本文選題：布比卡因　切入點(diǎn)：左旋布比卡因　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究1mM布比卡因與1mM左旋布比卡因培養(yǎng)24-48小時(shí)后人大腸腺癌細(xì)胞系Caco-2的各項(xiàng)腫瘤細(xì)胞活性指標(biāo)以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平,包括:癌細(xì)胞遷移能力,核蛋白Ki67,膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI),78kDa葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(Grp78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)。方法:本實(shí)驗(yàn)于體外培養(yǎng)人大腸腺癌細(xì)胞株Caco-2并將細(xì)胞隨機(jī)分為四組:空白組(N組);載體對照組(V組)-1mM DPBS液;布比卡因組(B組)-1mM鹽酸布比卡因;左旋布比卡因組(L組)-1mM鹽酸左旋布比卡因。各組在相同條件下培養(yǎng)24小時(shí)后(劃痕實(shí)驗(yàn)取24小時(shí)與48小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)),使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以檢測癌細(xì)胞的遷移能力;使用免疫熒光技術(shù)計(jì)算Ki67陽性率比較組間細(xì)胞周期情況;使用流式細(xì)胞術(shù)檢測膜聯(lián)蛋白V和碘化丙啶的表達(dá)情況以研究大腸癌細(xì)胞的凋亡水平;使用蛋白免疫印跡法和免疫熒光實(shí)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路標(biāo)志蛋白Grp78和CHOP的表達(dá)水平與核聚集現(xiàn)象。結(jié)果:在連續(xù)48小時(shí)體外培養(yǎng)過程中,布比卡因組(p0.01)與左旋布比卡因組(p0.001)的大腸癌細(xì)胞遷移速度顯著慢于空白組與載體對照組;在24小時(shí)培育后,B組與L組的癌細(xì)胞胞核中Ki67的陽性率(B組為54.93±7.64,L組為57.23±8.04)顯著低于N組(92.33±6.74)和V組(98.66±1.17)(p0.01);通過流式細(xì)胞術(shù)測得24小時(shí)培育后,布比卡因與左旋布比卡因處理并未引起大腸癌細(xì)胞的顯著凋亡;通過Western Blot和免疫熒光技術(shù)測得相比N組和V組,Grp78在B組和L組中表達(dá)明顯降低(p0.05),而CHOP在B組和L組中表達(dá)明顯增高(p0.05),同時(shí)CHOP在熒光圖中呈現(xiàn)顯著的核聚集現(xiàn)象。結(jié)論:在體外培養(yǎng)的條件下,1mM布比卡因或左旋布比卡因24-48小時(shí)的處理可使人大腸腺癌細(xì)胞的遷移能力與增殖能力受到同等水平的顯著抑制但不能誘發(fā)凋亡,其分子機(jī)制可能與酰胺類局麻藥物對癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的強(qiáng)化有關(guān)。但須注意的是體內(nèi)外細(xì)胞培育理化環(huán)境存在差異,關(guān)于局麻藥物對大腸癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective: to study the tumor cell activity and the expression level of endoplasmic reticulum stress pathway markers in human colorectal adenocarcinoma cell line Caco-2 after culture of 1 mm bupivacaine and 1 mm levobupivacaine for 24-48 hours, including the ability of cancer cell migration. The nucleoprotein Ki67, annexin V) and GRP 78 kDa glucose regulatory protein (GRP 78) and C / EBP homologous protein CHOPP78) were cultured in vitro, and the cells were randomly divided into four groups: blank group N group; vector group N; vector. Control group (group V): 1 mm DPBS solution; Bupivacaine group (group B) and bupivacaine hydrochloride (group B); The levobupivacaine group was treated with L-bupivacaine hydrochloride (L-1mm) for 24 hours under the same conditions (24 hours and 48 hours after scratch test), and cell scratch test was used to detect the migration ability of cancer cells. Immunofluorescence technique was used to calculate the positive rate of Ki67 and flow cytometry was used to detect the expression of connexin V and pyridine iodide in order to study the apoptosis level of colorectal cancer cells. Western blotting and immunofluorescence were used to detect the expression level of Grp78 and CHOP, and the nuclear aggregation phenomenon of endoplasmic reticulum stress pathway markers. Results: during 48 hours of continuous culture in vitro, The migration rate of colorectal cancer cells in bupivacaine group (P 0.01) and levobupivacaine group (P 0.001) was significantly slower than that in blank group and vector control group. After 24 hours incubation, the positive rates of Ki67 in the nuclei of cancer cells in group B and group L were 54.93 鹵7.64 渭 g / L and 57.23 鹵8.04, respectively, which were significantly lower than those in group N (92.33 鹵6.74) and group V (98.66 鹵1.17p0.01), and were measured by flow cytometry for 24 hours. Bupivacaine and levobupivacaine did not induce significant apoptosis in colorectal cancer cells. Compared with group N and group V, the expression of CHOP in group B and L was significantly lower than that in group N and group V by Western Blot and immunofluorescence, while the expression of CHOP in group B and L was significantly higher than that in group B and L. Meanwhile, CHOP showed a significant nuclear aggregation in fluorescence images. Conclusion: under the condition of culture in vitro, 1 mm bupivacaine or levobupivacaine for 24-48 hours can significantly inhibit the migration and proliferation of human intestinal adenocarcinoma cells, but can not induce apoptosis. The molecular mechanism may be related to the enhancement of the endoplasmic reticulum stress pathway in cancer cells induced by amides, but it should be noted that there are differences in the physical and chemical environment of cell culture in vivo and in vitro. The inhibitory effect of local anesthetic on colorectal cancer cells and its mechanism need further study.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R614

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