本文關(guān)鍵詞： 減體積 肝移植 大鼠 模型 NM23-E2載體 shRNA載體 PCNA Cyclin D1 減體積肝移植　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分大鼠減體積肝移植模型的建立目的：建立穩(wěn)定的大鼠減體積肝移植模型；為進一步進行大鼠減體積肝移植術(shù)后肝臟再生的研究提供重要的技術(shù)平臺和前提條件。方法：1.實驗大鼠均為健康的SD大鼠體重260-280g,供體為雌性,受體為雄性,供、受體體重相差10g左右,一般為供體體重比受體體重輕。2.供體單人裸眼操作,在取肝的過程中即進行減體積操作。在供肝切取過程中切除肝臟的左外側(cè)葉、三角葉和尾狀葉(約占全肝體積的40%-50%),修肝時將套管柄置于門靜脈和肝下下腔靜脈的正前方,將幽門靜脈結(jié)扎點外翻于套管外并置于套管柄的左側(cè),即肝臟的左側(cè)；將右腎靜脈結(jié)扎點外翻于套管外并置于套管柄的右側(cè),即肝臟的右側(cè)；供肝套管完成后用灌注液對門靜脈和肝下下腔靜脈進行沖洗；然后以左膈靜脈為標識點進行8-0無損傷血管縫線吊線。3.受體切肝前單人裸眼操作,從新肝移植開始采用雙人裸眼配合操作；供體完成膽道支撐架安置以后,受體即開始手術(shù)；肝上下腔靜脈吻合時,左、右側(cè)予以“8”字縫合固定,后壁和前壁均采用連續(xù)縫合予以吻合,門靜脈和肝下下腔靜脈采用雙袖套法,膽道支撐管法,建立大鼠減體積的穩(wěn)定模型。4.術(shù)后觀察大鼠一般恢復(fù)情況,解剖死亡大鼠了解死因。結(jié)果：減體積肝移植模型供體手術(shù)時間為32±2min,修肝時間為7±2min,受體手術(shù)時間為44±3min,無肝期時間為18±3min,供肝的冷保存時間為51±3min。手術(shù)的成功率為92%,術(shù)后1d的存活率為95%,術(shù)后3d的存活率為85%,術(shù)后5d存活率為80%,術(shù)后7d存活率為75%。結(jié)論：1.大鼠減體積模型采用供體灌注完成后,在供肝切取的過程中進行相應(yīng)肝葉的切除,即可獲得高質(zhì)量、滿意的減體積供肝。供、受體手術(shù)配合,盡量的縮短供肝的冷保存時間。精細血管吻合技術(shù)縮短無肝期、減少術(shù)后出血,對諸多細節(jié)操作的改進等。這些可以盡量的減少大鼠減體積肝移植術(shù)中和術(shù)后的并發(fā)癥,提高大鼠減體積肝移植模型的成功率和長期生存率。是一種值得推廣的大鼠減體積肝移植模型。2.成功的大鼠減體積肝移植模型的建立,為下一步進行大鼠減體積肝移植術(shù)后肝臟的再生的研究提供了研究的基礎(chǔ)和前提。第二部分NM23-E2在大鼠減體積肝移植術(shù)后肝細胞再生中的作用目的：探討在成功建立大鼠減體積肝移植模型的基礎(chǔ)上；探討NM23-E2基因作用于肝移植術(shù)后肝臟再生的進展階段,通過調(diào)節(jié)肝臟增殖周期的Cyclin D1及增殖細胞核抗原(PCNA)而對肝細胞再生起到積極的促進作用。方法：以第一部分所建成功的大鼠減體積肝移植模型為基礎(chǔ),實驗分為五個組,減體積肝移植組(空白對照組),NM23-E2 NC組,NM23-E2過表達組,shRNA NC組,shRNA組。構(gòu)建、擴增、篩選、鑒定及包裝NM23-E2過表達、干擾慢病毒載體及各自陰性對照慢病毒載體,,在大鼠減體積肝移植門靜脈套管前注射上述慢病毒載體,肝移植術(shù)后5天處死大鼠,獲取肝臟標本,進行熒光蛋白檢測,利用蛋白免疫印跡實驗對各組肝組織NM23-E2、PCNA、Cyclin D1蛋白表達的檢測,定量PCR檢測各組肝組織NM23-E2、PCNA、Cyclin D1 mRNA表達變化情況,并用免疫組化檢測三種蛋白陽性細胞表達情況。結(jié)果：在大鼠減體積肝移植門靜脈套管前注射過表達及干擾的NM23-E2慢病毒載體5天后,相應(yīng)的熒光蛋白在肝組織內(nèi)有明顯的表達,表明慢病毒載體攜帶的過表達及干擾基因已成功轉(zhuǎn)染入供肝細胞。Western blot檢測肝組織NM23-E2、PCNA、Cyclin D1蛋白的表達：NM23-E2過表達組三種蛋白表達量均高于對照組(P0.05),shRNA組三種蛋白表達量均低于對照組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Q-PCR檢測肝組織NM23-E2、PCNA、Cyclin D1 mRNA的表達：NM23-E2過表達組三種蛋白mRNA的表達量均高于對照組(P0.05),shRNA組三種蛋白mRNA的表達量均低于對照組(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組、NM23-E2過表達NC組、NM23-E2干擾NC組中三組蛋白及mRNA表達無明顯變化(P0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化顯示:NM23-E2、PCNA、Cyclin D1蛋白陽性細胞在NM23-E2過表達組呈強陽性,在shRNA組呈陰性,在Control組、NM23-E2NC組和shRNANC組呈中度陽性和弱陽性。結(jié)論：運用慢病毒載體攜帶過表達及干擾的NM23-E2經(jīng)門靜脈可以有效地轉(zhuǎn)染到供肝細胞。減體積肝移植后過表達的NM23-E2載體對減體積肝移植術(shù)后肝再生調(diào)控作用成正向調(diào)控作用,shRNA載體對減體積肝移植術(shù)后肝再生調(diào)控作用成負向調(diào)控作用。
[Abstract]:Objective : To establish a stable model for the reduction of liver regeneration after liver transplantation . The results showed that the survival rate of the donor was 92 % , the survival rate was 95 % , the survival rate was 85 % , the survival rate was 80 % , the survival rate was 75 % after operation . The expression of NM23 - E2 , PCNA , Cyclin D1 protein in liver tissues was studied by Western blot , and the expression of NM23 - E2 , PCNA , Cyclin D1 protein in liver tissues was determined by Western blot . The expression of NM23 - E2 , PCNA and Cyclin D1 in liver tissues was detected by Western blot . In the control group , NM23 - E2 , PCNA and Cyclin D1 positive cells were strongly positive in NM23 - E2 overexpression group , and the expression levels of NM23 - E2 , PCNA and Cyclin D1 were significantly positive in the control group , NM23 - E2NC group and shRNANC group .

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R657.3

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 王彬彬;常翠芳;魯艷平;賈藝峰;徐存拴;;NF-κB信號通路在大鼠肝再生中調(diào)節(jié)肝細胞增殖的機理研究[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年06期

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本文編號：1453302