本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞去分化的體外實驗研究

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【摘要】：目的研究白藜蘆醇對體外單層培養(yǎng)條件下兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞去分化的影響,并探討白藜蘆醇(Resveratrol,Resv)抑制體外單層培養(yǎng)條件下兔軟骨細(xì)胞去分化的調(diào)節(jié)機制。方法利用胰蛋白酶聯(lián)合II型膠原酶序貫消化法分離培養(yǎng)正常兔髖關(guān)節(jié)原代軟骨細(xì)胞,并行Alcian Blue細(xì)胞染色鑒定;實驗隨機分五組:空白對照組,0μM Resv組,2.5μM Resv組,5μM Resv組,10μM Resv組,分別于第1、3、5、代細(xì)胞融合達80%以上時提取RNA及蛋白;CCK-8法檢測各組每代軟骨細(xì)胞的在450nm的吸光度,并繪制生長曲線;β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色對去分化的衰老細(xì)胞進行染色;倒置相差顯微鏡下每日觀察細(xì)胞形態(tài),RT-PCR檢測蛋白多糖Aggrecan,Sirt-1,p53,p21以及P16基因的表達水平;western blot檢測Aggrecan,Sirt-1,p53,p21以及P16蛋白表達水平。結(jié)果結(jié)合Alcian Blue染色及形態(tài)學(xué)觀察提示所培養(yǎng)細(xì)胞為兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞;形態(tài)學(xué)觀察及SA-β-gal、Alcian Blue染色顯示在體外連續(xù)單層培養(yǎng)條件下,軟骨細(xì)胞易發(fā)生去分化,而一定濃度范圍的白藜蘆醇可以抑制軟骨細(xì)胞去分化,且隨著傳代次數(shù)增加趨勢愈明顯,Alcian Blue染色提示低濃度Resv(2.5μM)組較其他組聚蛋白多糖表達水平高;β-半乳糖苷酶染色顯示2.5μmol/LResv組藍染的衰老細(xì)胞數(shù)明顯減少;RT-PCR及western blot檢測顯示Resv能夠顯著上調(diào)Sirt1基因及蛋白表達水平,并下調(diào)P53,P21及P16基因的表達水平,抑制細(xì)胞去分化,且不影響細(xì)胞增殖。結(jié)論體外單層連續(xù)培養(yǎng)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞易出現(xiàn)去分化現(xiàn)象,而這一現(xiàn)象與細(xì)胞衰老相關(guān),白藜蘆醇可以抑制這種現(xiàn)象,促進細(xì)胞外基質(zhì)的合成,抑制軟骨細(xì)胞的去分化,這一機制與Sirt1的上調(diào)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3

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