本文關鍵詞： 低強度脈沖超聲 骨性關節(jié)炎 軟骨細胞 細胞凋亡 細胞外基質(zhì) 低強度脈沖超聲 骨性關節(jié)炎 軟骨細胞 蛋白激酶B(Akt) 細胞外基質(zhì)　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分:低強度脈沖超聲對人骨性關節(jié)炎軟骨細胞凋亡和細胞外基質(zhì)代謝的影響目的:探討低強度脈沖超聲(LIPUS)對體外原代培養(yǎng)的人骨性關節(jié)炎(OA)軟骨細胞凋亡和細胞外基質(zhì)(ECM)的影響。方法:取膝關節(jié)置換術后廢棄軟骨分離培養(yǎng)軟骨細胞,經(jīng)甲苯胺藍染色與Ⅱ型膠原細胞免疫化學染色鑒定,分別用流式細胞儀、q PCR技術及Western blot技術檢測不同超聲強度(0、30、60、90 m W/cm2)條件下軟骨細胞的凋亡率和Ⅱ型膠原(COL2α1)、蛋白聚糖(aggrecan)、基質(zhì)金屬酶13(MMP13)在m RNA及蛋白水平的表達差異。結(jié)果:流式細胞學檢測顯示,30、60、90 m W/cm2組的細胞凋亡率[(7.75±0.79)%、(8.52±0.91)%、(11.38±0.85)%]均較對照組低[(18.13±0.83)%,P0.05];30、60、90 m W/cm2組細胞的COL2α1和aggrecan在m RNA及蛋白水平均高于對照組(P0.05),MMP13在m RNA及蛋白表達水平低于對照組(P0.05),但各處理組之間不呈強度依賴性。結(jié)論:LIPUS能夠抑制體外單層培養(yǎng)的人OA軟骨細胞的凋亡,促進軟骨ECM的合成,抑制軟骨ECM的分解,從而用于OA的治療并延緩其發(fā)展。第二部分:低強度脈沖超聲對人骨性關節(jié)炎軟骨細胞影響的信號轉(zhuǎn)導機制研究目的:探討低強度脈沖超聲是否通過PI3K/Akt信號通路對人骨性關節(jié)炎軟骨細胞產(chǎn)生保護作用。方法:取第一部分培養(yǎng)的人OA軟骨細胞,經(jīng)鑒定符合實驗所需;將第2代軟骨細胞隨機分為OA對照組、30 m W/cm2LIPUS處理的OA組、LIPUS聯(lián)合5μmol/L LY294002處理的OA組,LIPUS刺激20min/d×7 d;采用流式細胞學法檢測細胞凋亡率,實時定量PCR法檢測細胞中II型膠原蛋白、蛋白聚糖、MMP13在m RNA水平的表達,Western blot法檢測細胞中COL2α1、aggrecan、MMP13、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表達。結(jié)果:與OA對照組相比,給予超聲刺激后,LIPUS處理的OA組細胞內(nèi)COL2α1、aggrecan m RNA和蛋白水平均增高,MMP13表達及細胞凋亡率降低,p-Akt蛋白的表達顯著增加,Akt的表達則與OA對照組無顯著性差異;與LIPUS處理的OA組細胞相比,LIPUS聯(lián)合5μmol/L LY294002處理的OA組細胞中COL2α1、aggrecan m RNA和蛋白表達均降低,MMP13表達及細胞凋亡率增高,p-Akt蛋白的表達顯著降低,Akt的表達則與LIPUS處理的OA組無顯著性差異。結(jié)論:LIPUS可以降低人OA軟骨細胞凋亡率,促進細胞外基質(zhì)的合成并抑制其降解,該作用機制可能是通過PI3K/Akt信號通路調(diào)控的。
[Abstract]:Part I: effects of low intensity pulsed ultrasound on apoptosis and extracellular matrix metabolism in chondrocytes of human osteoarthritis objective: to investigate the effect of low intensity pulsed ultrasound (LIPUS) on apoptosis of chondrocytes in primary culture of human osteoarthritis (OAA) in vitro. Methods: chondrocytes were isolated and cultured from abandoned cartilage after knee arthroplasty. It was identified by toluidine blue staining and type 鈪，

本文編號：1550508