本文關(guān)鍵詞：京尼平交聯(lián)兔脫細(xì)胞氣管支架原位移植的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 氣管 組織工程 京尼平 移植 骨髓單個(gè)核細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

【摘要】：先天性畸形、創(chuàng)傷、腫瘤、感染、損傷后長(zhǎng)期氣管插管和某些自身免疫性疾病,可以導(dǎo)致氣管狹窄或壞死,需要?dú)夤苤亟ɑ蛞浦�。各種良性或惡性氣管病變患者的主要治療方法為氣管切除術(shù)。然而,當(dāng)病變的氣管長(zhǎng)度達(dá)到兒童的30%或成人的50%時(shí),切除病變氣管直接端端吻合將帶來巨大風(fēng)險(xiǎn)。組織工程是結(jié)合工程技術(shù)和生物學(xué)原理應(yīng)用于功能性組織替代的一個(gè)新興研究,以促進(jìn)受損組織再生,有望成為長(zhǎng)段氣管重建的有效治療手段。本研究以新西蘭兔為對(duì)象,通過脫細(xì)胞及京尼平交聯(lián)方法得到氣管支架,并種植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,運(yùn)用生長(zhǎng)因子,原位移植氣管,綜合評(píng)估原位移植效果,監(jiān)測(cè)其免疫原性和排斥反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上,通過梯度離心法獲取自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞,并使用細(xì)胞示蹤劑綠色熒光蛋白標(biāo)記自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞。含有綠色熒光蛋白標(biāo)記的自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞可以在脫細(xì)胞氣管支架上分化為軟骨細(xì)胞,這一實(shí)驗(yàn)過程避免了干細(xì)胞在體外培養(yǎng),大大縮短了組織工程氣管的制備周期,節(jié)約了時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本,為需要組織工程氣管移植的患者爭(zhēng)取了更多的治療時(shí)間。第一部分 京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架種植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)原位移植研究目的：通過對(duì)由京尼平交聯(lián)的脫細(xì)胞氣管支架進(jìn)行原位移植,并在術(shù)中種植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行研究,觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)分化為軟骨細(xì)胞的情況,并對(duì)上皮細(xì)胞再生情況及移植后炎癥排斥反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：1.脫細(xì)胞氣管支架的制備；2.脫細(xì)胞氣管支架的體外檢測(cè)；3.自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定；4.氣管原位移植；5.氣管原位移植后檢測(cè)。結(jié)果：1.氣管脫細(xì)胞后,上皮細(xì)胞清除完全,軟骨細(xì)胞大部分被清除,Ⅱ型膠原保留完整：2.通過全骨髓培養(yǎng)貼壁篩選法獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)至第3代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,具有多項(xiàng)分化潛能；3.脫細(xì)胞后京尼平交聯(lián)的氣管支架加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原位移植后,炎癥反應(yīng)程度與自體原位移植相似,種植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)可以分化為軟骨細(xì)胞。結(jié)論：1.通過去污劑-聯(lián)合酶法獲取了脫細(xì)胞氣管支架,運(yùn)用天然交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)得到了京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架；2.采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離純化了自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特征及多向分化潛能鑒定了自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；3.種植有自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的脫細(xì)胞氣管支架在原位移植實(shí)驗(yàn)中取得成功,自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)分化為軟骨細(xì)胞,未發(fā)生明顯的排斥反應(yīng)。第二部分 京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架種植自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞的體內(nèi)原位移植研究目的：通過對(duì)含有綠色熒光蛋白示蹤劑的骨髓單個(gè)核細(xì)胞在京尼平交聯(lián)的脫細(xì)胞氣管支架原位移植中的研究,觀察骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白含量,評(píng)估種植的自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞的情況,并對(duì)使用生長(zhǎng)因子后外周血中單個(gè)核細(xì)胞含量進(jìn)行評(píng)價(jià),探討自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞在組織工程氣管移植中的作用。方法：1.脫細(xì)胞氣管支架的制備；2.293T細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)；3.轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的獲��；4.293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；5.自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞的獲��；6.慢病毒的獲取及細(xì)胞的感染；7.氣管原位移植；8.氣管移植后單個(gè)核細(xì)胞含量檢測(cè)及單個(gè)核細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞情況的檢測(cè)。結(jié)果：1.293T轉(zhuǎn)染含有綠色熒光蛋白質(zhì)粒后細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白,并能合成含有綠色熒光蛋白可以感染其他細(xì)胞的慢病毒；2.含有綠色熒光蛋白的慢病毒可以感染骨髓單個(gè)核細(xì)胞,在熒光顯微鏡下可以看到細(xì)胞內(nèi)有綠色熒光出現(xiàn)；4.種植有含綠色熒光蛋白的自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞的京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架原位移植后,種植的骨髓單個(gè)核在體內(nèi)可以分化為軟骨細(xì)胞,在分化成的軟骨細(xì)胞中含有綠色熒光蛋白。結(jié)論：1.綠色熒光蛋白可以在293T細(xì)胞內(nèi)被包裝在慢病毒內(nèi),在不影響其他細(xì)胞活性的情況下將綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)入其他細(xì)胞中；2.通過梯度離心得到的自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞可以被含有綠色熒光蛋白的慢病毒感染,綠色熒光蛋白在不影響骨髓單個(gè)核細(xì)胞的情況下對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記；3.通過慢病毒感染的方法對(duì)自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行示蹤,鑒定氣管移植后再生的軟骨細(xì)胞由種植的自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞分化而來；4.自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞在原位移植的京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架上可以分化為軟骨細(xì)胞,這一過程避免了干細(xì)胞體外培養(yǎng)過程,節(jié)省了時(shí)間成本和經(jīng)濟(jì)成本。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,骨髓單個(gè)核細(xì)胞是更為理想的一種干細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：氣管 組織工程 京尼平 移植 骨髓單個(gè)核細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R653
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-13
• 符號(hào)說明13-14
• 第一部分 京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架種植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)原位移植研究14-30
• 前言14
• 1 材料和試劑配制14-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備14-15
• 1.1.2 試劑耗材15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)用試劑配制16-17
• 2 方法17-22
• 2.1 脫細(xì)胞氣管支架的制備17-18
• 2.2 脫細(xì)胞支架的體外檢測(cè)18-20
• 2.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定20-21
• 2.4 氣管原位移植實(shí)驗(yàn)21
• 2.5 氣管移植后的檢測(cè)21-22
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22
• 3 結(jié)果22-24
• 3.1 氣管支架的細(xì)胞含量22
• 3.2 氣管支架的組織學(xué)結(jié)構(gòu)22-23
• 3.3 氣管支架的Ⅱ型膠原含量23
• 3.4 氣管支架上皮細(xì)胞含量23
• 3.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定結(jié)果23
• 3.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 3.7 氣管移植后外周血成分的變化24
• 3.8 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后氣管軟骨細(xì)胞及上皮細(xì)胞再生情況24
• 4 討論24-28
• 5 參考文獻(xiàn)28-30
• 第二部分 京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管支架種植自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞的體內(nèi)原位移植研究30-40
• 前言30-31
• 1 材料和試劑配制31-33
• 1.1 材料31-33
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備31
• 1.1.3 試劑耗材31-33
• 1.2 實(shí)驗(yàn)用試劑配制33
• 2 方法33-36
• 2.1 脫細(xì)胞氣管支架的獲取33
• 2.2 293T細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)33-34
• 2.3 含有轉(zhuǎn)染所需質(zhì)粒的大腸桿菌的培養(yǎng)34
• 2.4 質(zhì)粒的提取34
• 2.5 293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染34
• 2.6 單個(gè)核細(xì)胞獲取34-35
• 2.7 慢病毒的獲取及細(xì)胞的感染35
• 2.8 氣管原位移植實(shí)驗(yàn)35-36
• 2.9 氣管移植后的檢測(cè)36
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36
• 3 結(jié)果36-37
• 3.1 293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染的結(jié)果36
• 3.2 慢病毒感染細(xì)胞的結(jié)果36-37
• 3.3 外周血中單個(gè)核細(xì)胞含量變化37
• 3.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后CK-18免疫熒光結(jié)果37
• 3.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后Ⅱ型膠原免疫熒光結(jié)果37
• 3.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后單個(gè)核細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的結(jié)果37
• 4 討論37-39
• 5 參考文獻(xiàn)39-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論40-41
• 附錄41-51
• 文獻(xiàn)綜述51-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 舒朝鋒,崔磊,劉偉,曹誼林;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2004年02期

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本文編號(hào)：1125887