發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 23:21

  本文關(guān)鍵詞： 異丙酚 記憶 泛素蛋白酶體系統(tǒng) 蛋白質(zhì)降解　出處：《上海交通大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景麻醉病人在術(shù)前常經(jīng)歷一些應(yīng)激事件,比如車禍或外傷,手術(shù)前的焦慮或恐懼,有創(chuàng)操作以及全麻誘導(dǎo)時(shí)短暫出現(xiàn)的急性呼吸困難等。而病人一旦將這些傷害性信息獲取并形成記憶無疑將對(duì)其身心產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。因此,在獲取以上這些傷害性信息之后,如何有效地減少甚至阻斷這些傷害性信息形成永久記憶具有十分重大的臨床意義。異丙酚因起效快,作用時(shí)間短,反復(fù)使用無蓄積,可控性好,而廣泛用于全身麻醉的誘導(dǎo),全身麻醉的維持以及各種侵入性檢查的的麻醉等。因而,明確異丙酚對(duì)恐懼記憶的影響具有重大的臨床意義。既往有關(guān)異丙酚麻醉對(duì)恐懼記憶的影響眾說紛紜。一方面,有研究發(fā)現(xiàn)異丙酚麻醉可以損害恐懼記憶的形成:如Semba等發(fā)現(xiàn),成年雄性Wistar大鼠在IA(抑制性回避,inhibitory avoidance,IA)訓(xùn)練結(jié)束后即刻若接受60mg/kg的異丙酚麻醉,其24小時(shí)后的避暗潛伏期將明顯縮短。而Gorman等的研究發(fā)現(xiàn)成年雄性Wistar大鼠在海馬依賴的IA訓(xùn)練結(jié)束后的3小時(shí)內(nèi)只有接受較高劑量(150mg/kg或200mg/kg)的異丙酚麻醉,其12小時(shí)后的避暗潛伏期才會(huì)明顯縮短。而另一方面,有研究顯示異丙酚麻醉非但不會(huì)損害恐懼記憶的形成,還會(huì)對(duì)恐懼記憶的形成起到增強(qiáng)作用。如最近一項(xiàng)來自意大利羅馬大學(xué)的研究發(fā)現(xiàn),成年雄性SD大鼠IA訓(xùn)練結(jié)束后的30分鐘內(nèi)若接受300mg/kg或350mg/kg的異丙酚麻醉,其48小時(shí)后的避暗潛伏期將較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)。由此可知,異丙酚麻醉對(duì)恐懼記憶形成的真實(shí)效應(yīng),尚需進(jìn)一步的研究予以揭示。全身麻醉藥物對(duì)記憶影響的機(jī)制至今尚不清楚。目前,研究主要集中在全麻藥物影響記憶形成相關(guān)蛋白的合成方面。眾所周知,蛋白質(zhì)功能的發(fā)揮有賴于蛋白質(zhì)自身的功能狀態(tài)和數(shù)量的多少。影響蛋白質(zhì)功能的因素除了常見的理化因素外,就是可與之發(fā)生共價(jià)連接的翻譯后修飾,如磷酸化,乙�；�,蘇木化,泛素化等。其中泛素化不僅可影響蛋白質(zhì)的功能狀態(tài),其還可影響蛋白質(zhì)的數(shù)量,即泛素介導(dǎo)的依賴ATP的蛋白酶體降解。對(duì)于這樣一種既能影響蛋白質(zhì)功能狀態(tài)又可影響蛋白質(zhì)含量的系統(tǒng),其在記憶的形成中又有怎樣的作用呢?既往眾多的研究發(fā)現(xiàn),恐懼記憶的鞏固和再鞏固均需要泛素蛋白酶體(the ubiquitin proteasome system,UPS)的參與,尤其是泛素蛋白酶體所介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解。如有研究顯示,CD1小鼠在Morris水迷宮訓(xùn)練完成的即刻接受蛋白酶體抑制劑,其24小時(shí)后在定位航行試驗(yàn)中的表現(xiàn)明顯較對(duì)照組差,同時(shí)接受Morris水迷宮訓(xùn)練完成的CD1小鼠在24小時(shí)場(chǎng)景再現(xiàn)后即刻接受蛋白酶體抑制劑,其24小時(shí)后的定位航行表現(xiàn)亦較對(duì)照組明顯差。那么泛素蛋白酶體系統(tǒng)是否也在異丙酚對(duì)恐懼記憶的影響中發(fā)揮著重要作用呢?如果泛素蛋白酶體系統(tǒng)參與異丙酚對(duì)恐懼記憶的影響,那么其機(jī)制又是怎樣呢?這值得我們的探究。本研究旨在揭示異丙酚對(duì)恐懼記憶形成的真實(shí)效應(yīng),探究泛素蛋白酶體系統(tǒng)在異丙酚對(duì)恐懼記憶影響中的作用及其機(jī)制。研究方法本項(xiàng)研究包括四部分。第一部分,我們旨在探究異丙酚對(duì)恐懼記憶形成的真實(shí)效應(yīng)。成年雄性SD大鼠16只,隨機(jī)分為N組和P組。N組和P組實(shí)驗(yàn)大鼠分別在IA訓(xùn)練完成的即刻接受腹腔注射15ml/kg生理鹽水和150mg/kg的異丙酚麻醉,24小時(shí)后進(jìn)行恐懼記憶測(cè)試。第二部分,我們旨在探究異丙酚麻醉后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬內(nèi)泛素蛋白酶體系統(tǒng)的變化。成年雄性SD大鼠20只隨機(jī)分為Nv組,N組和P組。N組和P組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在IA訓(xùn)練結(jié)束即刻分別接受腹腔注射15ml/kg生理鹽水,150mg/kg的異丙酚麻醉,1小時(shí)后取海馬進(jìn)行海馬內(nèi)蛋白泛素化水平的檢測(cè)。Nv組實(shí)驗(yàn)大鼠不做任何處理,處死后取海馬,進(jìn)行海馬內(nèi)蛋白泛素化水平的評(píng)估,反映實(shí)驗(yàn)大鼠在自然狀態(tài)下海馬內(nèi)蛋白的泛素化水平。第三部分,我們旨在探究泛素蛋白酶體系統(tǒng)在異丙酚對(duì)恐懼記憶影響中的作用。行為學(xué)方面,成年雄性SD大鼠40只在海馬內(nèi)置管后隨機(jī)分為D+N組,R+N組,D+P組,R+P組。D+N組實(shí)驗(yàn)大鼠在IA訓(xùn)練前5min接受海馬內(nèi)注射Dmso 0.5ul/side,IA訓(xùn)練后即刻接受腹腔注射生理鹽水15ml/kg;R+N組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在IA訓(xùn)練前5min接受海馬內(nèi)注射PYR41(200umol/ul)0.5ul/side,IA訓(xùn)練完成即刻接受腹腔注射生理鹽水15ml/kg;D+P組實(shí)驗(yàn)大鼠在IA訓(xùn)練前5min接受海馬內(nèi)注射Dmso 0.5ul/side,IA訓(xùn)練后即刻接受腹腔注射150mg/kg異丙酚麻醉;R+P組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在IA訓(xùn)練前5min接受海馬內(nèi)注射PYR41(200umol/ul)0.5ul/side,IA訓(xùn)練完成即刻接受腹腔注射150mg/kg異丙酚麻醉。分子方面,成年雄性SD大鼠24只在海馬內(nèi)置管后隨機(jī)分為D+N組,R+N組,D+P組,R+P組。各組大鼠所接受藥物處理和行為學(xué)處理同前,均在IA訓(xùn)練結(jié)束后1小時(shí),取海馬,檢測(cè)海馬內(nèi)蛋白的泛素化水平。第四部分,我們旨在探究異丙酚麻醉后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬內(nèi)發(fā)生的是何種形式的泛素化或者說我們旨在探究異丙酚麻醉是否會(huì)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬內(nèi)蛋白降解增加。我們用特異識(shí)別K48連接的多聚泛素化鏈的抗體來對(duì)本項(xiàng)研究第二部分中所制備的蛋白樣品進(jìn)行檢測(cè),評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在異丙酚麻醉后所發(fā)生的泛素化是不是K48連接特異的。結(jié)果1.成年雄性SD大鼠在IA訓(xùn)練結(jié)束后即刻接受腹腔注射150mg/kg的異丙酚麻醉,其24小時(shí)后的避暗潛伏期明顯縮短。2.成年雄性SD大鼠在IA訓(xùn)練完成后即刻接受腹腔注射150mg/kg的異丙酚麻醉,1小時(shí)后,其海馬內(nèi)蛋白的泛素化水平顯著升高.3.在IA訓(xùn)練前5min給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬內(nèi)注射泛素活化酶E1抑制劑PYR41可明顯改善異丙酚麻醉所致的恐懼記憶損傷,同時(shí)可逆轉(zhuǎn)異丙酚麻醉所致的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬內(nèi)蛋白的泛素化改變。4.成年雄性SD大鼠在IA訓(xùn)練結(jié)束即刻接受腹腔注射異丙酚150mg/kg,1小時(shí)后,其海馬內(nèi)蛋白所發(fā)生的泛素化修飾并不是K48特異的。結(jié)論異丙酚可損害恐懼記憶的形成,且泛素蛋白酶體系統(tǒng)在異丙酚損害恐懼記憶的過程中發(fā)揮著重要的作用。此外,異丙酚麻醉并不會(huì)引起機(jī)體蛋白質(zhì)降解增加。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R614

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本文編號(hào)：1501684