本文關(guān)鍵詞： 低強(qiáng)度脈沖超聲 骨性關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞外基質(zhì) 低強(qiáng)度脈沖超聲 骨性關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 蛋白激酶B(Akt) 細(xì)胞外基質(zhì)　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分:低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)人骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)代謝的影響目的:探討低強(qiáng)度脈沖超聲(LIPUS)對(duì)體外原代培養(yǎng)的人骨性關(guān)節(jié)炎(OA)軟骨細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的影響。方法:取膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后廢棄軟骨分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色與Ⅱ型膠原細(xì)胞免疫化學(xué)染色鑒定,分別用流式細(xì)胞儀、q PCR技術(shù)及Western blot技術(shù)檢測(cè)不同超聲強(qiáng)度(0、30、60、90 m W/cm2)條件下軟骨細(xì)胞的凋亡率和Ⅱ型膠原(COL2α1)、蛋白聚糖(aggrecan)、基質(zhì)金屬酶13(MMP13)在m RNA及蛋白水平的表達(dá)差異。結(jié)果:流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示,30、60、90 m W/cm2組的細(xì)胞凋亡率[(7.75±0.79)%、(8.52±0.91)%、(11.38±0.85)%]均較對(duì)照組低[(18.13±0.83)%,P0.05];30、60、90 m W/cm2組細(xì)胞的COL2α1和aggrecan在m RNA及蛋白水平均高于對(duì)照組(P0.05),MMP13在m RNA及蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(P0.05),但各處理組之間不呈強(qiáng)度依賴性。結(jié)論:LIPUS能夠抑制體外單層培養(yǎng)的人OA軟骨細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)軟骨ECM的合成,抑制軟骨ECM的分解,從而用于OA的治療并延緩其發(fā)展。第二部分:低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)人骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞影響的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究目的:探討低強(qiáng)度脈沖超聲是否通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)人骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。方法:取第一部分培養(yǎng)的人OA軟骨細(xì)胞,經(jīng)鑒定符合實(shí)驗(yàn)所需;將第2代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為OA對(duì)照組、30 m W/cm2LIPUS處理的OA組、LIPUS聯(lián)合5μmol/L LY294002處理的OA組,LIPUS刺激20min/d×7 d;采用流式細(xì)胞學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞中II型膠原蛋白、蛋白聚糖、MMP13在m RNA水平的表達(dá),Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中COL2α1、aggrecan、MMP13、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:與OA對(duì)照組相比,給予超聲刺激后,LIPUS處理的OA組細(xì)胞內(nèi)COL2α1、aggrecan m RNA和蛋白水平均增高,MMP13表達(dá)及細(xì)胞凋亡率降低,p-Akt蛋白的表達(dá)顯著增加,Akt的表達(dá)則與OA對(duì)照組無(wú)顯著性差異;與LIPUS處理的OA組細(xì)胞相比,LIPUS聯(lián)合5μmol/L LY294002處理的OA組細(xì)胞中COL2α1、aggrecan m RNA和蛋白表達(dá)均降低,MMP13表達(dá)及細(xì)胞凋亡率增高,p-Akt蛋白的表達(dá)顯著降低,Akt的表達(dá)則與LIPUS處理的OA組無(wú)顯著性差異。結(jié)論:LIPUS可以降低人OA軟骨細(xì)胞凋亡率,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成并抑制其降解,該作用機(jī)制可能是通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控的。
[Abstract]:Part I: effects of low intensity pulsed ultrasound on apoptosis and extracellular matrix metabolism in chondrocytes of human osteoarthritis objective: to investigate the effect of low intensity pulsed ultrasound (LIPUS) on apoptosis of chondrocytes in primary culture of human osteoarthritis (OAA) in vitro. Methods: chondrocytes were isolated and cultured from abandoned cartilage after knee arthroplasty. It was identified by toluidine blue staining and type 鈪，

本文編號(hào)：1550508