本文關(guān)鍵詞：VEGF-a增強BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化及機制的研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：骨折、骨缺損以及骨不連是臨床骨科常見疾病,作為現(xiàn)階段最佳的治療方法之自體骨移植然而也存在其明顯缺點(增加手術(shù)時間、失血、取材有限、增加患者痛苦等)。因此,如何應(yīng)用組織工程的理論和技術(shù)研究一種或者多種強有力的成骨誘導(dǎo)因子變得非常重要。間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作為組織工程人工骨中理想的種子細胞,如何有效地促進MSCs向成骨方向分化是組織工程研究熱點。本研究旨在主要研究血管內(nèi)皮生長a(vascular endothelial growth factor-a,VEGF-a)增強骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)介導(dǎo)MSCs成骨分化以及機制的研究。本研究采用半定量RT-PCR、免疫細胞化學(xué)染色(ICC)、Western blot、堿性磷酸酶(ALP)活性檢測與染色、茜素紅S染色、體內(nèi)異位成骨實驗、Micro-CT(μ-CT)三維成像以及組織切片染色等實驗方法。首先,檢測VEGF-a的內(nèi)源性表達以及重組腺病毒adVEGF-a外源性表達情況;其次,檢測VEGF-a對BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化早晚期成骨標志物活性指標ALP、OPN、OCN以及鈣鹽沉積的影響;然后,利用VEGF-a重組腺病毒通過體內(nèi)實驗,分析VEGF-a對BMP9介導(dǎo)MSCs異位成骨的影響;最后,利用PI3K/Akt抑制劑(LY294002)對VEGF-a影響B(tài)MP9介導(dǎo)MSCs成骨分化進行機制分析。結(jié)果顯示,VEGF-a在MSCs中(MEFs、C3H10T1/2、C2C12以及MC3T3E1)均有表達,但內(nèi)源性表達均很低;VEGF-a能協(xié)同增強BMP9介導(dǎo)MEFs成骨分化的早晚期成骨標志物的活性;在異位成骨實驗中,VEGF-a能增加BMP9介導(dǎo)MEFs異位成骨活性,能明顯增加骨體積,提高成骨活性,但骨密度卻有所下降;VEGF-a協(xié)同增強BMP9介導(dǎo)MEFs成骨分化過程中能明顯激活PI3K/Akt信號通路。應(yīng)用PI3K/Akt抑制劑(LY294002)能明顯抵消這種協(xié)同作用。綜上結(jié)果提示,VEGF-a能明顯協(xié)同增強BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化,可能通過PI3K/Akt信號途徑來調(diào)節(jié)BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R687

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本文編號：1327687