發(fā)布時間：2017-11-19 04:08

  本文關(guān)鍵詞：PLA2G16經(jīng)MAPK通路促進(jìn)骨肉瘤轉(zhuǎn)移

  更多相關(guān)文章： 骨肉瘤 XVI磷脂酶A_2 細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2 肺轉(zhuǎn)移 預(yù)后

【摘要】：研究目的骨肉瘤是兒童和青少年最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,具有高度肺轉(zhuǎn)移傾向,其5年生存率不足20%。因此,深入了解骨肉瘤轉(zhuǎn)移機制,對骨肉瘤治療意義重大。PLA2G16定義為第XVI磷脂酶A2,前期研究發(fā)現(xiàn)其過表達(dá)與骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移及臨床不良預(yù)后相關(guān),但PLA2G16是如何促進(jìn)轉(zhuǎn)移的具體機制尚未闡明。本研究旨在探討PLA2G16調(diào)控骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)功能及機制研究。研究方法1、應(yīng)用實時熒光定量PCR和Western blot檢測骨肉瘤細(xì)胞系中PLA2G16的表達(dá),選擇Saos2和MG63細(xì)胞系進(jìn)行體外細(xì)胞功能學(xué)實驗。2、構(gòu)建慢病毒過表達(dá)PLA2G16的骨肉瘤穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,使用MTT、細(xì)胞劃痕實驗、Transwell小室等分別檢測細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。3、應(yīng)用過表達(dá)PLA2G16載體、小RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞,改變PLA2G16的表達(dá)后,使用Western blot檢測不同處理條件下p-Erk1/2、Erk1/2、p-m TOR、m TOR、p-Akt和Akt等經(jīng)典下游信號通路表達(dá)情況。4、應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測35例骨肉瘤原發(fā)病灶冰凍組織,其中無轉(zhuǎn)移患者18例,存在肺轉(zhuǎn)移者17例。5、根據(jù)以上實驗結(jié)果,應(yīng)用IHC方法檢測骨肉瘤組織芯片中88例患者PLA2G16和p-ERK1/2表達(dá)水平,評價PLA2G16和p-ERK1/2基因表達(dá)情況與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。研究結(jié)果1、實時熒光定量PCR和Western blot結(jié)果示,HOS細(xì)胞系中PLA2G16表達(dá)量明顯高于Saos2和MG63細(xì)胞系。與空白載體對比,應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)使Saos2和MG63過表達(dá)PLA2G16,可以增強骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力。2、Saos2和MG63細(xì)胞系過表達(dá)PLA2G16,在常規(guī)培養(yǎng)及胎牛血清隔夜饑餓刺激條件下均能明增加ERK1/2磷酸化水平。HOS細(xì)胞系中敲除PLA2G16表達(dá),相應(yīng)地顯著降低p-Erk1/2表達(dá)水平,提示MAPK的激活是PLA2G16的一個下游信號通路。3、實時熒光定量PCR結(jié)果分析示:轉(zhuǎn)移性骨肉瘤患者原發(fā)病灶中PLA2G16mRNA相對表達(dá)量(均值+標(biāo)準(zhǔn)誤:3.65±0.60)明顯高于無轉(zhuǎn)移組織樣本(均值+標(biāo)準(zhǔn)誤:2.49±0.69),其均值是非轉(zhuǎn)移組的1.47倍。IHC結(jié)果分析:PLA2G16+與p-ERK1/2+表達(dá)存在相關(guān)性(P=0.002)。PLA2G16和p-ERK1/2表達(dá)與骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移均存在相關(guān)性(P0.05),但與患者年齡、性別、腫瘤位置及組織分型無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移患者PLA2G16和p-ERK1/2陽性率(75.8%vs 41.8%,P=0.002;81.8%vs 54.5%,P=0.010)均高于無轉(zhuǎn)移者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。PLA2G16和p-ERK1/2 ROC曲線下面積分別為0.670、0.636,當(dāng)兩基因結(jié)合分析時ROC曲線下面積為0.706。5、PLA2G16和p-ERK1/2都是骨肉瘤患者OS及MFS預(yù)后因素。當(dāng)二者表達(dá)綜合分析時,PLA2G16+p-ERK1/2+組的5年生存率OS(51.1%)和MFS(44.7%)最差,PLA2G16-、p-ERK1/2-(85.4%和85.7%,P=0.020,P=0.016)組生存率預(yù)后最好,PLA2G16-、p-ERK1/2+;PLA2G16+、p-ERK1/2-組5年OS(61.5%)和MFS(54.1%)預(yù)后適中(P0.05)。研究結(jié)論PLA2G16通過激活MAPK信號通路增強骨肉瘤細(xì)胞系增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力,PLA2G16可能成為骨肉瘤患者判斷預(yù)后及治療的一個潛在靶點。PLA2G16和p-ERK1/2兩者都是預(yù)測骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的潛在生物標(biāo)記物,當(dāng)兩個基因綜合分析時,具有預(yù)測價值的累加效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1

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本文編號：1202243