發(fā)布時(shí)間：2017-09-28 00:32

  本文關(guān)鍵詞：三種溫控脫細(xì)胞載體的制備與性能評(píng)估

  更多相關(guān)文章： 生物材料 三維多孔載體 溫敏性細(xì)胞支架 非酶脫細(xì)胞 生物相容性

【摘要】：背景:生物人工肝的核心組成之一是細(xì)胞支架,支架材料需要有良好的生物相容性、三維多孔結(jié)構(gòu)、適宜的力學(xué)性能、良好的細(xì)胞親和性以及細(xì)胞可無損傷脫附等。設(shè)計(jì)、制備新型溫敏高分子三維細(xì)胞支架是目前高分子科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。目的:制備和構(gòu)建三種不同的溫控脫細(xì)胞載體,模擬細(xì)胞外基質(zhì)的功能,并評(píng)估其性能。方法:分別制備共聚異丙基丙烯酰胺溫控脫細(xì)胞支架(PNA)、大孔共聚異丙基丙烯酰胺溫控脫細(xì)胞支架(PNAK)與大孔共聚異丙基丙烯酰胺交聯(lián)醛基化海藻酸鈉溫控脫細(xì)胞支架(PNAKO),檢測(cè)三種支架的比表面積、溫敏性能、孔隙率、孔徑及細(xì)胞相容性。結(jié)果與結(jié)論:1.利用P(NIPAm-AAm)的溫敏特性,合成PNA三維細(xì)胞支架;采用海藻酸鈉為致孔劑,將溫敏性P(NIPAm-AAm)制成相互連通的多孔三維細(xì)胞支架PNAK;通過Schiff反應(yīng)在P(NIPAm-AAm)上交聯(lián)醛基化海藻酸鈉(OSA),并以海藻酸鈉為致孔劑,制成具有互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的多孔三維細(xì)胞支架PNAKO。2.通過對(duì)三種溫控脫細(xì)胞支架紅外光譜(IR)比較分析,證明P(NIPAm-AAm)與OSA發(fā)生了化學(xué)交聯(lián)反應(yīng),PNIPA-AM上的-NHNH2和OSA上的-CHO反應(yīng)生成C=N鍵。3.三種溫控脫細(xì)胞支架比表面積(S)測(cè)定結(jié)果表明,PNA細(xì)胞支架由于沒有加入任何致孔劑,其比表面積只有135 m2/g;PNAK細(xì)胞支架由于內(nèi)部以海藻酸鈉為致孔劑形成多孔結(jié)構(gòu),使其比表面積大大增加,達(dá)到386m2/g;PNAKO細(xì)胞支架由于內(nèi)部不但以海藻酸鈉為致孔劑,而且交聯(lián)醛基化海藻酸鈉(OSA)形成互穿式網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),使其比表面積達(dá)到421m2/g,可以印證PNAK和PNAKO比PNA具有更加明顯的孔洞結(jié)構(gòu)。4.三種溫控脫細(xì)胞支架掃描電鏡(SEM)檢測(cè)結(jié)果顯示,PNA溫控脫細(xì)胞支架具有不規(guī)則的孔結(jié)構(gòu),PNAK溫控脫細(xì)胞支架具有規(guī)則相連貫穿的多孔和密集均勻的分布,這是由于加入致孔劑海藻酸鈉導(dǎo)致溫敏凝膠產(chǎn)生多孔結(jié)構(gòu)。PNAKO溫控脫細(xì)胞支架具有互穿網(wǎng)狀的多孔結(jié)構(gòu),孔洞密集且分布均勻,相互貫穿相連,說明將溫敏凝膠交聯(lián)醛基化海藻酸鈉,加入致孔劑海藻酸鈉導(dǎo)致溫敏凝膠產(chǎn)生互穿網(wǎng)狀多孔結(jié)構(gòu)。5.三種溫控脫細(xì)胞支架溫敏性能檢測(cè)表明,三種溫控脫細(xì)胞支架均具備溫度敏感特性,而且最低臨界溶解溫度LCST溫度相近。PNA的LCST約為30℃,PNAK的LCST約為28.5℃,PNAKO的LCST約為29.5℃。6.三種溫控脫細(xì)胞支架溶脹率(SR)測(cè)定結(jié)果提示,三種溫控脫細(xì)胞支架溶脹度能夠讓支架基本保持形狀,同時(shí)滿足細(xì)胞營養(yǎng)的獲得和代謝物質(zhì)傳輸。7.三種溫控脫細(xì)胞支架孔隙率和孔徑測(cè)定結(jié)果顯示,PNAK、PNAKO的孔隙率和孔徑明顯大于PNA,由于PNA孔結(jié)構(gòu)不規(guī)則,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示出平均值,因此作為細(xì)胞支架PNAK和PNAKO比PNA更具優(yōu)越性。8.三種溫控脫細(xì)胞支架的生物相容性評(píng)價(jià)結(jié)果證實(shí),PNAKO支架由于交聯(lián)了醛基化海藻酸鈉降低了細(xì)胞毒性,生物相容性明顯優(yōu)于PNA和PNAK溫控脫細(xì)胞支架,PNAK相比PNA細(xì)胞毒性沒有明顯變化。通過實(shí)驗(yàn)篩選出最佳三維細(xì)胞支架PNAKO,進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究是以PNAKO為細(xì)胞培養(yǎng)支架。9.誘導(dǎo)后的肝樣細(xì)胞在三維溫控脫細(xì)胞支架PNAKO中培養(yǎng)28天,經(jīng)組織學(xué)切片顯示,細(xì)胞形態(tài)良好,生長(zhǎng)緊密,呈片狀分布在載體表面及孔隙中,說明支架和細(xì)胞的相容性很好。10.利用PNAKO支架溫度響應(yīng)性,對(duì)6批次誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后的D組細(xì)胞溫度誘導(dǎo)脫附行為測(cè)定結(jié)果顯示,當(dāng)環(huán)境溫度降低時(shí),PNAKO支架收縮,細(xì)胞發(fā)生了自動(dòng)脫附。這種溫度誘導(dǎo)脫附方法可以避免酶解法對(duì)細(xì)胞造成的損傷,能保持細(xì)胞原有的功能。PNAKO支架溫控細(xì)胞脫附率平均可達(dá)到41.09%[27]。
【關(guān)鍵詞】：生物材料 三維多孔載體 溫敏性細(xì)胞支架 非酶脫細(xì)胞 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、三種溫控脫細(xì)胞載體的制備與性能評(píng)估15-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備15-16
• 1.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑15
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.2 三種溫控托細(xì)胞支架制備16-20
• 1.2.1 PNA溫控脫細(xì)胞支架制備16-17
• 1.2.2 PNAK溫控脫細(xì)胞支架制備17
• 1.2.3 PNAKO三種溫控脫細(xì)胞支架制備17-20
• 1.3 三種溫控脫細(xì)胞支架表征與測(cè)試20-23
• 1.3.1 三種溫控脫細(xì)胞支架紅外光譜（IR）20
• 1.3.2 三種溫控脫細(xì)胞支架比表面積（S）20
• 1.3.3 三種溫控脫細(xì)胞支架掃描電鏡（SEM）20-21
• 1.3.4 三種溫控脫細(xì)胞支架溫敏性能檢測(cè)21
• 1.3.5 三種溫控脫細(xì)胞支架容脹率（SR）測(cè)定21
• 1.3.6 三種溫控脫細(xì)胞支架孔隙率和孔徑測(cè)定21-22
• 1.3.7 三種溫控脫細(xì)胞支架生物相容性評(píng)價(jià)22-23
• 1.4 結(jié)果23-35
• 1.4.1 海藻酸鈉氧化度標(biāo)準(zhǔn)曲線23-24
• 1.4.2 海藻酸鈉24小時(shí)氧化度測(cè)定結(jié)果24
• 1.4.3 醛基化海藻酸鈉相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定結(jié)果24-26
• 1.4.4 醛基化海藻酸鈉紅外光譜（FT-IR）測(cè)定結(jié)果26-27
• 1.4.5 三種溫控脫細(xì)胞支架紅外光譜（IR）比較27-28
• 1.4.6 三種溫控脫細(xì)胞支架比表面積（S）分析28-29
• 1.4.7 三種溫控脫細(xì)胞支架掃描電鏡（SEM）分析29
• 1.4.8 三種溫控脫細(xì)胞支架文敏性能檢測(cè)29-31
• 1.4.9 三種溫控脫細(xì)胞支架溶脹率（SR）測(cè)定結(jié)果31-32
• 1.4.10 三種溫控脫細(xì)胞支架孔隙率和孔徑測(cè)定結(jié)果32-34
• 1.4.11 三種溫控脫細(xì)胞支架的生物相容性評(píng)價(jià)結(jié)果34-35
• 1.5 本章小結(jié)35-37
• 二、三維溫控脫細(xì)胞支架PNAKO的性能驗(yàn)證37-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備37-38
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑37
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑的配制37
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 2.2 肝細(xì)胞在PNAKO的培養(yǎng)及性能研究38-39
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法38
• 2.2.2 PNAKO支架培養(yǎng)的肝細(xì)胞溫敏脫細(xì)胞性能研究38
• 2.2.3 PNAKO支架材料不同脫細(xì)胞方法對(duì)細(xì)胞數(shù)量和活性程度的影響38-39
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-42
• 2.3.1 光鏡下觀察結(jié)果39-41
• 2.3.2 組織學(xué)切片光鏡下觀察41
• 2.3.3 PNAKO支架培養(yǎng)的肝細(xì)胞溫敏脫細(xì)胞性能結(jié)果41
• 2.3.4 PNAKO支架材料不同脫細(xì)胞方法對(duì)細(xì)胞數(shù)量和活性程度的影響41-42
• 2.4 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明49-50
• 綜述 溫敏性支架在細(xì)胞培養(yǎng)中的研究進(jìn)展50-56
• 綜述參考文獻(xiàn)55-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王偉;馬利林;陸麗萍;陳瑞新;于秀;;未經(jīng)預(yù)處理同種活性生物脫細(xì)胞支架的免疫原性及支架張力(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年41期

2 王輝;陳雄生;周盛源;黃俊俊;蔡_"藝;;凍干韌帶脫細(xì)胞支架材料的生物相容性及優(yōu)勢(shì)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年29期

3 周敏;劉長(zhǎng)建;衛(wèi)志慶;劉昭;蔣雪峰;喬彤;冉峰;;bFGF預(yù)載脫細(xì)胞支架構(gòu)建小口徑人工血管的研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2008年03期

4 周敏;劉長(zhǎng)建;衛(wèi)志慶;喬威;喬彤;冉峰;張明;;以肝素固化脫細(xì)胞支架構(gòu)建的小口徑抗凝人工血管[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年36期

5 張炎,劉太華,姜宗來,張秀花,劉波,李玉泉;全生物化組織工程血管構(gòu)建的初步研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年03期

6 冉峰;劉長(zhǎng)建;周敏;衛(wèi)志慶;喬威;劉昭;喬彤;;脫細(xì)胞支架復(fù)合犬骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞構(gòu)建組織工程血管[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年32期

7 武欣;谷涌泉;段紅永;陳兵;李建新;吳英鋒;張淑文;汪忠鎬;張建;;改良酶學(xué)方法獲得異種血管脫細(xì)胞支架[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年47期

8 鹿亮;郭全義;楊啟友;袁玫;張莉;黃靖香;趙斌;彭江;許文靜;盧世璧;;豬來源關(guān)節(jié)軟骨脫細(xì)胞支架的生物安全性研究[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2010年01期

9 龐超見;佟曉杰;劉貴波;李奇;賈樺;王瑩;高海;;VEGF在小劑量超短波促進(jìn)種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞脫細(xì)胞支架修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷中的表達(dá)[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

10 ;[J];;年期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張永珍;王棟;熊紹虎;黨瑞山;張傳森;;促進(jìn)靜脈脫細(xì)胞支架材料內(nèi)皮化的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

2 任昊楨;施曉雷;陶亮;肖江強(qiáng);肖江強(qiáng);馬虎成;丁義濤;;兩種不同脫細(xì)胞技術(shù)構(gòu)建大鼠肝臟脫細(xì)胞支架的比較研究[A];2013中國器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

3 陳華勇;柏樹令;樸成哲;;組織工程小血管脫細(xì)胞支架的結(jié)構(gòu)研究[A];中國解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉雙德;利用豬腎臟脫細(xì)胞支架進(jìn)行腎臟再生的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 管勇;利用胚胎干細(xì)胞及腎臟脫細(xì)胞支架進(jìn)行腎臟再生的研究[D];山東大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 田媛嬡;丙酸睪酮對(duì)BMSCs復(fù)合神經(jīng)脫細(xì)胞支架修復(fù)犬坐骨神經(jīng)缺損的作用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 安帥星;三種溫控脫細(xì)胞載體的制備與性能評(píng)估[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

3 周盛源;韌帶脫細(xì)胞支架構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 姜楠;不同方法制備大鼠肝臟脫細(xì)胞支架及其免疫原性和細(xì)胞相容性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：932836