本文關(guān)鍵詞： miR-b Smad 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞 分化 增殖　出處：《中國(guó)老年學(xué)雜志》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討miR-125靶向Smad4調(diào)控對(duì)非創(chuàng)傷性股骨頭壞死骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與增殖的影響。方法培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系HMSC-bm,將miR-125b模擬物(mimics)、miR-125b抑制物(inhibitor)和對(duì)照(miR-NC)轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi),qRT-PCR和Western印跡檢測(cè)過表達(dá)對(duì)Smad4表達(dá)的影響,構(gòu)建野生型和突變型的Smad4的3'-UTR熒光素酶報(bào)告載體,分別命名為Wt-Smad4和Mut-Smad4,將構(gòu)建好的質(zhì)粒做三組共轉(zhuǎn)染,即Wt-Smad4與miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及miR-NC與miR-125b mimics,檢測(cè)熒光素酶的活性;BMP-2誘導(dǎo)HMSC-bm分化,將miR-125b mimics和si-Smad4轉(zhuǎn)染到分化的細(xì)胞內(nèi),以不轉(zhuǎn)染的細(xì)胞作為參照,檢測(cè)miR-125b靶向Smad4對(duì)細(xì)胞分化的影響;將miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC轉(zhuǎn)染到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HMSC-bm細(xì)胞系,膽囊收縮素(CCK)8檢測(cè)過表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響;將miR-125b mimics與pc DNA3.1-Smad4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染;miR-125b mimics;miR-NC組;miR-NC與pc DNA3.1-Smad4組轉(zhuǎn)染到HMSC-bm細(xì)胞系,檢測(cè)miR-125b靶向Smad4對(duì)細(xì)胞增殖和分化的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染miR-125b mimics組Smad4的相對(duì)表達(dá)量顯著低于miR-125b NC組,轉(zhuǎn)染miR-125b inhibitor組Smad4的相對(duì)表達(dá)量顯著高于miR-125b NC組(P0.01),Western印跡的檢測(cè)結(jié)果與其一致,熒光素酶結(jié)果顯示,Wt-Smad4與miR-125b mimics組熒光素酶活性顯著低于miR-NC與miR-125b mimics組(P0.01),結(jié)果證實(shí)Smad4是miR-125b的靶基因;miR-125b mimics和si-Smad4組Runx2和Osterix mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P0.01);CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示,miR-125b mimics組在24 h、48 h、72 h 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的增殖率顯著高于對(duì)照組(P0.01),miR-125b inhibitor組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖率顯著低于對(duì)照組(P0.01);miR-125b靶向Smad4對(duì)細(xì)胞增殖分化的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-125b mimics組細(xì)胞增殖顯著高于miR-NC組(P0.01),miR-125b mimics與pc DNA3.1-Smad4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖顯著高于miR-NC(P0.05),miR-NC與pc DNA3.1-Smad4組細(xì)胞增殖顯著低于miR-NC組(P0.05),miR-125b mimics組和miR-125b mimics+pc DNA3.1-Smad4組細(xì)胞中Runx2和Osterix的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于miR-NC組(P0.01);miR-NC+pc DNA3.1-Smad4組細(xì)胞中Runx2和Osterix的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于miR-NC組(P0.01)。結(jié)論 Smad4是miR-125b的靶基因,上調(diào)miR-125b促進(jìn)細(xì)胞增殖,下調(diào)miR-125b減弱細(xì)胞增殖,miR-125b靶向Smad4調(diào)控HMSC-bm細(xì)胞增殖和分化。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of miR-125 targeting Smad4 regulation on osteogenic differentiation and proliferation of bone marrow stromal cells with non-traumatic femoral head necrosis. Methods Human bone marrow stromal cell line HMSC-bm was cultured and transfected with miR-125b mimic mimic miR-125b inhibitor and control group miR-NC. The effect of overexpression on Smad4 expression was detected by intracellular qRT-PCR and Western blotting. The wild-type and mutant Smad4 luciferase report vectors named Wt-Smad4 and Mut-Smad4 were constructed. The constructed plasmids were cotransfected into three groups: Wt-Smad4 and miR-125b mimicsMut-Smad4 and miR-125b mimics and miR-NC and miR-125b mimics. the luciferase activity of BMP-2 induced HMSC-bm differentiation. MiR-125b mimics and si-Smad4 were transfected into differentiated cells, and the untransfected cells were used as the reference to detect the effect of miR-125b targeted Smad4 on cell differentiation. MiR-125b mimicsmimiR-125b inhibitor and miR-NC were transfected into the HMSC-bm cell lines at logarithmic growth stage. MiR-125b mimics and PC DNA3.1-Smad4 plasmid were co-transfected into HMSC-bm cell line by co-transfection of miR-125b mimicstmiR-NC group and PC DNA3.1-Smad4 group. Results the relative expression of Smad4 in transfected miR-125b mimics group was significantly lower than that in miR-125b NC group, and the relative expression of Smad4 in miR-125b inhibitor group was significantly higher than that in miR-125b NC group. Luciferase activity in Wt-Smad4 and miR-125b mimics groups was significantly lower than that in miR-NC and miR-125b mimics groups. The results showed that Smad4 was the target gene of miR-125b, and the Runx2 and Osterix mRNA expression levels in si-Smad4 group were significantly lower than those in control group P0.01A CCK8. The proliferation rate of cells at three time points at 24 h and 48 h at 72 h was significantly higher than that at 3 time points in the control group P0.01mmiR-125b inhibitor group. The results showed that the cell proliferation rate of mimics group was significantly lower than that of control group P0.01MR-125b targeted Smad4 on cell proliferation and differentiation. The results showed that the cell proliferation rate of the control group was significantly higher than that of the control group P0.01MR-125b mimics group. The relative mRNA expression of Runx2 and Osterix in miR-NC group was significantly higher than that in miR-NC group and miR-125b mimics PC DNA3.1-Smad4 group. The relative expression of Runx2 and Osterix was significantly higher in the co-transfection group than in the co-transfection group of miR-NCU P0.05miR-NC and PC DNA3.1-Smad4 group. The relative expression of mRNA and Osterix was significantly higher than that in the miR-NC group P0.05miR-125b mimics group and miR-125b mimics PC DNA3.1-Smad4 group, and the mRNA relative expression of Osterix was significantly higher than that in the miR-NC group. The relative expression of Runx2 and Osterix in PC DNA3.1-Smad4 group was significantly lower than that in miR-NC group. Conclusion Smad4 is the target gene of miR-125b. Upregulation of miR-125b promotes cell proliferation and down-regulation of miR-125b attenuates cell proliferation. MiR-125b targets Smad4 to regulate the proliferation and differentiation of HMSC-bm cells.
【作者單位】： 嘉興市武警醫(yī)院骨三科;
【分類號(hào)】：R681.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 薛榮利;張媛媛;李澤慧;周丹;張晨晨;哈小琴;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠脊髓損傷治療中的應(yīng)用[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年10期

2 周明旺;陳威;李盛華;陳嫻;葉丙霖;;MicroRNA表達(dá)對(duì)非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的影響研究進(jìn)展[J];中國(guó)矯形外科雜志;2015年19期

3 安敏;王兆杰;安榮澤;葉含釗;;成骨細(xì)胞向脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2015年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王林;MiRNA-300對(duì)結(jié)直腸癌腫瘤侵襲和增殖的影響及其調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 李鈞;童哲;魏勇;舒正華;王西迅;;miR-125b靶向Smad4調(diào)控非創(chuàng)傷性股骨頭壞死骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與增殖的相關(guān)性[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2017年02期

2 柳海平;李盛華;周明旺;付志斌;葉丙霖;郭鐵峰;;從伏邪理論探討酒精性股骨頭壞死發(fā)病的病因病機(jī)[J];中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志;2016年09期

3 趙素香;侯英諾;張子檀;劉中坡;聶志紅;樊格林;;內(nèi)皮祖細(xì)胞移植聯(lián)合早期運(yùn)動(dòng)改善脊髓損傷區(qū)血管再生及后肢功能[J];中國(guó)組織工程研究;2016年06期

4 喬麗萍;侯世科;孫慧敏;趙少貞;譚軍偉;;移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的角膜堿燒傷家兔模型外周血、房水中VEGF、IL-2變化[J];武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年01期

5 楊迎桂;郭文家;買志福;樊紅艷;趙勇;哈小琴;;角質(zhì)生長(zhǎng)因子、缺氧誘導(dǎo)因子修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠脊髓損傷修復(fù)的影響[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年10期

6 哈小琴;鄧芝云;肖娜娜;朱曉紅;李娟;;紅景天聯(lián)合KGF/HIF-1修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)低氧條件下大鼠脊髓損傷修復(fù)的影響[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年10期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于健;趙建寧;;MicroRNA在骨性關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)矯形外科雜志;2014年23期

2 謝小偉;裴福興;康鵬德;楊靜;沈彬;周宗科;;不同劑量、多療程地塞米松對(duì)大鼠成骨細(xì)胞生物活性及Wnt信號(hào)通路的影響[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2013年08期

3 康鵬德;裴福興;楊靜;沈彬;周宗科;譚鋼;謝小偉;王浩洋;石小軍;;糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)骨細(xì)胞脂肪化與股骨頭壞死的病理機(jī)制研究[J];中華骨科雜志;2013年07期

4 童天朗;高悠水;蔣雷生;;人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成骨向脂肪轉(zhuǎn)分化的研究[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

5 王兆杰;安榮澤;張弛;趙豪;齊新文;趙俊延;;兔成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞橫向分化的研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2012年07期

6 羅磊;譚鋼;廉永云;康鵬德;裴福興;;地塞米松促進(jìn)大鼠顱骨成骨細(xì)胞向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2012年05期

7 朱輝;;早期脊柱脊髓損傷綜合救治新策略[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2012年01期

8 王兆杰;安榮澤;張弛;;縫隙連接通訊對(duì)骨髓中成骨細(xì)胞與脂肪細(xì)胞橫向分化調(diào)控的研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2011年11期

9 宋丹妮;蔣紹艷;史玉朋;常宏;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離與培養(yǎng)[J];中國(guó)醫(yī)藥;2011年09期

10 葉英;萬(wàn)美榮;戴如飛;劉小云;曾因明;;腦脊液誘導(dǎo)人間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)干細(xì)胞神經(jīng)前體細(xì)胞的研究[J];國(guó)際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志;2009年05期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳偉 ,付小兵 ,盛志勇;Review of current progress in the structure and function of Smad proteins[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

2 王啟偉;Smad蛋白信號(hào)網(wǎng)絡(luò)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年04期

3 張遠(yuǎn)強(qiáng),胡靜,劉新平,許若軍;EXPRESSION AND LOCALIZATION OF SMAD4 PROTEIN IN RAT TESTIS DURING THE POSTNATAL DEVELOPMENT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2003年03期

4 徐新保,冷希圣,何振平,梁志清,林凱,魏玉華,于鑫,彭吉潤(rùn);Inhibitory effect of retroviral vector containing anti-sense Smad_4 gene on Ito cell line, LI90[J];Chinese Medical Journal;2004年08期

5 鄭啟新;王運(yùn)濤;郭曉東;;Wild-type Smad3 Gene Enhances the Osteoblastic Differentiation of Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells in Vitro[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

6 王運(yùn)濤,鄭啟新,郭曉東,吳永超,郝杰;Influence of Exogenous TGFβ_1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年01期

7 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年03期

8 ;Berbamine inhibits proliferation and induces apoptosis of KU812 cells by increasing Smad3 activity[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

9 尚政軍;修復(fù)相關(guān)基因Smad3的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2001年05期

10 楊曉 ,孫彥洵 ,周江 ,黃培堂 ,黃翠芬 ,徐曉玲 ,李翠玲 ,GotayJessica ,陳林 ,鄧初夏;Establishment of murine Smad5 double knockout ES cells and the studies on their properties[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 霍艷英;李剛;胡迎春;周平坤;吳德昌;;THE SIGNIFICANCE OF SMAD7 IN TGF-β-MEDIATED SMADS AND ERK/MAPK SIGNAL PATHWAY IN RADIATION-INDUCED TUMORIGENIC HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELLS[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

2 張素平;張然;陳峰;張麗霞;陳曄光;;Smad7 antagonises TGF-β signaling in the nucleus[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 王劍;楊曉;;Gene expression profile in cardiomyocyte-specific Smad4 knock-out mice[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 劉昭廷;王強(qiáng);孟安明;;基因組水平上受斑馬魚Smad2調(diào)控的靶基因[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 ;HSP70 decreases receptor-dependent phosphorylation of Smad2 and blocks TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 ;Maternal Smad3 Deficiency Compromises Decidualization in Mice[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

7 Jingmin Zhao;Jia Wang;Jun Yu;;Inhibitory role of Smad7 in hepatocarcinogenesis in mice and in vitro[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 Bensoussan D.;Stoltz J.F.;de Isla N;;Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells induced by biaxial tension involves Smad3 activation[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

9 ;Function of TGF-β/Smad4 Signaling in the Maintenance of Tissue Homeostasis[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

10 楊曉;;Targeted disruption of Smad4 in mouse epidemis results in failure of hair follicle cycling and formation of skin tumors[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)七屆一次青年研討會(huì)暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 記者 李天舒;先天性心臟病病因被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2009年

2 通訊員 俞志新　記者 李水根;骨碎補(bǔ)總黃酮可以促進(jìn)骨形成[N];健康報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黎錦;氨氯地平通過調(diào)節(jié)Smad的表達(dá)防止腎臟纖維化[D];武漢大學(xué);2014年

2 張俊文;TGF-β信號(hào)通路中兩個(gè)與TβRI相互作用蛋白的功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 胡祥鵬;復(fù)方芪參提取物調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)及miR-145、miR-21表達(dá)發(fā)揮抗肝纖維化—肝細(xì)胞癌作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐濤;NLRC5通過NF-κB與TGF-β1/Smad通路調(diào)控肝星狀細(xì)胞炎癥因子分泌和纖維化的功能及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 徐洪杰;回轉(zhuǎn)條件下成骨細(xì)胞微絲對(duì)BMP2信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控[D];西北工業(yè)大學(xué);2015年

6 黃闖;FTY-720調(diào)節(jié)去勢(shì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化Smad信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王加紅;IL-6對(duì)TGF-β1/Smad3信號(hào)通路介導(dǎo)缺血心肌重構(gòu)的影響及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

8 田彥;三步序貫法對(duì)激素依賴型哮喘患者及激素撤減過程中氣道重塑模型大鼠TGF-β_1/Smad信號(hào)通路的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 計(jì)磊;突變體p53與生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子β信號(hào)在肺癌發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中的作用[D];華東師范大學(xué);2015年

10 牛立慢;TGF-β1/Smad3在四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及其作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林琳;SnoN蛋白在RPE細(xì)胞TGF-β/Smad信號(hào)通路中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 丁雪峰;芪藶強(qiáng)心提取物阻斷Smad3信號(hào)通路抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李祥亭;N-乙酰半胱氨酸對(duì)大鼠肺纖維化模型肺組織Smad家族基因表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 李鑫靜;Smad4、Kindlin-2和Anxa2基因在胃癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 汪呈;靶向Smurf1 HECT結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑的細(xì)胞學(xué)水平驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

6 田茜華;補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)體外培養(yǎng)IVF-ET患者卵巢顆粒細(xì)胞中ACTA及其Smads信號(hào)通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李春杰;新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用[D];蘇州大學(xué);2015年

8 孫景英;CXCL9和Smad3的表達(dá)與新疆維吾爾族銀屑病發(fā)病關(guān)系的研究[D];石河子大學(xué);2015年

9 黃海平;MiR-145通過靶向作用于Smad3抑制鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[D];蘇州大學(xué);2015年

10 劉昌偉;Smad2通過抑制TGF-β1/Smad3介導(dǎo)的膠原合成在肝纖維化中起保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1495294