發(fā)布時間：2017-09-17 14:30

  本文關鍵詞：殼聚糖水凝膠復合脂肪間充質干細胞修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究

  更多相關文章： 殼聚糖水凝膠 脂肪間充質干細胞 關節(jié)軟骨缺損 組織工程

【摘要】：目的:利用脂肪間充質干細胞作為種子細胞復合實驗室自主研發(fā)的殼聚糖水凝膠支架構建組織工程軟骨,并修復兔關節(jié)軟骨缺損,探討一種適用于臨床治療的關節(jié)軟骨缺損修復方法。方法:(1)脂肪間充質干細胞的體外培養(yǎng)和鑒定:取24周齡新西蘭大白兔皮下脂肪,膠原酶消化后體外擴增培養(yǎng)得到脂肪間充質干細胞,通過定向分化為軟骨細胞鑒定其多能性。(2)殼聚糖水凝膠的制備:1,6-己二酸異氰酸酯和聚乙二醇-400制備殼聚糖水凝膠的交聯(lián)劑,將所得的交聯(lián)劑加入2%(wt%)的殼聚糖溶液,室溫下混合均勻后得到殼聚糖水凝膠,凝膠凍干后備用。(3)組織工程軟骨的體外構建:脂肪間充質干細胞種植于滅菌后的殼聚糖水凝膠上,體外培養(yǎng)1周構建組織工程軟骨。(4)關節(jié)軟骨缺損修復評價:制作兔關節(jié)軟骨缺損模型,并將動物隨機分為3組。A組為對照組,B組為殼聚糖水凝膠材料組,C組為實驗組,即植入體外初步構建的組織工程軟骨的動物。分別于術后4周、8周、12周取樣,通過大體觀察、HE染色、Safranin-O及Collagen II免疫組化染色等方法觀察缺損關節(jié)軟骨的修復情況,并用國際關節(jié)軟骨修復協(xié)會ICRS制定的評分法進行大體及組織學評分。結果:(1)體外培養(yǎng)獲得大量兔脂肪間充質干細胞,經鑒定其能很好的向軟骨細胞分化,表明其完全可以作為組織工程軟骨構建種子細胞來源。(2)大體觀察可見:實驗組兔在植入組織工程軟骨后其缺損軟骨得到了明顯修復,新生組織與正常組織結合緊密,其結構和胞外基質的分泌情況類似于正常組織。材料組由于殼聚糖凝膠本身對缺損部位的填充,因此大體觀可見新生組織填充,其新生組織也有一定的透明軟骨層,但新生組織結合不夠緊密,缺損處仍有明顯凹陷。對照組動物大體觀察顯示,雖然損傷部位有白色新生組織填充,但組織之間結合不夠緊密,新生組織與正常組織之間存在明顯的界限。(3)HE染色、Safranin-O染色和COLⅡ免疫化學染色結果顯示:實驗組新生組織表面為軟骨層,新生組織的結構與正常軟骨類似,具有透明軟骨所特有的軟骨陷窩、細胞外基質的分泌情況良好。材料組織學染色結果顯示,凝膠材料的降解速度快于新生組織的形成速度,因此其內部存在明顯的空洞,與正常組織有較大的區(qū)別。對比與實驗組和材料組,對照組的修復情況最差,染色結果顯示,填充缺損部位的新生組織大部分為纖維軟骨,組織結構和胞外基質分泌情況明顯差于正常組織。ICRS大體及組織學評分結果顯示實驗組的修復情況與其他兩組有顯著性差異(P0.05)。結論:(1)采用膠原酶消化的方法可以獲得大量純度較高、分化能力好的脂肪間充質干細胞,可以作為構建組織工程軟骨的種子細胞。(2)利用脂肪間充質干細胞作為種子細胞與實驗室自主研發(fā)的殼聚糖凝膠支架構建組織的工程軟骨對缺損關節(jié)軟骨具有良好的修復作用,且修復是一種完全的結構性的修復。
【關鍵詞】：殼聚糖水凝膠 脂肪間充質干細胞 關節(jié)軟骨缺損 組織工程
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R687;R318.08
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-25
• 結果25-35
• 討論35-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述：關節(jié)軟骨缺損修復的研究進展44-57
• 參考文獻53-57
• 附錄57-58
• 個人簡歷58-59

【參考文獻】

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本文編號：869968