本文選題：組織工程 + 同種異體　； 參考：《南華大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：骨缺損在臨床上的整復(fù)治療備受關(guān)注。傳統(tǒng)自體骨移植具有不可避免的二次損傷并且伴隨著感染、疼痛等風(fēng)險(xiǎn)的可能。人工骨代用品成骨性低、個(gè)體差異性大,并且還存在因其抗原性引起的體內(nèi)長(zhǎng)期排斥與降解速度慢造成的異物反應(yīng)等缺點(diǎn)。組織工程骨有望成為臨床修復(fù)下頜骨缺損的理想替代品。目的:探索建立以同種異體家兔胎齡期骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為種子細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的可行性。方法:通過(guò)人工受精方法,獲得孕期3周的孕兔1只,行剖腹產(chǎn)術(shù)取出胎兔7只,沖取胎兔骨髓以貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)。另16只成年新西蘭大白兔無(wú)差別分為實(shí)驗(yàn)組與空白材料對(duì)照組,各8只。取P3代胎齡期BMSCs以20×106 cells/ml的濃度接種DBM繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)。用經(jīng)誘導(dǎo)的BMSCs-DBM修復(fù)實(shí)驗(yàn)組家兔橈骨1.5cm節(jié)段缺損,用空白DBM材料按同樣手術(shù)方法修復(fù)空白對(duì)照組家兔。術(shù)后不同時(shí)間進(jìn)行隨訪與X線觀察。術(shù)后12周兩組家兔均實(shí)行空氣注射栓塞致死,行取材后大體觀察、Micro-CT影像學(xué)檢測(cè)、組織學(xué)染色等檢測(cè)指標(biāo)評(píng)價(jià)修復(fù)效果。同時(shí)對(duì)胎齡期家兔BMSCs行相應(yīng)數(shù)據(jù)檢測(cè),測(cè)量P3代胎兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,克隆形成率,并進(jìn)行成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo)分化。另外將原代細(xì)胞凍存后30天復(fù)蘇,測(cè)量其P3代生長(zhǎng)曲線,對(duì)凍存前后增殖能力的變化進(jìn)行觀察。掃描電鏡觀察胎兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與DBM形成細(xì)胞材料復(fù)合物的體外形態(tài)。將BMSCs-DBM復(fù)合物植入裸鼠皮下,于術(shù)后1、3、6月分別取材行HE、VG、Masson染色觀察。結(jié)果:胎兔來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞飽滿(mǎn)均勻,呈梭形或倒三角形狀;傳代后各代細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化,生長(zhǎng)曲線相差不大;成骨、成脂以及成軟骨誘導(dǎo)觀察到鈣結(jié)節(jié)、脂肪空泡、黏多糖。凍存30天后復(fù)蘇,其P3代生長(zhǎng)曲線與凍存前相比未見(jiàn)明顯變化。電鏡下觀察,與DBM復(fù)合7天后細(xì)胞能均勻緊密貼合于材料上,伸展良好分布均勻。植入裸鼠皮不同時(shí)間點(diǎn)取材進(jìn)行HE、VG、Masson染色,均顯示有新生骨組織生成。誘導(dǎo)BMSCs-DBM植入缺損后通過(guò)X線發(fā)現(xiàn)阻攝影不斷增高,12周大體和Micro-CT見(jiàn)骨愈合。結(jié)論:1.家兔來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)過(guò)一系列觀察與試驗(yàn),證明是一種易獲取、誘導(dǎo)分化能力較強(qiáng)、與生物材料結(jié)合較好的骨組織工程種子細(xì)胞。2.單純脫鈣骨基質(zhì)(DBM)作為單純生物材料不能修復(fù)家兔橈骨標(biāo)準(zhǔn)節(jié)段骨缺損。3.同種異體胎齡期骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)結(jié)合脫鈣骨基質(zhì)(DBM)構(gòu)建的組織工程骨能修復(fù)兔橈骨原位缺損模型。
[Abstract]:The clinical treatment of bone defect has attracted much attention.Traditional autografts have the potential for inevitable secondary injury and associated risks of infection, pain, and so on.Artificial bone substitute has low osteogenesis, great individual difference, and it also has some shortcomings such as long-term rejection and foreign body reaction caused by its antigenicity.Tissue engineered bone is expected to be an ideal substitute for clinical repair of mandibular defects.Aim: to explore the feasibility of constructing tissue engineered bone with allogeneic bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) as seed cells.Methods: 1 pregnant rabbit was obtained by artificial insemination, 7 fetal rabbits were taken out by caesarean section, bone marrow was extracted from fetal rabbit and cultured by adherent culture in vitro.The other 16 adult New Zealand white rabbits were divided into experimental group and blank control group, 8 rabbits in each group.P3 generation of gestational age BMSCs was inoculated with DBM at 20 脳 10 ~ 6 cells/ml for further induction.The radial 1.5cm segment defect was repaired by induced BMSCs-DBM in the experimental group and the blank DBM material was used to repair the defect in the blank control group.Follow-up and X-ray observation were carried out at different time after operation.12 weeks after operation, the rabbits in both groups were killed by air injection embolization. Micro-CT imaging examination and histological staining were used to evaluate the repair effect.The growth curve of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of P3 generation fetal rabbits were measured. The colony formation rate and osteogenesis, adipogenic and chondrogenic differentiation of P3 generation fetal rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were also measured.In addition, the primary cells were resuscitated 30 days after cryopreservation, the growth curves of P3 generation were measured, and the changes of proliferation ability before and after freezing were observed.The morphology of fetal rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and DBM in vitro was observed by scanning electron microscope (SEM).The BMSCs-DBM complex was implanted subcutaneously into nude mice.Results: the bone marrow mesenchymal stem cells from fetal rabbits were observed to be full and uniform, fusiform or inverted triangle under inverted phase contrast microscope.Calcium nodules, fat vacuoles and mucopolysaccharide were observed in adipogenic and chondrogenic induction.After 30 days of cryopreservation, there was no obvious change in P3 generation growth curve.Electron microscope observation showed that the cells combined with DBM for 7 days could fit to the material evenly and spread well.In nude mice skin samples were collected at different time points for HEV GG Masson staining, all of which showed the formation of new bone tissue.After induced BMSCs-DBM implantation, X-ray findings showed that the bone healing was observed at 12 weeks after continuous increase of resistive radiography and Micro-CT.Conclusion 1.Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) from rabbits were proved to be a kind of bone tissue engineering seed cells.Simple decalcified bone matrix (DBM) as a simple biomaterial could not repair the standard segmental bone defect of rabbit radius.The tissue engineering bone constructed by bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) combined with decalcified bone matrix (DBM) at gestational age could repair the rabbit radial in situ defect model.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R687.3;R318.08

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊志明;組織工程骨的研究成果及存在的問(wèn)題[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2005年02期

2 張?jiān)?,崔繼秀 ,裴國(guó)獻(xiàn) ,王永剛 ,金丹 ,秦煜 ,陳濱 ,魏寬海;神經(jīng)化組織工程骨構(gòu)建的初步觀察[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2005年01期

3 藍(lán)旭;梁軍;葛寶豐;劉雪梅;;不同凍存方法對(duì)組織工程骨生物活性的影響[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2007年02期

4 劉杰;許建中;劉曦明;羅飛;何清義;代飛;謝肇;;個(gè)體化組織工程骨成骨機(jī)制探討[J];華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

5 劉勇;裴國(guó)獻(xiàn);江汕;任高宏;梁雙武;趙培冉;;組織工程骨神經(jīng)化構(gòu)建的影像學(xué)研究[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2008年05期

6 劉勇;裴國(guó)獻(xiàn);江汕;姚旺祥;任高宏;孫新君;;組織工程骨神經(jīng)化構(gòu)建的組織學(xué)研究[J];中國(guó)矯形外科雜志;2009年16期

7 蔡升勇;習(xí)俊通;;基于形函數(shù)控制的組織工程骨架孔隙結(jié)構(gòu)實(shí)體建模方法[J];機(jī)械工程學(xué)報(bào);2009年07期

8 毛天球,楊維東,陳富林,陶凱;組織工程骨的研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2003年02期

9 李智;組織工程骨血管再生的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2003年06期

10 宋晉剛,許建中;脈沖電磁場(chǎng)在組織工程骨培養(yǎng)中的研究與進(jìn)展[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年14期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳學(xué)忠;張西正;李志宏;;組織工程骨的構(gòu)建策略及存在的問(wèn)題(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 鄧力;楊志明;智偉;解慧琪;羅靜聰;李秀群;劉天慶;宋克東;;旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器構(gòu)建組織工程骨[A];2005'中國(guó)修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

3 馬全美;田曉紅;柏樹(shù)令;;組織工程骨膜的研究進(jìn)展[A];2008年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2008年

4 陳槐卿;周江;唐戎;周大利;;骨髓基質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合種植構(gòu)造組織工程骨的初步研究[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第六次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

5 宋克東;劉天慶;李香琴;葛丹;孫相玉;馬學(xué)虎;崔占峰;;新型旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器內(nèi)三維組織工程骨的構(gòu)建[A];第一屆全國(guó)化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

6 何大為;金巖;;水凝膠、陶瓷類(lèi)材料以及生長(zhǎng)因子的復(fù)合對(duì)組織工程骨的影響[A];加入WTO和中國(guó)科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機(jī)遇、責(zé)任和對(duì)策（下冊(cè)）[C];2002年

7 羅曉中;楊志明;鄧力;李秀群;;低溫保存的組織工程骨修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[A];2005'中國(guó)修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

8 李欣;黃國(guó)英;崔艾萍;;組織工程骨移植修復(fù)骨缺損的手術(shù)配合[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)第14屆全國(guó)手術(shù)室護(hù)理學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

9 連輝;柏樹(shù)令;田曉紅;佟浩;;組織工程骨血管化策略研究現(xiàn)狀[A];2008年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2008年

10 張開(kāi)剛;曾炳芳;張長(zhǎng)青;;小腸粘膜下層為支架材料構(gòu)建組織工程骨膜成骨的血管化超微結(jié)構(gòu)觀察[A];2005年上海市醫(yī)用生物材料研討會(huì)論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 蔣銳;我國(guó)組織工程骨應(yīng)用研究獲成果[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

2 鄒爭(zhēng)春　劉蘋(píng) 記者 趙雪;我科學(xué)家解決組織工程骨血液循環(huán)障礙國(guó)際難題[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

3 熊艷;用組織工程骨替代缺損肋骨[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 蔣佳;雙基因修飾組織工程骨的構(gòu)建及其成骨的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

2 解芳;構(gòu)建同種異體組織工程骨及修復(fù)犬顱骨臨界骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 江汕;組織工程骨原位構(gòu)建修復(fù)股骨缺損的示蹤研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

4 馬東洋;基于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建無(wú)外支架組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 羅曉中;組織工程骨低溫保存的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2005年

6 羅飛;模擬微重力生物反應(yīng)器制備組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 鄧天政;組織工程骨—軟骨復(fù)合組織的構(gòu)建及體內(nèi)外形態(tài)學(xué)觀察的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 常正奇;富含功能蛋白的凍干組織工程骨的構(gòu)建及成骨效果與成骨機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 吳驍偉;不同血管化策略構(gòu)建組織工程骨的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 陳學(xué)忠;力學(xué)環(huán)境下組織工程骨的構(gòu)建與動(dòng)態(tài)培養(yǎng)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張聰;hBMP2與hVEGF165雙基因共表達(dá)腺病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合n-HA/PA66組織工程骨構(gòu)建及檢測(cè)[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

2 宋擇眾;通過(guò)檢測(cè)堿性磷酸酶和骨鈣素2的表達(dá)水平定量分析組織工程骨成骨影響因素[D];山東大學(xué);2015年

3 張敏;脈沖電磁場(chǎng)促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 周權(quán);同種異體胎兔BMSCs為種子細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];南華大學(xué);2015年

5 蔡升勇;基于形函數(shù)控制的組織工程骨架孔隙分布結(jié)構(gòu)實(shí)體建模技術(shù)研究[D];上海交通大學(xué);2010年

6 張弓;多基因修飾組織工程骨中其基因表達(dá)時(shí)限的檢測(cè)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

7 劉勇;組織工程骨血管神經(jīng)化構(gòu)建的早期觀察[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 穆天旺;血管束、感覺(jué)神經(jīng)束植入構(gòu)建組織工程骨血管神經(jīng)化的早期形態(tài)學(xué)觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

9 拓振合;應(yīng)用組織工程骨膜及其脫蛋白骨輔助支架修復(fù)兔橈骨大段骨缺損[D];蘭州大學(xué);2014年

10 吳治林;個(gè)體化組織工程骨修復(fù)人長(zhǎng)骨缺損的回顧性對(duì)比研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1766347