本文關鍵詞：食道平滑肌的體外構建及其體內(nèi)生物相容性研究

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【摘要】：平滑肌，一種具有自律性的無橫紋肌肉組織，在人和動物體內(nèi)分布廣泛，普遍存在于消化道、呼吸道、血管、泌尿、生殖等諸多內(nèi)臟器官中，它通過收縮蠕動來協(xié)助器官的功能發(fā)揮，是重要的功能組織。食道平滑肌具有內(nèi)環(huán)外縱的結(jié)構，是食道中重要的功能部分。食道平滑肌的構建和工程化再生對于食道組織工程的研究具有重要的科學意義和應用價值。同時，也為其它器官中的平滑肌組織的重構和再生提供技術參考和實驗依據(jù)。 本研究旨在制備良好生物相容性和生物降解性的支架，以引導內(nèi)環(huán)外縱結(jié)構的食道肌層組織的再生。首先驗證了帶有微槽圖案的支架具有體外誘導細胞趨向生長的作用。利用自制的硅片模具和醫(yī)用聚氨酯材料制備了模擬平滑肌紋路的支架P1和P2，該結(jié)構經(jīng)掃描電鏡（SEM）檢測得到證實。從健康成年兔子的食道中提取原代的食道平滑肌細胞，體外擴增后，種植在以絲素蛋白接枝改性后的支架上，采用HE染色、免疫組化分析和免疫熒光染色的方法證實了原代平滑肌細胞，同時也證實了兩種支架對細胞生長的引導作用。通過細胞活力測試，確立了最佳的支架改性方法（即最佳的接枝反應條件），且發(fā)現(xiàn)連續(xù)微槽的P1較間斷微槽的P2更能滿足細胞的生長空間，更易促進細胞的方向性生長 據(jù)文獻報道，凹槽支架相對于凸槽支架在誘導細胞組織方向性生長上更為顯著。因此，我們在實驗中也設計了凹型微槽結(jié)構的支架。我們用道康寧硅橡膠刻印出與之前模具紋路吻合的聚二甲基硅氧烷（PDMS,Polydimethylsiloxane）模具，從而制備了帶有凹槽的支架P3，通過光鏡圖可以看出這種凹槽支架也具有對細胞生長的趨向誘導作用，進一步免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)這種支架對細胞類型的轉(zhuǎn)換也起到了引導作用。并進行了動物體內(nèi)實驗。將絲素蛋白接枝后的凹槽支架，植入成年健康兔的皮下，并與不同表面改性或未改性的支架周圍組織再生情況進行比較，通過冷凍切片以及HE染色等方法，確定了凹槽支架的體內(nèi)生物相容性及其引導食道原位平滑肌組織再生的作用更為顯著。在這基礎上，對這些圖案化的、經(jīng)表面改性的支架進行了食道平滑肌原位修復和再生實驗。術后試驗兔能夠存活和進食。冷凍切片后HE染色、免疫熒光觀察，，明確了這種支架結(jié)構對內(nèi)環(huán)外縱結(jié)構的食道肌層組織再生的引導作用。
【關鍵詞】：平滑肌細胞 支架構建 生物相容性 原位修復 食道組織工程
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-17
• 1 材料與儀器設備17-19
• 1.1 實驗材料17-18
• 1.2 實驗儀器18-19
• 2 實驗方法19-26
• 2.1 支架的制備19-21
• 2.1.1 絲素蛋白的提取和純化19
• 2.1.2 支架的制備19-20
• 2.1.3 支架的改性20-21
• 2.2 原代細胞的提取和培養(yǎng)21-23
• 2.2.1 食道平滑肌細胞提取及其在支架上的培養(yǎng)21
• 2.2.2 檢測和表征21-23
• 2.3 動物體內(nèi)實驗23-26
• 2.3.1 支架的兔皮下試驗探究23-24
• 2.3.2 平滑肌原位修復24-26
• 3 結(jié)果26-44
• 3.1 支架的構建及其細胞相容性26-34
• 3.1.1 支架的結(jié)構26-29
• 3.1.2 SMC 在支架上的生長29-34
• 3.2 支架的細胞和組織相容性34-37
• 3.3 原位修復37-44
• 3.3.1 肌層的片狀支架替代37-41
• 3.3.2 肌層的環(huán)形支架替代41-44
• 4 討論44-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-53
• 附錄A 主要試劑配制53-54
• 附錄B 中英文詞對照54-55
• 在學研究成果55-56
• 致謝56-57
• 綜述57-73
• 參考文獻69-73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：932738