發(fā)布時(shí)間：2018-02-16 11:11

  本文關(guān)鍵詞： S180肉瘤 蝎毒多肽提取物 自噬 腫瘤干細(xì)胞　出處：《濟(jì)南大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:以小鼠S180肉瘤為研究對(duì)象,觀察蝎毒多肽提取物(PESV)聯(lián)合雷帕霉素(RAPA)對(duì)S180肉瘤生長(zhǎng)的影響及自噬相關(guān)因子Beclin1和MAP1LC3A和腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD133和CD90的蛋白表達(dá)變化,探討蝎毒多肽提取物抑制S180肉瘤的作用機(jī)制,為臨床抗腫瘤治療提供理論依據(jù)。方法:1.建立小鼠S180肉瘤皮下荷瘤模型,隨機(jī)分為荷瘤對(duì)照組、PESV高、低劑量組、雷帕霉素(RAPA組)和聯(lián)合組(即PESV高+RAPA組),每組10只,連續(xù)干預(yù)21天。隔日用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤體積和用天平測(cè)小鼠體重,繪制腫瘤體積增長(zhǎng)曲線并計(jì)算抑瘤率,觀察各實(shí)驗(yàn)用藥組對(duì)S180肉瘤移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。2.常規(guī)HE染色,光鏡下觀察S180肉瘤組織病理學(xué)改變。3.激光共聚焦顯微技術(shù)檢測(cè)S180肉瘤組織中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表達(dá)。4.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)S180肉瘤組織中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表達(dá)。5.Western blot法檢測(cè)S180肉瘤組織中Beclin1、MAP1LC3A、CD133和CD90蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.各個(gè)實(shí)驗(yàn)用藥組對(duì)小鼠S180肉瘤移植瘤生長(zhǎng)的影響藥物干預(yù)后,pesv高、低劑量組、rapa組和聯(lián)合組小鼠s180肉瘤移植瘤體積增長(zhǎng)速度較荷瘤對(duì)照組均減慢,瘤重亦降低,抑瘤率分別為25.4%、15.3%、34.0%和42.5%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05,p0.01);與rapa組比較,聯(lián)合組的瘤重和腫瘤體積亦均存在顯著差異(p0.05);與pesv低劑量相比,pesv高劑量組腫瘤體積減小,腫瘤生長(zhǎng)減慢(p0.05)。2.各個(gè)實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織的病理學(xué)變化he染色后光鏡下觀察,可見(jiàn)對(duì)照組壞死區(qū)較少且面積較小,少見(jiàn)核固縮等形態(tài)學(xué)變化。聯(lián)合組、rapa組和pesv高、低劑量組可見(jiàn)多個(gè)大面積片狀壞死區(qū),大部分腫瘤細(xì)胞呈呈現(xiàn)核固縮、核碎裂等多種細(xì)胞死亡形態(tài)學(xué)改變。聯(lián)合組腫瘤組織壞死區(qū)域最大。給藥組亦可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)無(wú)定形,核碎斷的表現(xiàn),可能是腫瘤細(xì)胞自噬的結(jié)果。癌巢周?chē)袉魏思?xì)胞等炎細(xì)胞的浸潤(rùn)。3.pesv聯(lián)合rapa對(duì)s180肉瘤組織beclin1、map1lc3a、cd133和cd90蛋白表達(dá)水平的影響應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)可見(jiàn),beclin1、map1lc3a、cd133和cd90在胞漿與胞膜上均有表達(dá),cd133與cd90主要表達(dá)于細(xì)胞膜上,為綠色熒光著色。與荷瘤對(duì)照組相比,其它給藥組的beclin1和map1lc3a熒光強(qiáng)度均增高,而cd133與cd90熒光強(qiáng)度降低。聯(lián)合組beclin1和map1lc3a熒光強(qiáng)度最高,cd133與cd90熒光強(qiáng)度最低。免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果顯示,與荷瘤對(duì)照組比較,給藥組beclin1、map1lc3a表達(dá)均增多(p0.05,p0.01);cd133和cd90表達(dá)降低(p0.05,p0.01)。聯(lián)合組beclin1、map1lc3a表達(dá)顯著增多(p0.01),cd133和cd90表達(dá)顯著降低(p0.01)。與pesv低劑量組相比,pesv高劑量組beclin1和map1lc3a表達(dá)增多,cd133和cd90表達(dá)明顯降低(p0.05)。westernblot半定量法檢測(cè)結(jié)果顯示,聯(lián)合組、rapa組,pesv高低劑量組與荷瘤對(duì)照組比較,beclin1、map1lc3a的表達(dá)條帶均增高,cd133和cd90的表達(dá)條帶均減弱。聯(lián)合治療組beclin1、map1lc3a的表達(dá)條帶表達(dá)顯著增高(p0.01),cd133和cd90的表達(dá)條帶顯著減弱(p0.01)。檢測(cè)結(jié)果與免疫組織化學(xué)法和免疫熒光共聚焦法檢測(cè)結(jié)果基本一致。結(jié)論:1.PESV聯(lián)合RAPA可明顯抑制小鼠S180移植瘤的生長(zhǎng);2.PESV與RAPA可分別上調(diào)Beclin1、MAP1LC3A蛋白表達(dá),可能與促進(jìn)S180肉瘤細(xì)胞自噬性死亡有關(guān)。3.PESV與RAPA可分別下調(diào)CD133和CD90蛋白表達(dá),可能與抑制S180肉瘤中腫瘤干細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)。4.PESV聯(lián)合RAPA可能通過(guò)協(xié)同增強(qiáng)細(xì)胞自噬和抑制腫瘤干細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。
[Abstract]:Objective: to S180 sarcoma in mice as the research object, the observation of polypeptide extract from scorpion venom (PESV) combined with rapamycin (RAPA) on the expression of S180 sarcoma growth and autophagy related genes Beclin1 and MAP1LC3A and tumor stem cell markers CD133 and CD90 protein and explore the mechanism of PESV inhibits S180 sarcoma, theory on the basis of clinical treatment of tumor. Methods: 1. to establish a model of S180 sarcoma in mice subcutaneous xenograft tumor, were randomly divided into control group, high PESV, low dose group, rapamycin (RAPA group) and combination group (PESV + RAPA group), 10 rats in each group. The intervention lasted 21 days. The next day with a vernier caliper. Measurement of tumor volume and body weight of mice by measuring tumor volume, draw the growth curve and calculate the inhibitory rate, observe the treatment group on the growth of S180 sarcoma in the inhibition of.2. by routine HE staining, observed under light microscope and S180 sarcoma tissue disease Beclin1, science.3. laser scanning confocal microscopy to detect S180 sarcoma tissue MAP1LC3A, CD90 protein expression of CD133 and Beclin1, detection of S180 sarcoma.4. immunohistochemical method in MAP1LC3A, the expression of CD133 and CD90 Beclin1 protein,.5.Western blot detection of S180 sarcoma in MAP1LC3A, the levels of CD133 and CD90 protein expression. Results: each experiment group 1. drugs on the growth of mice S180 sarcoma of the intervention, high PESV, low dose group, Rapa group and combined group of S180 sarcoma in mice transplanted tumor volume growth rate higher than that in tumor control group decreased, tumor weight decreased, the inhibition rates were 25.4%, 15.3%, 34% and 42.5%, the difference there was statistically significant (P0.05, P0.01); compared with Rapa group, the tumor volume and weight in the combined group there were significant difference (P0.05); compared with the low dose of PESV, PESV in high dose group decreased tumor volume, tumor growth slowed down ( P0.05).2. pathology in each experimental group to observe the pathological change of tumor tissue with HE staining, observed in control group the necrosis area is less and smaller, rare nuclear pyknosis morphological changes. The United Group, Rapa group and PESV high and low dose group showed many large areas of necrosis, a large part of the tumor cells are present nuclear pyknosis, nuclear fragmentation and death of a variety of morphological changes of cells. The combination group of tumor necrosis area. The drug group also showed the tumor cell cytoplasm of amorphous, nuclear fragmentation performance may be tumor cell autophagy results. Mononuclear cells infiltration of inflammatory cells in.3.pesv combined with Rapa on S180 sarcoma Beclin1, map1lc3a around the cancer nests, affect the expression level of CD133 and the application of laser scanning confocal microscopy of CD90 protein Beclin1, map1lc3a, visible, CD133 and CD90 in the cytoplasm and cell membrane expressed CD133 and CD90 mainly expressed in the cell membrane On the green fluorescence staining. Compared with the tumor bearing group, other treatment group of Beclin1 and the fluorescence intensity of map1lc3a was increased, and the fluorescence intensity of CD133 and CD90 decreased. Beclin1 and map1lc3a combined group the highest fluorescence intensity, fluorescence intensity of CD133 and CD90 is the lowest. Immunohistochemical staining showed that compared with the control group charge tumor, drug group Beclin1, the expression of map1lc3a were increased (P0.05, P0.01); CD133 and the decreased expression of CD90 (P0.05, P0.01). Group Beclin1, the expression of map1lc3a was significantly increased (P0.01), the expression of CD133 and CD90 significantly decreased (P0.01). Compared with the PESV low dose group, high dose group increased the expression of PESV Beclin1 and map1lc3a, the expression of CD133 and CD90 were significantly lower (P0.05) test results of semi quantitative.Westernblot method showed that the combined group, Rapa group, PESV low dose group and the tumor control group, Beclin1, map1lc3a expression bands were increased, the expression of CD133 and CD90 bands The combined treatment group was decreased. The expression of Beclin1, map1lc3a protein bands increased significantly (P0.01), the expression of CD133 and CD90 bands decreased significantly (P0.01). The detection results of immunohistochemistry and immunofluorescence and confocal method are consistent with the test results. Conclusion: 1.PESV combined with RAPA could obviously inhibit S180 tumor the growth of 2.PESV and RAPA respectively; the upregulation of Beclin1 protein expression, MAP1LC3A, and S180 may promote autophagy sarcoma cell death related to.3.PESV and RAPA were down regulated by CD133 and CD90 protein expression might be related to the inhibition of tumor stem cells in S180 sarcoma growth on.4.PESV combined with RAPA may be through the synergistic enhancement of autophagy and inhibit tumor stem cells play anti the effect of tumor.

【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R738.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李志敏,殷小勇,周靜;急性蝎毒中毒休克2例報(bào)告[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年08期

2 張文萍;蝎毒抗癌多肽的研究進(jìn)展[J];中草藥;2002年12期

3 劉玉清,呂增春,范景利;蝎毒提取液治療惡性腫瘤的臨床應(yīng)用[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

4 楊嘉琳,董偉華,鄭潔麗,柯宇星,袁麗玲,王桂房,何慧華;蝎毒和蝎毒多肽對(duì)家兔血小板聚集的影響[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2003年03期

5 李萬(wàn)忠,何群,嚴(yán)守升;蝎毒的采集、提取、分離、鑒定研究[J];中成藥;2004年07期

6 楊嘉琳,鄭潔麗,柯宇星,袁麗玲,王桂房,何慧華,董偉華;蝎毒和蝎毒多肽對(duì)家兔血小板聚集的影響[J];河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

7 沈東海;高春芳;;不同產(chǎn)地蝎毒的提純分析[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2007年11期

8 許艷萍;閔永文;李長(zhǎng)琦;;蝎毒抗腫瘤及其相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J];新中醫(yī);2012年12期

9 周新華;;蝎毒的生化研究及臨床應(yīng)用[J];遼寧大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1982年S1期

10 周新華;;蝎毒的藥理學(xué)研究[J];沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào);1984年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉云;;蝎毒的分析研究[A];中國(guó)自然資源學(xué)會(huì)天然藥物資源專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)刊[C];1994年

2 陳子偉;林淑冰;陸麗;李智勇;黃耀明;陳文標(biāo);陳耿娜;周鍶;鄭金耀;何清華;李華;何慧華;;從自由基角度初探蝎毒及蝎毒多肽對(duì)大鼠心肌缺血作用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

3 趙杰;王世偉;宋石磊;劉貴安;靳春鵬;張萬(wàn)琴;;蝎毒耐熱蛋白抗癲癇作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

4 邱軼芳;董偉華;;蝎毒多肽對(duì)細(xì)胞因子依賴(lài)細(xì)胞株M-NFS-60輻射后的促增殖作用和機(jī)制[A];2008年中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第十一屆腫瘤和第十二屆免疫專(zhuān)業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

5 莊海峰;陳曉燕;沈建平;鄧殊;沈一平;林圣云;葉寶東;胡致平;鄭智茵;戴鐵英;周郁鴻;;蝎毒抗癌多肽誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[A];2012年浙江省血液病學(xué)年會(huì)論文集[C];2012年

6 楊文華;郝征;;蝎毒多肽干預(yù)慢性粒細(xì)胞白血病NOD/SCID小鼠模型p210、bcl-xl表達(dá)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二屆岐黃論壇——血液病中醫(yī)藥防治分論壇論文集[C];2014年

7 孔天翰;董偉華;韓雪飛;陳華艷;;經(jīng)蝎毒多肽處理后CNE-2Z細(xì)胞膜電位的改變[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)生物毒素毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第4次、中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)毒素專(zhuān)業(yè)組第5次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要[C];2001年

8 崔亞洲;武利存;張維東;;蝎毒多肽提取物抗腫瘤血管生成作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];山東省藥學(xué)會(huì)2006年生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

9 郝征;楊文華;;蝎毒多肽干預(yù)急性白血病髓外浸潤(rùn)傳變的機(jī)制[A];第三屆全國(guó)中醫(yī)藥博士生優(yōu)秀論文頒獎(jiǎng)會(huì)議論文集[C];2012年

10 楊向東;楊文華;史哲新;李紅玉;王興麗;;蝎毒多肽影響白血病細(xì)胞株KG1a干細(xì)胞活化的研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二屆岐黃論壇——血液病中醫(yī)藥防治分論壇論文集[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 朱麗靜;蝎毒的采集和加工技術(shù)[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2000年

2 壽錫海;如何提取蝎毒[N];江蘇科技報(bào);2001年

3 肖桂元;蝎毒研究新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 王金峰;用蝎毒治癌的人——霍岐祥[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2000年

5 壽蝎海;蝎毒的提取與加工[N];山西科技報(bào);2003年

6 李貴如;蝎毒的采集和加工技術(shù)[N];山西科技報(bào);2003年

7 記者　薛鎖明;昔日“孔雀”無(wú)奈東南飛 如今“金蛋”仍難回故里[N];山西日?qǐng)?bào);2006年

8 ;蝎毒的提取[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

9 傅德明;蝎毒抗癌因子治療癌性潰瘍[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

10 傅德明;蝎毒注射液治療神經(jīng)痛[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 沈東海;蝎毒抗癌成分的分離純化及其在大腸桿菌中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

2 付士波;蝎毒體外抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)制探討[D];吉林大學(xué);2005年

3 李春莉;蝎毒抗神經(jīng)興奮肽ANEPⅢ的神經(jīng)保護(hù)作用及其抗神經(jīng)興奮機(jī)制的研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫濤;注射用蝎毒多肽一般藥理與毒理學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2008年

2 王燕;蝎毒增殖肽的分離、純化、鑒定以及促增殖作用和機(jī)制的初步探討[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

3 潘鄰霖;重組蝎毒鎮(zhèn)痛肽微丸制劑的研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2004年

4 李蕊;蝎毒對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用及其電生理機(jī)制[D];吉林大學(xué);2006年

5 劉慧;缺氧復(fù)氧對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的影響及蝎毒干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2006年

6 羅杰;蝎毒神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)活性肽抗癲癇作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

7 王越;蝎毒耐熱蛋白對(duì)急性分離大鼠海馬神經(jīng)元興奮性的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

8 欒蘭;蝎毒對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞（SMMC 7721）和Hela細(xì)胞株的抗腫瘤作用研究及機(jī)制探討[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 封梅;蝎毒耐熱蛋白對(duì)體外培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

10 寧云娜;蝎毒多肽提取物增強(qiáng)環(huán)磷酰胺抑制Lewis肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];濟(jì)南大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1515376