發(fā)布時(shí)間：2018-04-15 15:08

  本文選題：RELM-α + 急性胰腺炎　； 參考：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景與目的:急性胰腺炎(AP)為常見的急腹癥,合并多器官功能障礙綜合征(MODS)的重癥急性胰腺炎(SAP)患者中死亡率高達(dá)20-30%1,其中尤以急性胰腺炎繼發(fā)急性肺損傷(APALI)最為常見及嚴(yán)重,約占SAP的14.2-35%2。若能早期從所有AP患者中篩選出存在APALI患者,對(duì)其及早進(jìn)行必要的醫(yī)療干預(yù),對(duì)有效提高醫(yī)療資源利用率、改善患者預(yù)后及提高生存率有重大意義。抵抗素樣分子-α(RELM-α)是從誘導(dǎo)過敏性肺部炎癥的小鼠支氣管肺泡灌洗液中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)分泌蛋白,既往研究發(fā)現(xiàn)RELM-α具有維護(hù)肺泡上皮細(xì)胞功能、抵抗炎癥、調(diào)控肺血管重構(gòu)、誘導(dǎo)肺血管平滑肌細(xì)胞增殖、縮血管、抗凋亡及刺激肌纖維母細(xì)胞分化等功能3。本研究擬揭示RELM-α與APALI疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,證實(shí)RELM-α可能是SAP疾病預(yù)后的早期標(biāo)志物之一,并探討其在APALI中的作用。方法:(1)采用�；悄懰徕c誘導(dǎo)急性壞死性胰腺炎(ANP)動(dòng)物模型,通過測定血清淀粉酶、C反應(yīng)蛋白(CRP)水平及胰腺組織病理對(duì)其進(jìn)行評(píng)測。(2)通過肺組織病理學(xué)評(píng)分、肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞數(shù)量評(píng)估APALI的肺組織損傷。(3)通過Western Blot及免疫組化檢測肺組織中的RELM-α的表達(dá)。(4)化學(xué)合成RELM-α基因,酶切目的基因PCR產(chǎn)物及載體DNA并連接,轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞克隆后抽提純化并擴(kuò)增,利用同源重組將質(zhì)粒PDC316-m CMVEGFP-Retula和腺病毒骨架載體PPE3-F35共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,獲得腺病毒重組質(zhì)粒AD5/F35-RELM-α。通過PCR及基因測序檢測RELM-α基因的表達(dá),通過熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白表達(dá)觀察病毒感染情況,并計(jì)算重組腺病毒的滴度;通過Western Blot檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中RELM-α的表達(dá),免疫組化檢測大鼠肺及胰腺組織中RELM-α的表達(dá)。通過觀察大鼠胰腺及肺組織病理改變,評(píng)估RELM-α過表達(dá)對(duì)組織的損傷。結(jié)果:(1)ANP組血清淀粉酶及CRP水平指標(biāo)顯著高于其它組(p0.01),ANP組胰腺組織出現(xiàn)典型SAP病理改變,表明大鼠SAP模型造模成功。(2)ANP組病理學(xué)評(píng)分、大鼠肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液炎性細(xì)胞顯著高于其它組(p值均0.01)。(3)ANP組RELM-α定位于肺泡上皮細(xì)胞,蛋白表達(dá)顯著高于其它(p0.05)。(4)構(gòu)建并驗(yàn)證重組RELM-α腺病毒質(zhì)粒,測定AD5/F35-RELM-α病毒滴度為4×10 e10 pfu/m L,RELM-α組、空載體組、ANP組大鼠及對(duì)照組胰腺組織及肺組織光鏡下可見RELM-α組病理組織損傷最明顯(p0.05),大鼠胰腺組織及肺組織光鏡下分別可見明顯的ANP及ALI病理改變。結(jié)論:通過�；悄懰峥沙晒χ苽浼毙詨乃佬砸认傺捉M模型,并得到血清學(xué)及組織病理學(xué)的驗(yàn)證。RELM-α蛋白表達(dá)與肺組織損傷嚴(yán)重程度呈正相關(guān),其過表達(dá)可造成胰腺及肺組織損傷,說明其作為促炎性細(xì)胞因子,趨化和激活了炎性細(xì)胞,介導(dǎo)APALI發(fā)生,并可作為早期預(yù)測急性胰腺炎嚴(yán)重程度的指標(biāo)。
[Abstract]:Background & objective: acute pancreatitis (AP) is a common acute abdomen. The mortality rate of severe acute pancreatitis (SAP) with multiple organ dysfunction syndrome (MODS) is as high as 20-301, especially acute lung injury (APALI) secondary to acute pancreatitis.About 14.2-352.00% of SAP.It is of great significance to improve the utilization of medical resources, improve the prognosis and improve the survival rate of patients with APALI if they can be screened out from all patients with AP early and carry out necessary medical intervention as soon as possible.Resistin like molecule- 偽 luciferin 偽 is a newly found secretory protein from the bronchoalveolar lavage fluid of mice induced by allergic pulmonary inflammation. Previous studies have found that RELM- 偽 can maintain the function of alveolar epithelial cells, resist inflammation and regulate pulmonary vascular remodeling.Induces pulmonary vascular smooth muscle cells proliferation, vasoconstriction, anti-apoptosis and stimulate myofibroblast differentiation.This study aims to reveal the correlation between RELM- 偽 and the severity of APALI disease, to confirm that RELM- 偽 may be one of the early prognostic markers of SAP disease, and to explore its role in APALI.Methods the animal model of acute necrotizing pancreatitis (ANPs) was induced by sodium taurocholate. The levels of serum amylase C-reactive protein (CRP) and pancreatic histopathology were measured.Lung wet / dry weight coefficient and the number of inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) the lung tissue injury of APALI was evaluated. The expression of RELM- 偽 in lung tissue was detected by Western Blot and immunohistochemistry. The RELM- 偽 gene was chemically synthesized.The target gene PCR product and vector DNA were ligated and ligated. The recombinant plasmid PDC316-m CMVEGFP-Retula and adenovirus cytoskeleton PPE3-F35 were co-transfected into 293 cells by homologous recombination. The adenovirus recombinant plasmid AD5 / F35-RELM- 偽 was obtained.The expression of RELM- 偽 gene was detected by PCR and gene sequencing, the viral infection was observed by green fluorescent protein expression under fluorescence microscope, and the titer of recombinant adenovirus was calculated, and the expression of RELM- 偽 in transfected cells was detected by Western Blot.The expression of RELM- 偽 in rat lung and pancreas was detected by immunohistochemistry.The pathological changes of pancreas and lung were observed to evaluate the tissue damage caused by RELM- 偽 overexpression.Results the levels of serum amylase and CRP were significantly higher in the control group than those in the other groups. The pathological changes of pancreatic tissue in the control group were significantly higher than those in the control group, which indicated that the rat model of SAP was successfully established and the pathological score of the group was higher than that of the control group.The lung wet / dry weight coefficient and bronchoalveolar lavage fluid inflammatory cells in 0.01).(3)ANP group were significantly higher than those in other groups. RELM- 偽 was located in alveolar epithelial cells, and the protein expression was significantly higher than that in other groups.The titer of AD5 / F35-RELM- 偽 virus was determined to be 4 脳 10 e10 pfu/m / L,The histopathological damage of RELM- 偽 group was the most obvious under light microscope, and the pathological changes of ANP and ALI in pancreatic tissue and lung tissue of rats were obvious under light microscope.Conclusion: the model of acute necrotizing pancreatitis can be successfully established by taurocholic acid, and the positive correlation between the expression of .RELM- 偽 protein and the severity of lung injury can be obtained by serological and histopathological analysis, and the overexpression of taurocholic acid can cause pancreatic and lung injury.It is suggested that as a pro-inflammatory cytokine, it chemotaxis and activates inflammatory cells, mediates the occurrence of APALI, and can be used as an early predictor of the severity of acute pancreatitis.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R657.5

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本文編號(hào)：1754628