本文選題：骨性關(guān)節(jié)炎　切入點(diǎn)：軟骨細(xì)胞　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的目前關(guān)于骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)的病因研究已經(jīng)有很多,例如促炎細(xì)胞因子的作用,軟骨降解反應(yīng),miR-146a的調(diào)控作用,低氧刺激和骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞的自噬作用,但是卻沒有關(guān)于軟骨細(xì)胞中miR-146a和自噬之間關(guān)系的報(bào)道,特別是低氧環(huán)境下的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)旨在明確軟骨在低氧條件下miR-146a和軟骨細(xì)胞自噬之間的作用關(guān)系。方法軟骨細(xì)胞培養(yǎng)在不同程度氧含量的條件下,通過定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction,QPCR)和免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)檢測主要細(xì)胞因子HIF-1α,HIF-2α,MiR-146a,Bcl-2和自噬標(biāo)記基因ULK-1,ATG-5的表達(dá)。自噬標(biāo)記基因LC-3則通過免疫熒光法檢測。通過基因水平的過表達(dá)和下調(diào)操作,結(jié)合定量聚合酶鏈反應(yīng)和免疫印跡試驗(yàn)等方法檢測mRNA和蛋白,證實(shí)miR-146a與Bcl-2的相互作用。結(jié)果低氧條件能夠維持軟骨細(xì)胞表型,促進(jìn)細(xì)胞自噬,并通過HIF-1α而不是HIF-2α促進(jìn)miR-146a的表達(dá),但是miR-146a對HIF-1α并無反作用。低氧誘導(dǎo)細(xì)胞自噬需要HIF-1α,miR-146a和Bcl-2的介入。低氧誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá),HIF-1α促進(jìn)miR-146a的表達(dá),而miR-146a卻顯著阻止自噬抑制劑Bcl-2的表達(dá),從而促進(jìn)細(xì)胞自噬。但是Bcl-2對HIF-1α和miR-146a的表達(dá)則均無影響。HIF-1α與miR-146a的缺失或者Bcl-2的過表達(dá)都會(huì)抑制低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬。結(jié)論HIF-1α,MiR-146a和Bcl-2在低氧誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞自噬中都產(chǎn)生關(guān)鍵作用。低氧條件下,HIF-1α和MiR-146a通過抑制Bcl-2的表達(dá)而促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬。我們推斷,miR-146a可能將成為阻止骨性關(guān)節(jié)炎軟骨退變的新治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background and objective there have been many studies on the etiology of Osteoarthritis Osteoarthritis (Osteoarthritis), such as the role of pro-inflammatory cytokines, the regulatory effect of cartilage degradation response (miR-146a), the role of hypoxia-stimulated chondrocytes and autophagy of chondrocytes in osteoarthritis. But there was no report of the relationship between miR-146a and autophagy in chondrocytes. The purpose of this study was to clarify the relationship between miR-146a and autophagy of chondrocytes under hypoxic conditions. Methods chondrocytes were cultured under different levels of oxygen content. The expression of major cytokines (HIF-1 偽, HIF-2 偽, MiR-146a, Bcl-2 and ULK-1 / ATG-5) was detected by quantitative Polymerase Chain reaction (Polymerase) and Western blot assay (Western blot). The autophagic marker gene (LC-3) was detected by immunofluorescence assay. Expression and down-regulation operations, The interaction between miR-146a and Bcl-2 was confirmed by quantitative polymerase chain reaction and Western blotting. Results hypoxia could maintain the phenotype of chondrocytes, promote autophagy, and promote the expression of miR-146a through HIF-1 偽 instead of HIF-2 偽. However, miR-146a had no reaction to HIF-1 偽. Hypoxia induced autophagy required the intervention of HIF-1 偽 miR-146a and Bcl-2. Hypoxia induced HIF-1 偽 expression increased miR-146a expression, while miR-146a significantly inhibited the expression of autophagy inhibitor Bcl-2. But Bcl-2 had no effect on the expression of HIF-1 偽 and miR-146a. HIF-1 偽 and miR-146a deletion or over-expression of Bcl-2 could inhibit hypoxia induced autophagy. Conclusion HIF-1 偽 MiR-146a and Bcl-2 can both produce in hypoxia-induced chondrocyte autophagy. HIF-1 偽 and MiR-146a promote chondrocyte autophagy by inhibiting the expression of Bcl-2 under hypoxia. We infer that miR-146a may be a new therapeutic target to prevent cartilage degeneration in osteoarthritis.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3

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本文編號：1620912