發(fā)布時間：2018-03-19 11:42

  本文選題：白介素17　切入點：椎間盤退變　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景腰椎間盤退變疾病是骨科臨床常見病,其主要特征是細胞外基質(zhì)(ECM)成分下降,水分減少,膠原比例變化等�；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在這一過程中扮演重要角色。MMPs一般通過中性粒細胞、巨噬細胞、纖維母細胞等組織細胞產(chǎn)生,是一類Ca和Zn依賴的蛋白水解酶家族,參與降解全身各種組織細胞外基質(zhì)成分。有研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)主要來源于軟骨細胞,具有降解Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的作用,因此,基質(zhì)金屬蛋白酶13在基質(zhì)降解過程里可以發(fā)揮雙重作用。以往的研究表明,MMP-13在炎性介質(zhì)(白介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)等)介導的人椎間盤退變過程中起重要作用。但是關于白介素-17(IL-17)與MMP-13在椎間盤退變過程中的關系尚未有相關報道。Salubrinal是真核起始因子2α(eIF2α)去磷酸化的抑制劑,能夠提升eIF2α的磷酸化水平,從而抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激引起的細胞凋亡。最近的研究表明,salubrinal具有促進骨愈合、抑制骨質(zhì)疏松、抑制骨細胞和成骨細凋亡及抑制骨關節(jié)炎等骨保護作用,但是關于salubrinal與椎間盤退變的關系尚未有人報道,本實驗將研究salubrinal是否可抑制IL-17介導的椎間盤退變過程。研究目的1.本實驗將研究IL-17在椎間盤退變過程中對基質(zhì)金屬蛋白酶-13和細胞外基質(zhì)成分的調(diào)節(jié)。2.研究真核起始因子2α去磷酸化的抑制劑salubrinal,是否可以抑制IL-17介導的上述過程。研究方法1.選取2014年2月-2014年9月在山東大學齊魯醫(yī)院骨外科住院住院并經(jīng)臨床表現(xiàn)和影像學檢查確診為腰椎間盤突出癥患者。20個取自經(jīng)椎間孔融合術及后路腰椎椎間融合術患者的椎間盤,所有椎間盤按Pfirrmann評分屬于非退變組,椎間盤分離髓核組織后,提取原代髓核細胞并傳代培養(yǎng)。2.用蛋白免疫印跡和RT-PCR技術,檢測不同濃度和不同時間IL-17刺激下,髓核細胞中MMP-13、Ⅱ型膠原(COL2A1)、Ⅰ型膠原(COL1A1)及聚集蛋白多糖(ACAN)的表達。3.用蛋白免疫印跡和免疫熒光技術,檢測IL-17刺激下,NF-κB通路是否被激活。另外,用蛋白免疫印跡技術,檢測IL-17或salubrinal刺激下,eIF2α的表達情況。4.用蛋白免疫印跡和RT-PCR技術,檢測在salubirnal或NF-κB通路的抑制劑與IL-17共同刺激下,髓核細胞中MMP-13、Ⅱ型膠原、Ⅰ型膠原和聚集蛋白多糖的表達,以及NF-κB通路是否被激活。研究結果1.蛋白免疫印跡實驗表明,IL-17刺激髓核細胞,使MMP-13和Ⅰ型膠原表達升高,并降低Ⅱ型膠原和聚集蛋白多糖的表達,RT-PCR實驗表明,IL-17刺激髓核細胞,使MMP-13表達升高,并降低Ⅱ型膠原、Ⅰ型膠原和聚集蛋白多糖的表達。2.免疫印跡實驗及免疫熒光實驗表明,IL-17刺激髓核細胞激活了 NF-κB通路。另外,免疫印跡實驗表明,IL-17同時使eIF2α的表達升高。進一步的實驗表明,在IL-17和BAY11-7082共同刺激下,eIF2α磷酸化水平并沒有顯著性差異(P0.05)。3.Salubrinal和NF-κB通路抑制劑BAY11-7082可以抑制IL-17激活的NF-κB通路。同時,免疫印跡技術表明,salubrinal和BAY11-7082抑制了 IL-17導致的MMP-13和Ⅰ型膠原表達升高,以及Ⅱ型膠原、聚集蛋白多糖表達下降。RT-PCR表明,salubrinal 和 BAY 11-7082 抑制了 IL-17 導致的 MMP-13 表達升高,以及Ⅱ型膠原、Ⅰ型膠原、聚集蛋白多糖表達下降。結論IL-17在人髓核細胞中通過激活NF-κB通路提高了 MMP-13的表達同時抑制COL2A1和ACAN的表達;salubrinal可以抑制IL-17介導的椎間盤退變過程,從而為salubrinal治療椎間盤退變提供了依據(jù)。
[Abstract]:The research background of disease of lumbar disc degeneration is a common disease in clinical department of orthopedics, its main feature is the extracellular matrix (ECM) components decreased, moisture decreased, collagen proportion changes. Matrix metalloproteinases (MMPs) play an important role in.MMPs by granulocyte macrophage, in this process, fibroblast cells, is a family of proteolytic enzymes like Ca and Zn dependent, all organizations involved in the degradation of extracellular matrix components. Studies have shown that matrix metalloproteinase 13 (MMP-13) mainly derived from chondrocytes, with degradation of type II collagen and aggrecan (Aggrecan) role, therefore, matrix metalloproteinase 13 in the substrate degradation process can play a dual role. Previous studies showed that MMP-13 in inflammatory mediators (interleukin -1 beta (IL-1 beta), tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) etc.) degeneration of the human intervertebral disc mediated in An important role. But on interleukin -17 (IL-17) and MMP-13 in the process of disc degeneration has not been reported that.Salubrinal is the eukaryotic initiation factor 2 alpha (eIF2 alpha) inhibitor to phosphorylation, can enhance the phosphorylation level of eIF2 alpha, thereby inhibiting the apoptosis induced by endoplasmic reticulum stress in recent. Research shows that salubrinal can promote bone healing, inhibiting osteoporosis, inhibition of bone cells and osteoblasts apoptosis and inhibit bone arthritis and other bone protective effect, but the relationship between salubrinal and intervertebral disc degeneration has not yet been reported, this experiment will investigate whether salubrinal can inhibit IL-17 mediated degeneration of the intervertebral disc. The purpose of the study 1. the experiment study of IL-17 in the process of disc degeneration on matrix metalloproteinase -13 and extracellular matrix components regulating.2. of eukaryotic initiation factor 2 alpha phosphorylation inhibitor salubrinal, is The process can not mediated by inhibition of IL-17. Methods: 1. from February 2014 -2014 year in September in the Qilu Hospital of Shandong University hospital and bone surgery by clinical and radiological examination confirmed the diagnosis of lumbar disc herniation patients with.20 from the disc intervertebral fusion and posterior lumbar interbody fusion of lumbar intervertebral disc patients, all according to the Pfirrmann score belong to non degeneration group, intervertebral disc nucleus pulposus after separation, extraction of primary nucleus pulposus cells and Western blotting and RT-PCR technology with the.2. subculture, detection of different concentration and time of IL-17 under the stimulation of MMP-13 in the nucleus pulposus cells, collagen type II (COL2A1), collagen (COL1A1) and protein aggregation sugar (ACAN) protein expression by Western blotting and immunofluorescence technique with.3. detection, IL-17 stimulation, NF- B pathway is activated. In addition, by Western blot technique, the detection of IL-17 or salubrina Under the stimulation of L eIF2 alpha.4. expression by Western blotting and RT-PCR detection technology, in the salubirnal or NF- inhibitor and IL-17 B pathway together under the stimulation of MMP-13 in the nucleus pulposus cells, the expression of type II collagen, type I collagen and aggrecan, and the NF- B pathway is activated 1.. The results of Western blot showed that IL-17 stimulation of nucleus pulposus cells, MMP-13 and collagen expression increased, and decreased the expression of type II collagen and aggrecan, RT-PCR results showed that IL-17 stimulation of nucleus pulposus cells, increase the expression of MMP-13 and decrease that of type II collagen, type I collagen and the aggrecan.2. expression by Western blotting and immunofluorescence experiments, IL-17 stimulated the activation of NF- B pathway in nucleus pulposus cells. In addition, immunoblotting experiments showed that IL-17 and eIF2 expression increased. Further experiments showed that, in IL-17 and BAY11-708 2 common stimulation, there is no significant difference between the phosphorylation level of eIF2 alpha (P0.05) NF- BAY11-7082.3.Salubrinal NF- B pathway and B pathway inhibitors can inhibit the activation of IL-17. At the same time, that Western blot, salubrinal and BAY11-7082 inhibited MMP-13 and IL-17 induced expression of collagen type I and type II collagen, increased. Aggrecan decreased the expression of.RT-PCR showed that salubrinal and BAY 11-7082 inhibited IL-17 caused increased expression of MMP-13 and collagen type II collagen and aggrecan expression decreased. Conclusion IL-17 in human nucleus pulposus cells by expression of increased MMP-13 expression and inhibit COL2A1 and ACAN activation of NF- B pathway. Intervertebral disc degeneration; salubrinal can inhibit IL-17 mediated by salubrinal, which provides a basis for the treatment of intervertebral disc degeneration.

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R681.53

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 韓成龍;朱洪勛;;髓核細胞表型標記的研究進展[J];中國修復重建外科雜志;2011年07期

2 張麗;關曉明;馬迅;滿孝旭;趙勝;;人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因感染對人髓核細胞基本特性的影響[J];中國藥物與臨床;2013年S1期

3 李鋒;李光輝;陶鳳華;郭風勁;許濤;潘峰;;兔髓核細胞誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為髓核細胞的研究[J];生物骨科材料與臨床研究;2006年06期

4 李旭;侯筱魁;湯亭亭;李惠武;郭剛;裴國獻;;人轉(zhuǎn)化生長因子β_1重組腺病毒轉(zhuǎn)染傳代髓核細胞對細胞外基質(zhì)合成的影響[J];中國修復重建外科雜志;2007年12期

5 伊友明;陶鳳華;杜靜;潘峰;李鋒;;轉(zhuǎn)化生長因子-β1和胰島素樣生長因子-1對兔退變髓核細胞生物學活性的影響[J];華中醫(yī)學雜志;2009年03期

6 劉瑞平;徐南偉;;退變兔髓核細胞和正常髓核細胞生物學特性的比較[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2009年21期

7 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;沈雁;;體外培養(yǎng)人正常椎間盤髓核細胞與退變髓核細胞的生物學性狀比較:可以為干預退變髓核細胞提供最佳時機嗎?[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年28期

8 王鋒;朱悅;;影響髓核細胞表達水通道蛋白1相關因素的實驗研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年06期

9 牛建鵬;衛(wèi)陳剛;任龍韜;;髓核細胞及其生物力學研究進展[J];臨床醫(yī)藥實踐;2011年08期

10 李鋒生;梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;體外培養(yǎng)人退變髓核細胞的生物學性狀[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年28期

相關會議論文 前10條

1 趙秀寶;馬信龍;馬劍雄;李稚君;李爽;孫曉雷;;周期性牽張力聯(lián)合灌注培養(yǎng)對大鼠髓核細胞影響的研究[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第30次學術年會暨生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2010年

2 王會仁;董健;周曉崗;李熙雷;林紅;;人脂肪及骨髓來源間充質(zhì)干細胞與髓核細胞非接觸共培養(yǎng)后的類髓核分化效應研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結合骨傷科學術研討會論文匯編[C];2012年

3 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對體外培養(yǎng)髓核細胞合成代謝的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

4 余磊;廖華;熊紹虎;;人髓核細胞體外培養(yǎng)體系的建立[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;BMP-2對人退變椎間盤髓核細胞影響的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;bFGF對人退變椎間盤髓核細胞影響的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

7 王海強;;CK8在退變椎間盤髓核細胞中的表達[A];中國中西醫(yī)結合學會脊柱醫(yī)學專業(yè)委員會第六屆學術年會論文集[C];2013年

8 葉冬平;梁偉國;戴麗冰;沈雁;;GFP-hTERT轉(zhuǎn)染人正常髓核細胞構建永生化髓核細胞株的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

9 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對體外培養(yǎng)髓核細胞生長增殖的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

10 伍耀宏;徐寶山;李秀蘭;楊強;張楊;夏群;張春秋;許海委;;軟骨脫細胞基質(zhì)多孔支架與山羊髓核細胞生物相容性研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結合骨傷科學術研討會論文匯編[C];2012年

相關博士學位論文 前10條

1 葉冬平;microRNA-155通過下調(diào)ERK1/2水平影響人正常椎間盤髓核細胞退變的實驗研究[D];暨南大學;2015年

2 王崢;FOXC2和BMP-7在椎間盤退變性疾病中的作用及其機制的相關研究[D];吉林大學;2016年

3 江維;SIRT1調(diào)控自噬對人椎間盤髓核細胞退變的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 陶軼卿;Ⅱ型膠原荷載成髓核細胞分化的脂肪間充質(zhì)干細胞修復椎間盤退變的體內(nèi)外研究[D];浙江大學;2016年

5 王建喜;Caveolin-1通過Wnt/β-Catenin信號通路介導炎癥因子對髓核細胞凋亡的誘導作用[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

6 蔡峰;酸敏感離子通道1a在骨髓間充質(zhì)干細胞修復退變椎間盤中的作用機制研究[D];東南大學;2016年

7 陳松峰;壞死性凋亡在壓力誘導的髓核細胞損傷中的作用及其相關機制研究[D];華中科技大學;2016年

8 高鋒;低強度脈沖超聲波促進人髓核細胞合成胞外基質(zhì)功能性成分的體外實驗研究[D];蘇州大學;2011年

9 李喜功;人骨髓間充質(zhì)干細胞與退變髓核細胞體外共培養(yǎng)的實驗研究[D];蘇州大學;2011年

10 張曉軍;低強度脈沖超聲對立體培養(yǎng)的人退變椎間盤髓核細胞的影響實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 任國梁;退變毮核細胞拉伸實驗的形態(tài)學研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 唐浩;CD24在人髓核細胞鑒定應用中的相關研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

3 劉永明;過表達NDRG2基因促進人髓核細胞衰老的體外實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

4 楊晨;活化T細胞核因子對髓核細胞中ADAMTS-4及-5表達的調(diào)控作用[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

5 胡津銓;骨髓間充質(zhì)干細胞對于髓核細胞炎性損傷的保護作用[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

6 趙光宇;不同共培養(yǎng)條件下兔NPCs誘導BMSCs向類髓核細胞分化的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

7 周栩;Id1基因?qū)MP-2維持兔髓核細胞軟骨特性的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 宋鵬;高氧微環(huán)境刺激與細胞連續(xù)分裂在體外人髓核細胞老化中作用的初探[D];東南大學;2015年

9 崔佳瞿;老化髓核細胞的致退變效應及其機制的探索[D];東南大學;2015年

10 孫灰灰;人老化髓核細胞的炎性因子表達變化分析[D];東南大學;2015年

，

本文編號：1634109