本文關鍵詞： 富血小板血漿 骨關節(jié)炎 軟骨細胞 軟骨基質 白介素-1β Wnt/β-Catenin通路　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:觀察富血小板血漿對兔膝骨關節(jié)炎模型軟骨病理狀態(tài)、IL-1β及Wnt/β-Catenin信號通路的影響,探討其作用機制。方法:48只清潔級新西蘭大白兔隨機分為正常組(Normal group)、空白對照組(Sham group)、模型組(Model group)和實驗組(PRP group),每組 12 只(n=12)。正常組左膝關節(jié)不做任何處理;空白對照組僅切開左膝關節(jié)腔,不做其他任何處理;模型組和實驗組行改良Hulth法制作左膝關節(jié)骨關節(jié)炎模型。造模1周后對實驗組動物取自體耳靜脈血10ml,按Aghaloo法制備富血小板血漿0.8ml行左膝關節(jié)腔注射;空白對照組與模型組關節(jié)腔內按相同方法注射等量生理鹽水(0.8ml)。一周注射一次,連續(xù)注射6周后對實驗動物左膝關節(jié)進行X線攝片,肉眼和鏡下觀察軟骨病理改變并進行評分;電鏡下觀察軟骨細胞超微結構;免疫組化檢測軟骨中Ⅱ型膠原、IL-1β及滑膜中IL-1β的含量,ELISA法檢測關節(jié)液、血清中IL-1β含量并進行相關性分析;實時定量PCR和Western Blot 分別檢測 Wnt/β-Catenin 信號通路中 Wnt1、GSK-3β 及 β-catenin mRNA與蛋白的含量。結果:X線片觀察正常組和空白對照組關節(jié)X線無明顯變化;模型組膝內側的股骨脛骨關節(jié)間隙變窄明顯,關節(jié)面不平整,關節(jié)邊緣有大量骨贅形成,可及呈高密度改變的軟骨下骨;實驗組關節(jié)退行性變化較模型組輕。關節(jié)軟骨Pelletier JP及Mankin's評分正常組和空白對照組較模型組明顯降低(P0.05);實驗組較模型組關節(jié)軟骨Pelletier JP及Mankin's評分明顯降低(P0.05)。透射電鏡觀察到正常組和空白對照組軟骨細胞病理改變不明顯,模型組軟骨細胞損傷程度較實驗組重。Masson與甲苯胺藍染色分別檢測到正常組和空白對照組軟骨中膠原與蛋白多糖含量染色面積率和平均灰度值較模型組明顯增高(P0.05);實驗組較模型組染色面積率和平均灰度值明顯增高(P0.05)。免疫組化檢測正常組和空白對照組軟骨Ⅱ型膠原陽性細胞分數(shù)和平均積分光密度較模型組明顯增高(P0.05),實驗組較模型組陽性細胞分數(shù)和平均積分光密度明顯增高(P0.05)。正常組和空白對照組軟骨、關節(jié)液及血清中IL-1β含量明顯低于模型組(P0.05),實驗組IL-1β含量明顯低于模型組(P0.05),且關節(jié)液與血清中IL-1β成正相關(r2=0.8702,P=0.0000)。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的關節(jié)炎軟骨細胞2代以內培養(yǎng)可以保持細胞表型穩(wěn)定。富血小板血漿組軟骨細胞中Wnt1和β-cateninmRNA及蛋白的表達量較生理鹽水組明顯減少(P0.05);與抑制劑組比較富血小板血漿組Wnt1和β-cateninmRNA及蛋白的表達量增高(P0.05),低于激動劑組(P0.05);富血小板血漿組GSK-3β mRNA及蛋白的表達量較生理鹽水組明顯增加(P0.05);與抑制劑組比較富血小板血漿組GSK-3βmRNA及蛋白表達量降低(P0.05),富血小板血漿組GSK-3βmRNA及蛋白表達量明顯高于激動劑組(P0.05)。結論:富血小板血漿雖不能最終逆轉骨關節(jié)炎的發(fā)展進程,但可通過降低主要致炎因子IL-1β的水平、降低Wnt/β-Catenin信號通路中Wnt1和β-catenin的水平,增加GSK-3β的水平起到減緩關節(jié)軟骨病理損傷程度、抑制蛋白多糖與膠原的降解,在一定程度上延緩骨關節(jié)炎的發(fā)展進程,可能成為治療骨關節(jié)炎的一種新的有效的手段。
[Abstract]:Objective : To observe the effect of platelet - rich plasma on the state of articular cartilage , IL - 1尾 and Wnt / 尾 - Cavities in rabbit knee osteoarthritis . There was positive correlation between synovial fluid and IL - 1尾 in serum ( r2 = 0.8702 , P = 0.0000 ) . Results : The levels of Wnt1 and 尾 - catenin mRNA and protein in platelet - rich plasma group were significantly higher than those in saline group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R684.3

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