本文關(guān)鍵詞：誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞腦移植后的區(qū)域特異性存活和分化及其誘發(fā)的局部免疫排斥反應(yīng)

  更多相關(guān)文章： iNSCs 存活 遷移 分化 免疫排斥反應(yīng) 區(qū)域特異性

【摘要】：目的:誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞(induced neural stem cells,iNSCs)可通過在成體細胞內(nèi)轉(zhuǎn)入特定外源因子而獲得,其在顱內(nèi)干細胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面具有潛在的臨床應(yīng)用價值。有研究證實,iNSCs能夠在體外條件下分化為成熟神經(jīng)元等細胞,本文旨在探討iNSCs在成體腦內(nèi)不同區(qū)域的存活、遷移和分化等潛能,并對其顱內(nèi)移植是否誘發(fā)局部免疫排斥反應(yīng)做初步研究。方法:無血清培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)iNSCs,體外觀察細胞增殖狀況,并進行巢蛋白(Nestin)熒光鑒定實驗;制備iNSCs細胞懸液;36只成年健康C57雄性小鼠按移植時間、移植腦區(qū)不同隨機分組,每組4只,具體如下:2周移植組(海馬區(qū)、皮層運動區(qū)、皮層感覺區(qū)、紋狀體區(qū)),6周移植組(海馬區(qū)、皮層運動區(qū)、皮層感覺區(qū)、紋狀體區(qū)和空白對照組);依照分組,借助鼠腦立體定位儀,將iNSCs細胞懸液通過微量進樣器移植到C57小鼠相應(yīng)腦區(qū);小鼠存活一定時間后,經(jīng)灌注固定取材腦組織,移植位點連續(xù)切片;熒光顯微鏡下借綠色熒光標記蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)觀察各腦區(qū)iNSCs存活及遷移狀況;借助細胞特異性抗體Nestin、Tuj1、MAP2、GFAP等對移植位點腦組織切片進行免疫熒光鑒定,探究移植iNSCs分化狀況;借助免疫細胞特異抗體CD8、CD3、CD45等探究移植位點局部免疫淋巴細胞的浸潤。結(jié)果:iNSCs體外傳代培養(yǎng)條件下能夠穩(wěn)定地克隆增殖,傳代細胞熒光鑒定呈Nestin陽性;兩時間節(jié)點,不同腦區(qū)均發(fā)現(xiàn)有移植iNSCs的存活,且2周時比較不同腦區(qū)iNSCs存活百分比發(fā)現(xiàn)存在顯著差異(P0.05),紋狀體區(qū)、海馬區(qū)細胞存活比例相對較高;移植6周與2周對比,發(fā)現(xiàn)iNSCs可向周圍腦實質(zhì)內(nèi)遷移,且遷移呈現(xiàn)一定區(qū)域特異性,GFP陽性細胞可沿顆粒下層形成明顯遷移條帶;iNSCs移植2周和6周組,各腦區(qū)存活細胞經(jīng)熒光鑒定均顯示Tuj1陰性;6周組部分存活細胞呈Nestin陽性,計算不同腦區(qū)Nestin陽性細胞比率,結(jié)果顯示存在差異(P0.05),海馬區(qū)較高;6周組,紋狀體和腦皮層區(qū)的存活細胞,部分可呈GFAP陽性,海馬區(qū)臨近側(cè)腦室區(qū)域,有細胞可呈MAP2陽性;6周時,各腦區(qū)移植位點存活細胞周圍均發(fā)現(xiàn)有CD8陽性、CD3陽性、CD45陽性免疫淋巴細胞浸潤,以海馬區(qū)為例,移植組與對照組相比,免疫細胞數(shù)目存在顯著差異(P0.05).結(jié)論:iNSCs體外培養(yǎng)條件下能夠穩(wěn)定地克隆增殖,并保持其神經(jīng)干細胞特質(zhì);iNSCs能夠存活并逐步整合于局部腦組織,但其在成體腦內(nèi)的存活具有區(qū)域特異性;iNSCs在成體腦內(nèi)具有遷移的能力,在海馬齒狀回可沿神經(jīng)干細胞固有路徑遷移;iNSCs腦移植后短期內(nèi)分化效率較低,但其分化趨勢呈現(xiàn)區(qū)域特異性;iNSCs具有一定免疫原性,其在成體腦內(nèi)的移植可誘發(fā)局部免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.1

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