胞(即VECs)共培養(yǎng)。共培養(yǎng)72 h掃描電鏡觀察NPCs在支架上的生長情況;細(xì)胞計數(shù)試劑盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法分別檢測12、24、48、72 h轉(zhuǎn)染組與非轉(zhuǎn)染組HMEC-1增殖情況,以及加入Akt特異性抑制劑GSK690693后24 h HMEC-1增殖情況;膜聯(lián)蛋白Ⅴ/碘化丙啶法分別檢測共培養(yǎng)72 h后轉(zhuǎn)染組和非轉(zhuǎn)染組中VECs凋亡率;ELISA法分別檢測轉(zhuǎn)染組和非轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)基中VEGF含量;Western blot法檢測轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組和抑制劑組磷酸化Akt(p-Akt)和總Akt蛋白表達(dá)。結(jié)果掃描電鏡觀察示NPCs在三維支架中維持了細(xì)胞表型,分泌大量細(xì)胞外基質(zhì);慢病毒成功轉(zhuǎn)染后,Western blot檢測示SDF-1在NPCs中表達(dá)明顯升高。在共培養(yǎng)體系中,NPCs過表達(dá)SDF-1后可使HMEC-1增殖上升,凋亡率下降,并在細(xì)胞外培養(yǎng)基檢測中發(fā)現(xiàn)VEGF含量顯著上升;而在進(jìn)一步分子機(jī)制檢測中發(fā)現(xiàn),SDF-1的過表達(dá)使HMEC-1中p-Akt水平升高,采用GSK690693特異性抑制Akt表達(dá)后,SDF-1對HMEC-1促細(xì)胞增殖作用明顯降低。結(jié)論人退變NPCs高表達(dá)的SDF-1有利于VECs增殖,這一調(diào)控機(jī)制或許與SDF-1-Akt信號通路有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of 1(stromal cell derived factorl1 (SDF-1) secreted by nuclear nucleus pulposus cells (NPCs) on the proliferation of vascular endothelial cells (VECs) and its molecular mechanism.Methods the intervertebral disc tissue was isolated and cultured, and the first generation was transfected with SDF-1 overexpression lentivirus.The second passage cells were transfected or not transfected with SDF-1 lentivirus.The three-dimensional culture scaffold was cultured in three-dimensional way and co-cultured with human HMEC-1 cells (VECs).The growth of NPCs on the scaffold was observed by scanning electron microscope at 72 h, and the proliferation of HMEC-1 was detected by 8(cell counting kit 8 CCK-8 (cell count kit) method in the transfected group and non-transfected group at 72 h, and the HMEC-1 proliferation at 24 h after the addition of GSK690693, the specific inhibitor of Akt.The apoptosis rate of VECs in transfected group and non-transfection group was detected by Elisa and VEGF content in culture medium of transfection group and non-transfection group were detected by Western blot method.The expression of phosphorylated Aktna-Akt and total Akt protein in untransfected and inhibitor groups.Results the results of scanning electron microscopy showed that NPCs maintained the phenotype and secreted a large amount of extracellular matrix in the three-dimensional scaffold, and the expression of SDF-1 in NPCs was significantly increased by Western blot after the successful transfection of lentivirus.After overexpression of SDF-1 in co-culture system, the proliferation and apoptosis rate of HMEC-1 were increased, and the content of VEGF was significantly increased in extracellular culture medium, while the level of p-Akt in HMEC-1 was increased by overexpression of SDF-1 in the further molecular mechanism detection.After Akt expression was inhibited by GSK690693, the effect of SDF-1 on the proliferation of HMEC-1 cells was significantly decreased.Conclusion the high expression of SDF-1 in human degenerative NPCs is beneficial to the proliferation of VECs. This regulatory mechanism may be related to the SDF-1-Akt signaling pathway.
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院骨科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目資助(81372003)~~
【分類號】：R681.5

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本文編號：1773390