本文關(guān)鍵詞：納米羥基磷灰石復(fù)合DCSI對大鼠骨缺損的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 納米羥基磷灰石 小牛血清去蛋白液 血管內(nèi)皮生長因子 骨缺損

【摘要】：目的： 觀察納米羥基磷灰石復(fù)合小牛血清去蛋白液(nano-hydroxyapatite/deproteinised calf blood serum injection, NHA/DCSI)治療骨缺損與空白對照組的療效比較,初步探討不同劑量小牛血清去蛋白量用于骨缺損的修復(fù)效果以及新生血管數(shù)量和新骨形成量是否與局部小牛血清去蛋白量劑量存在相關(guān)性,為骨組織工程材料的進一步研究及臨床應(yīng)用提供試驗依據(jù)和理論基礎(chǔ),為骨缺損的治療提供新的思路。 方法： 將納米羥基磷灰石(nano-hydroxyapatite, NHA)粉末分別與含有10mg,20mg的小牛血清去蛋白液體(deproteinised calf blood serum injection, DCSI)調(diào)和制備成復(fù)合人工骨,利用隨機數(shù)字表法將Wistar大鼠隨機分在3個鼠籠中飼養(yǎng),每籠15只,鼠籠分別標記1、2、3,1號為空白對照組,2,3號為實驗組。將1號鼠籠的小鼠單純植入納米羥基磷灰石材料,2號鼠籠植入NHA/10mgDCSI,3號鼠籠植入NHA/20mgDCSI。術(shù)后4、8、12周每組隨機選取5只大鼠處死,截取股骨骨缺損區(qū)的骨端,去除肌肉,肌腱等軟組織,保留骨痂,作為檢驗標本,所有標本標記好時間、名稱后立即置于液氮中保存?zhèn)溆�。選取每組動物的標本,行蘇木精-伊紅染色,顯微鏡下觀察骨缺損區(qū)域的組織修復(fù)情況及之間的差異。利用免疫組織化學(xué)行血管染色,檢查組織中的血管數(shù)量,判斷該組織的成骨活性及強度,視野中的陽性染色表現(xiàn)為棕黃色或棕褐色顆粒著色于血管內(nèi)皮細胞漿中,每張切片隨機選取2個100倍的視野計數(shù),取平均值,觀察各組之間的血管數(shù)量有無統(tǒng)計學(xué)差異。用RT-PCR技術(shù)檢測骨缺損區(qū)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因在各組別之間的表達。所得實驗數(shù)據(jù)為計量資料,用均數(shù)±標準差(x±S)表示,三樣本之間比較采用單因素的方差分析,兩兩之間比較采用兩樣本獨立SNK-q檢驗,如果P0.05則表示有顯著性差異。 結(jié)果： 骨密度測定：術(shù)后4周、8周、12周用雙能X線骨密度儀測定各實驗組的骨密度,術(shù)后4周,方差分析F=5.46,術(shù)后12周,F=41.74,表明時間越長,差異性越明顯,SNK-q檢驗示：術(shù)后8周、12周各組之間比較P0.05,有統(tǒng)計學(xué)差異。 組織學(xué)檢查：通過Lane-Sandhu組織學(xué)評分,實驗組、對照組隨著時間的推移,評分分值越高,對于每一個時間點,對照組的評分最低,術(shù)后4周,方差分析F=10.706,術(shù)后12周,F=13.000,表明時間越長,差異性越明顯,SNK-q檢驗示：術(shù)后4周、8周對照組與實驗組之間比較P0.05,術(shù)后12周各組之間比較P0.05。 免疫血管計數(shù)：復(fù)合人工骨材料在4周有血管生成,明顯高于對照組,隨著時間的延長,新生血管增多,在所有的實驗動物中,復(fù)合20mg人工骨材料動物的血管數(shù)最多。術(shù)后4周方差分析F=8.486,術(shù)后8周F=30.636,術(shù)后12周F=34.667,SNK-q檢驗示：術(shù)后4周對照組與實驗組之間比較P0.05,術(shù)后8周、12周各組之間比較P0.05。 血管內(nèi)皮生長因子基因表達：血管內(nèi)皮生長因子基因的表達在4周時不明顯,8周時表達明顯,12周時達到高峰。術(shù)后4周方差分析F=4.192,術(shù)后8周F=36.400,術(shù)后12周F=30.682,SNK-q檢驗示：術(shù)后4周對照組與10mg實驗組之間比較P0.05,20mg復(fù)合組與其它組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異,術(shù)后8周、12周各組之間比較P0.05。 結(jié)論： NHA/DCSI人工骨比單純應(yīng)用NHA能更好的修復(fù)骨缺損,有利于骨缺損區(qū)域早期的血管及新骨的形成,隨著復(fù)合劑量的增加,骨密度測量值、新骨形成量、新生血管數(shù)量、血管內(nèi)皮生長因子基因的表達均相應(yīng)增加。由于血管的大量長入,使人工骨血管化,為骨修復(fù)提供所需的間充質(zhì)細胞及成骨細胞,從而促進新生骨組織的形成。本研究只進行了兩個劑量的實驗,僅為動物實驗結(jié)果,雖然實驗結(jié)果表明隨著劑量的增加,血管生成數(shù)量和新骨形成量增加,但是劑量不能無限制增加,過大劑量可能會使局部形成血管瘤,全身毒性反應(yīng)等并發(fā)癥,局部藥物安全有效的劑量及人體的適宜劑量仍需要進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：納米羥基磷灰石 小牛血清去蛋白液 血管內(nèi)皮生長因子 骨缺損
【學(xué)位授予單位】：長江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 一、前言11-13
• 二、材料與方法13-20
• 1、材料13-14
• 2、方法14-20
• 2.1 、動物模型的建立14-15
• 2.2 、一般情況觀察15
• 2.3 、骨密度測定15
• 2.4 、實驗材料15
• 2.5 、組織學(xué)檢查15-17
• 2.6 、免疫組織學(xué)檢查17-18
• 2.7 、RT-PCR檢查18-20
• 2.8 、統(tǒng)計學(xué)分析20
• 三、結(jié)果20-39
• 1、術(shù)后大鼠一般情況20
• 2、骨缺損模型的建造20-21
• 3、骨密度的測定21-25
• 4、組織學(xué)觀察25-35
• 5、PCR擴增結(jié)果35-39
• 四、討論39-42
• 五、結(jié)論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-48
• 個人簡歷48-49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 韓旭彤,安樹林,潘淑萍;骨組織工程用支架材料研究進展[J];化工新型材料;2005年01期

2 吳慧平;范媛;丁興;許冬青;詹tg;;實時熒光定量PCR檢測不同舌苔黏膜組織中PLOD1基因表達水平[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2007年04期

3 劉正霞;徐陽;徐進梅;楊明夏;馬磊;朱昌亮;;不同引物及數(shù)據(jù)分析方法對定量PCR結(jié)果的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年08期

4 黃沙,金巖,吳紅,劉勇剛;復(fù)合bFGF緩釋微球的制備及其對成纖維細胞增殖作用的實驗研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程研究;2004年02期

5 裴國獻,金丹;骨組織工程學(xué)種子細胞研究進展[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2003年01期

，

本文編號：874886