本文關(guān)鍵詞： 老齡 膿毒癥 煙堿型乙酰膽堿受體 骨骼肌 異質(zhì)化　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 研究老齡對膿毒癥引起的不同部位骨骼肌煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)異質(zhì)化的影響；從不同部位骨骼肌煙堿型乙酰膽堿受體異質(zhì)化的改變探討其可能發(fā)生的機(jī)制。方法健康成年雄性和老年雄性SPF級Sprague-Dawley (SD)大鼠各20只。成年大鼠鼠齡5月,體重220～250 g；老年大鼠鼠齡20月,體重475～500 g。采用隨機(jī)數(shù)字表法,將成年大鼠隨機(jī)分為2組(n=10)：假手術(shù)組(Sham組)、膿毒癥組(CLP組)；老年大鼠按上述分組方式同樣分成2組(n=10)。假手術(shù)組大鼠僅行開腹盲腸探查,不予盲腸結(jié)扎。膿毒癥組大鼠通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(Cecal ligation and puncture,CLP)構(gòu)建膿毒癥模型。在建模(CLP)或假手術(shù)(Sham)的前24 h、后24 h分別取大鼠尾靜脈和腹主動(dòng)脈血,采用ELISA法檢測血清中白細(xì)胞介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子a (TNF-α)水平；在建�；蚣偈中g(shù)后24 h觀察大鼠存活率；觀察建模后24 h各組大鼠水平活動(dòng)距離和直立次數(shù)。處死剩余存活大鼠,進(jìn)行標(biāo)本采集。取脛前肌和膈肌,采用免疫熒光法測定γ-nAChR和α7-nAChR在脛前肌和膈肌細(xì)胞膜上的表達(dá)和分布；通過western-blot測定不同部位肌肉中γ-nAChR、a7-nAChR和neuregulin-1三種蛋白表達(dá)量。結(jié)果(1)細(xì)胞因子水平：建模前24 h,各組間大鼠IL-6和TNF-a差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。建模后24 h與建模前比較,CLP組IL-6和TNF-a水平較Sham組明顯增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)各組大鼠水平活動(dòng)距離和直立次數(shù)的比較：在水平活動(dòng)距離比較中,與Sham-Adult組比較,Sham-Aged組、CLP-Adult組和CLP-Aged組活動(dòng)距離明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); Sham組和CLP組組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn),Aged組活動(dòng)距離均較Adult組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在直立次數(shù)比較中,與Sham-Adult組比較,Sham-Aged組和CLP-Adult組直立次數(shù)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與Sham-Aged組比較,CLP-Adult組直立次數(shù)進(jìn)一步下降(P0.05)。CLP-Aged組未測出。(3)CLP組和Sham組γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：與Sham組比較,CLP組大鼠骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。γ-nAChR和α7-nAChR蛋白分布于骨骼肌細(xì)胞膜上。(4)老年組和成年組γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：與正常成年組比較,正常老年組骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與膿毒癥成年組比較,膿毒癥老年組骨骼肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；膿毒癥老年組和成年組γ-nAChR和a7-nAChR表達(dá)量均較正常老年組和成年組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)脛前肌和膈肌γ-nAChR和α7-nAChR表達(dá)量：在膿毒癥狀態(tài)下的老年組與成年組中,與脛前肌比較,膈肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6) γ-nAChR和α7-nAChR在Sham組和CLP組中的表達(dá)構(gòu)成比：在脛前肌的Sham-Adult組中,α7-nAChR表達(dá)較γ-nAChR多,但Sham-Aged組γ-nAChR的表達(dá)開始增加。在膈肌的Sham-Adult組中,α7-nAChR表達(dá)繼續(xù)減少而γ-nAChR的表達(dá)繼續(xù)增加,Sham-Aged組趨勢更加明顯。但γ-nAChR和α7-nAChR的表達(dá)在各亞組中均維持在50%左右。在脛前肌的CLP-Adult組中,α7-nAChR表達(dá)與γ-nAChR接近。在膈肌的CLP-Adult組中,α7-nAChR表達(dá)增加而γ-nAChR的表達(dá)相對減少,CLP-Aged組中γ-nAChR表達(dá)略微增加,α7-nAChR略微減少。同樣,γ-nAChR和α7-nAChR的表達(dá)在不同亞組中均維持在50%左右。(7) neuregulin-1蛋白表達(dá)量：與Sham組的成年大鼠相比,Sham組老年大鼠脛前肌和膈肌中的neuregulin-1蛋白均減少(P0.05)。同樣,CLP老年組的neuregulin-1蛋白表達(dá)量較膿毒癥成年組減少(P0.05),并且膈肌中neuregulin-1蛋白表達(dá)量較脛前肌減少(P0.05)。結(jié)論 (1)膿毒癥和老齡均可導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞膜上幼稚型乙酰膽堿受體(γ-nAChR)和神經(jīng)型乙酰膽堿受體(α7-nAChR)表達(dá)升高,并分布于骨骼肌整個(gè)細(xì)胞膜。(2)老齡可加重膿毒癥導(dǎo)致的骨骼肌nAChR異質(zhì)化。(3)膿毒癥條件下膈肌較脛前肌表現(xiàn)出明顯的受體異質(zhì)化程度,可能與膈肌中a7-nAChR表達(dá)比例增加有關(guān)。(4)老齡和膿毒癥對骨骼肌nAChR異質(zhì)化均為主要影響因素。(5)老齡和膿毒癥可能通過neuregulin-1-ErbB(神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體)信號通路調(diào)節(jié)nAChR。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of aging on the heterogeneity of skeletal muscle nicotinic acetylcholine receptor ( n = 10 ) in adult male and old male SPF Sprague - Dawley rats ( n = 10 ) . The rats were divided into 2 groups ( n = 10 ) by ELISA . ( 3 ) Compared with Sham - Adult group , the expression of 緯 - nCR and 偽7 - nCR protein in the skeletal muscle of the aged group was significantly higher than that in Sham - Adult group ( P0.05 ) . In the Sham - Adult group , the expression of 偽 7 - nR R R R and 偽 7 - nR R R R were decreased significantly ( P < 0 . 05 ) .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614

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本文編號：1524966