本文關(guān)鍵詞： 富血小板血漿 肌腱干細(xì)胞 肌腱病 動物模型 實驗研究　出處：《成都體育學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過觀察PRP與TSC共混物對兔跟腱病動物模型中肌腱組織I、Ⅲ型膠原及MMP-1的含量表達(dá)情況,探討PRP與TSC共混物治療肌腱病的作用機理,為肌腱病的治療尋求新的思路和安全有效的治療方法,并為其在臨床應(yīng)用提供強有力的理論依據(jù)。方法:選取40只新西蘭大白兔作為實驗對象,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機分為分為模型組(32只)和空白對照組(8只)。模型組動物參照相關(guān)文獻造模,在兔左跟骨附著點距離約2.0cm處注射PGE2 300ng/0.2ml,1周1次,共4次,建立兔跟腱肌腱病動物模型;空白對照組注射等量醫(yī)用生理鹽水。4周后從模型組中隨機抽取8只,與空白對照組在肌骨超聲下對比分析造模效果,將模型組所有32只造模成功的大白兔再次隨機分為四組,A實驗組(共混物組)、B對照組(TSC組)、C對照組(PRP組)與D模型對照組,每組各8只。動物模型穩(wěn)定后,共混物組(A組)予以PRP及TSCs共混物1ml左跟腱局部注射,3周1次,共2次;TSCs組(B組)予第三代肌腱干細(xì)胞以1*104/ml的密度由1ml PBS重懸,左跟腱注射,3周1次,共2次;PRP組(C組)予自體富血小板血漿1ml局部左跟腱治療,3周1次,共2次;模型對照組(D組)于同一時間點給予等量生理鹽水注射。治療6周后,處死動物,收集標(biāo)本。收集肌腱組織制作切片并進行染色,在普通光學(xué)顯微鏡下觀察肌腱組織,比較各組間半定量評分的差異。收集適量肌腱組織,用ELISA法測定各組肌腱纖維組織中MMP-1表達(dá)情況,比較各組間的差異。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)對肌腱組織中I、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)情況進行檢測,比較各組間的差異。結(jié)果:(1)多項半定量評分標(biāo)準(zhǔn)評分結(jié)果:D組最高,A組最低。B/C/D三組與A組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),B組與C組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),B組與D組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組與D組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明PRP、TSC及PRP與TSC共混物三者對跟腱病修復(fù)均有不同程度的修復(fù)作用,其中以PRP與TSC共混物效果最好。(2)Elisa法測定MMP-1表達(dá)含量結(jié)果:A組與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。B、C、D三組與空白對照組比較,含量表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。A組與B、C、D三組比較,差距均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。B組與C組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),B組與D組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。C、D兩組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)熒光定量PCR中I、Ⅲ型膠原表達(dá)測定:A、B、C、D四組I型膠原m RNA表達(dá)相較于空白對照組均有不同程度的增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。其中以A組表達(dá)最高,D組表達(dá)最低,B、C兩組表達(dá)在A、D兩組之間。A組其含量與B、C、D三組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);B組含量與C組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與D兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組含量與D組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。參與造模的四組Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)相較于空白對照組也有不同程度的增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。其中以A組表達(dá)最高,D組表達(dá)最低,B、C兩組表達(dá)在A、D兩組之間。A組其含量與B、C、D三組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);B組含量與C組比較,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與D兩組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C組含量與D組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)本實驗采用局部注射PGE2的化學(xué)造模法誘發(fā)建立兔跟腱病動物模型,其造模方式簡單易行,安全易控制,穩(wěn)定性高。(2)本實驗采用Landesberg法二次離心全血細(xì)胞收集PRP,操作簡便,易于推廣,收集到的PRP濃度高。(3)PRP與TSC共混物能夠恢復(fù)肌腱纖維排列,減輕炎性細(xì)胞浸潤,減輕肌腱細(xì)胞異常增多及細(xì)胞核變形或碎裂。(4)PRP與TSC共混物能夠促進肌腱膠原中I、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)增加,減輕因MMP-1對I型膠原降解所致的機械性能及生物力學(xué)性能降低。(5)PRP與TSC共混物能夠下調(diào)肌腱細(xì)胞中MMP-1表達(dá),抑制了肌腱細(xì)胞基質(zhì)及膠原降解的惡性循環(huán),從而達(dá)到延緩肌腱病炎性反應(yīng)及退行性改變,抑制其病變進程。
[Abstract]:Objective: through the observation of PRP and TSC blends of rabbit Achilles tendon disease animal model in tendon tissue I content, type III collagen and the expression of MMP-1, to explore the mechanism of PRP and TSC blends with tendon disease, seek treatment method and a safe and effective new treatment for tendon disease, and to provide a strong in the theoretical basis of clinical application. Methods: 40 New Zealand white rabbits were selected as experimental subjects. After 1 weeks of feeding, randomly divided into model group (32 rats) and control group (8 rats). The animal model group with reference to the relevant literature model, the distance of about 2.0cm injection of PGE2 300ng/0.2ml in attachment the rabbit left calcaneus, 1 times in 1 weeks, a total of 4 times, the establishment of rabbit tendon disease animal model; the control group was injected with physiological saline after.4 weeks were randomly selected from 8 rats in the model group, and control group in the muscle and bone ultrasound contrast analysis of the model. The will 妯″瀷緇勬墍鏈，

本文編號：1505326