本文關(guān)鍵詞： 甲強(qiáng)龍 脊髓損傷 鋅離子 自噬性死亡 ZIP8　出處：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探討甲強(qiáng)龍(MP)在治療脊髓損傷方面的作用,及其確切的分子機(jī)制,最終為臨床治療提供理論依據(jù)。方法取成年雄性SD大鼠110只,隨機(jī)分為2組,每組根據(jù)時間點(diǎn)又分為不同亞組,每亞組隨機(jī)分配5只。選用改良Allen’s法建立大鼠脊髓(T10)損傷模型,術(shù)前及術(shù)后3d,7d,21d,60d做BBB功能評分;術(shù)后72h取材做尼氏染色觀察神經(jīng)元狀況;術(shù)后12h、18h取材做免疫組化檢測Iba1表達(dá)情況;術(shù)后不同時間點(diǎn)采取原子分光光度技術(shù)檢測組織和血液中鋅離子的改變。在體外實(shí)驗(yàn)中,我們通過免疫熒光觀察細(xì)胞Iba1表達(dá)情況;通過MTT檢測不同處理因素對細(xì)胞存活率的影響;通過ELISA檢測細(xì)胞液中IL-6,IL-10,TNFα的表達(dá)水平;通過Western blot檢測i NOS,LC-3B,ZIP8,NF-κβ和Beclin-1的表達(dá)情況;最后我們用Fluo Zin-3-AM檢測了細(xì)胞內(nèi)鋅離子的變化。結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)MP作用于脊髓損傷后,Basso,Beattie and Bresnahan(BBB)評分和大鼠脊髓損傷區(qū)運(yùn)動神經(jīng)元的數(shù)量均得到提高。此外,我們在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)MP導(dǎo)致大鼠脊髓損傷區(qū)的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量顯著減少,并且MP誘導(dǎo)了小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡。更進(jìn)一步的是,我們發(fā)現(xiàn)MP能顯著減少小膠質(zhì)細(xì)胞激活的相關(guān)因子。同時,MP可引起胞內(nèi)鋅離子和膜通道蛋白ZIP8表達(dá)水平的增高,而TPEN可以逆轉(zhuǎn)MP引起小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡的結(jié)果。最后,我們還發(fā)現(xiàn)在LPS誘導(dǎo)的體外模型中,MP可以抑制NF-κβ。結(jié)論MP會導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡,其主要通過增加細(xì)胞內(nèi)鋅離子的濃度,此外還可能還和NF-κβ的抑制有關(guān)。MP對脊髓損傷起保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role of MPM in the treatment of spinal cord injury and its molecular mechanism, and to provide theoretical basis for clinical treatment. Methods 110 adult male SD rats were randomly divided into two groups. Each group was divided into different subgroups according to time points, and 5 rats were randomly assigned to each subgroup. The model of spinal cord T10 injury was established by modified Allen's method. The BBB functional score was evaluated at the end of 21d before and 3 days after operation, and the neuronal status was observed by Nissl staining at 72 h after operation. The expression of Iba1 was detected by immunohistochemistry at 18h after operation, the changes of zinc ions in tissues and blood were detected by atomic spectrophotometry at different time points after operation. In vitro, the expression of Iba1 was observed by immunofluorescence. The effect of different treatment factors on cell survival was detected by MTT, the expression of IL-10 TNF- 偽 in cell fluid was detected by ELISA, the expression of NF- 魏 尾 and Beclin-1 was detected by Western blot. Finally, Fluo Zin-3-AM was used to detect the changes of zinc ions in cells. Results it was found that the scores of bassoBeattie and Bresnahanna neurons and the number of motor neurons in the injured area of spinal cord were increased after spinal cord injury. We found in vitro that MP resulted in a significant decrease in the number of microglia in the injured area of the spinal cord in rats, and that MP induced autophagic death of microglia. We found that MP could significantly reduce the related factors of microglial activation. At the same time, MP could increase the expression of zinc ion and membrane channel protein ZIP8, while TPEN could reverse the autophagic death of microglia induced by MP. We also found that in vitro model induced by LPS, MP could inhibit NF- 魏 尾. Conclusion MP can induce autophagic death of microglia, mainly by increasing the concentration of zinc ions in the cells. It may also be related to the inhibition of NF- 魏 尾. MP may play a protective role in spinal cord injury.
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

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4 通訊員　陳亞偉　記者　徐丹鹿;我國每年脊髓損傷者數(shù)萬人[N];光明日報(bào);2003年

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本文編號：1505185