發(fā)布時(shí)間：2017-10-28 19:00

  本文關(guān)鍵詞：大鼠離斷肢體灌注保存及回植的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：減輕離斷肢體的因缺血缺氧造成的損害,保護(hù)組織活性,延長(zhǎng)回植手術(shù)時(shí)限,增加回植術(shù)后肢體的成活率和功能恢復(fù)。方法：選取健康成年Wistar大鼠(雌性)90只(體重250-300g)。實(shí)驗(yàn)一大鼠離斷肢體不同灌注液一次性灌注保存效果的比較研究：選出40只大鼠隨機(jī)分為4組,每組10只,即形成80只離斷肢體模型,第一組為UW液灌注組；第二組為HTK液灌注組；第三組為生理鹽水灌注組；第四組為不灌注組,作為對(duì)照。前三組離斷后肢后以12m1/h速度灌注對(duì)應(yīng)灌注液1h。自離斷后將肢體放置在4℃的冰箱內(nèi)保存24h。收集不同時(shí)間點(diǎn)的肌肉組織進(jìn)行勻漿,勻漿液行ALP、ALT、AST、 CK、LDH、GLU、LAC、SOD生化檢測(cè)；同時(shí)在離斷6h、12h、18h、24h取肌肉組織行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫組化染色。于離斷12h、24h取肌肉組織標(biāo)本,透射電鏡檢查觀察其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)二大鼠離斷肢體不同灌注液每隔12小時(shí)間斷灌注后低溫保存效果的比較研究：選出30只大鼠隨機(jī)分為3組,每組10只,即形成60支離斷肢體模型,第一組為UW液灌注組；第二組為HTK液灌注組；第三組生理鹽水灌注組。各組于離斷后0h、12h以12m1/h速度分別灌注對(duì)應(yīng)灌注液1h。自離斷后將肢體放置在在4℃冰箱內(nèi)保存24h。收集不同時(shí)間點(diǎn)的肌肉組織進(jìn)行勻漿,勻漿液行ALP、ALT、AST、CK、LDH、 GLU、LAC、SOD生化檢測(cè)；同時(shí)在離斷6h、2h、8h、24h取肌肉組織行HE染色、PTAH染色和Bax蛋白免疫組化染色,并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞面積比例及免疫組化IOD值；于離斷12h、24h取肌肉組織標(biāo)本,透射電鏡檢查觀察其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)三大鼠離斷肢體UW液灌注采用不同灌注方法保存效果的對(duì)比研究：統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)一UW液一次性灌注組和實(shí)驗(yàn)二UW液每隔12h間斷灌注組的結(jié)果.實(shí)驗(yàn)四大鼠離斷肢體UW灌注低溫保存后回植的比較研究：選出20只大鼠隨機(jī)分為2組-實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組10只,各組均行右后肢離斷手術(shù),對(duì)照組正常結(jié)扎腹壁淺動(dòng)靜脈兩端并剪斷,實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎腹壁淺動(dòng)靜脈遠(yuǎn)端,并穿刺腹壁淺動(dòng)脈,從中緩慢灌注UW液至股靜脈、創(chuàng)面滲出清亮后,結(jié)扎腹壁淺近端.4℃冷藏離斷右后肢3h后行回植手術(shù),觀察大鼠及其右后肢成活情況,行HE等檢測(cè)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：隨離斷時(shí)間延長(zhǎng),灌注組的ALP、ALT、AST、CK、LDH、LAC較不灌注組低,灌注組的GLU和SOD較不灌注組高。UW組各生化指標(biāo)與不灌注組各指標(biāo)間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其余組間部分指標(biāo)存在差異。各時(shí)間點(diǎn),三個(gè)灌注組較不灌注組組織HE染色、透射電鏡病理變化輕微,灌注組中UW液組病理變化最輕。細(xì)胞面積比例各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),各時(shí)間點(diǎn)不灌注組的細(xì)胞面積比例最小,12h前生理鹽水組細(xì)胞面積比例最大,12h后UW液組細(xì)胞面積比例最大。免疫組化1OD：各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)二：生化指標(biāo)間部分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,UW液灌注組的ALP、ALT、AST、LDH、SOD較生理鹽水灌注組低。各時(shí)間點(diǎn),UW液灌注組和HTK液灌注組病理變化相似,較生理鹽水灌注組病理變化輕。細(xì)胞面積比例各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),各時(shí)間點(diǎn)生理鹽水組細(xì)胞面積比例最大。免疫組化1OD：各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)三：UW液一次性灌注組和UW液間斷灌注組生化、細(xì)胞面積比例、免疫組化IOD無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,HE、PTAH及透射電鏡示病理變化類似。實(shí)驗(yàn)四：實(shí)驗(yàn)組成活率為60%,對(duì)照組僅為30%,且HE染色提示UW液灌注可以減少肌肉組織中缺血再灌注損傷。結(jié)論：1、對(duì)離斷肢體行灌注4℃保存,可以有效的減輕組織因缺血缺氧造成的損害,效果強(qiáng)于直接保存。2、使用UW液、HTK液、生理鹽水對(duì)大鼠離斷肢體進(jìn)行一次性灌注,UW液的灌注保存效果最好。3、使用不同種灌注液對(duì)大鼠離斷肢體進(jìn)行每隔12h間斷灌注,UW液的灌注保存效果最好。4、使用UW液對(duì)大鼠離斷后肢一次性灌注和每隔12h間斷灌注,兩種灌注方法效果相當(dāng).5.使用UW液對(duì)大鼠離斷后肢一次性灌注后,4℃冷藏保存后回植(缺血時(shí)間在3-5h),較單純冷藏保存后回植肢體成活率高,術(shù)后成活肢體缺血缺氧損傷輕。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 離斷肢體 器官保存液 灌注 回植
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R658
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 大鼠離斷肢體不同灌注液一次性灌注后低溫保存效果的比較研究14-48
• 材料與方法14-19
• 結(jié)果19-25
• 討論25-34
• 附圖34-48
• 第二部分 大鼠離斷肢體不同灌注液每隔12小時(shí)間斷灌注后保存效果的比較研究48-65
• 材料與方法48-49
• 結(jié)果49-54
• 討論54-56
• 附圖56-65
• 第三部分 大鼠離斷肢體UW液灌注不同灌注方法保存效果的比較研究65-70
• 材料與方法65
• 結(jié)果65-68
• 討論68-70
• 第四部分 大鼠離斷肢體UW灌注4℃保存后回植的研究70-82
• 材料與方法70-72
• 結(jié)果72-73
• 討論73-76
• 附圖76-82
• 創(chuàng)新點(diǎn)82
• 不足之處82-83
• 結(jié)論83-84
• 參考文獻(xiàn)84-90
• 綜述 離斷肢體保存的現(xiàn)狀及研究進(jìn)展90-101
• 綜述參考文獻(xiàn)96-101
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章101-102
• 致謝102

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本文編號(hào)：1109495