發(fā)布時間：2017-09-03 19:05

  本文關鍵詞：光動力療法抗多重耐藥銅綠假單胞菌感染的研究

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【摘要】：目的 研究釕化合物對銅綠假單胞菌的光動力(Photodynamic therapy, PDT)殺傷作用,初步觀察其在體抗感染效果。方法(1)銅綠假單胞菌ATCC 27853、PAO1和3株臨床分離的PA1、PA2、PA3,配成108CFU/ml細菌懸液,將Ru光敏劑(PS)按不同濃度與其混合后孵育30 min,用波長457 nm激光,功率密度40 mW/cm2,照射時間10 min進行PDT處理,另設完全空白、單純光敏劑、單純照光對照組。各組在處理后采用稀釋平板法計數(shù)觀察PDT對浮游菌的殺傷作用。并電鏡觀察PDT后細菌超微結構的變化。(2)培養(yǎng)PAO1生物被膜,進行PDT處理(照光參數(shù)同上)。處理后采用結晶紫染色光鏡觀察PAO1生物被膜結構變化,MTT法檢測細菌活性。另設單純光敏劑、單純照光和完全空白對照組。以掃描電鏡觀察生物被膜經(jīng)PDT處理后超微結構的改變。(3)測定加入外排泵抑制劑前后PDT對銅綠假單胞菌PA1和PAO1的殺傷。根據(jù)加入PAβ N和光敏劑的先后順序,分為單純PS、同時加入、先外排泵抑制劑(Efflux pump inhibitor, EPI)后PS和先PS后EPI組,PDT處理后,測定細菌活性。同時采用吸收光譜法檢測各組中與細菌結合的PS含量。(4)采用膠帶撕脫法建立小鼠皮膚PAO1感染模型,將24只感染小鼠分為PDT和單純感染組,每組12只。PDT后即刻、24h剪取感染皮膚(n=6),平板計數(shù)單位皮膚中的細菌數(shù)。PDT后觀察大體變化,行病理組織學檢查(n=3)。結果(1)不同濃度Ru-PDT對5株銅綠假單胞菌均有殺傷。光敏劑在濃度10μM時,5株銅綠假單胞菌活性均降低4 Log以上。電鏡觀察發(fā)現(xiàn),PDT后細菌內(nèi)外膜遭到破壞,胞內(nèi)容物從膜結構上的裂縫中釋放。(2)隨光敏劑濃度的增加,生物被膜內(nèi)細菌活性在PDT處理后降低。在相同PDT條件下,Ru-PDT對被膜內(nèi)細菌的作用較對浮游菌弱。25μM-PDT處理可明顯破壞生物被膜結構的完整性,清除菌體及胞外基質(zhì)。(3)加入PAβN可增強PDT的作用效果。先加PAβN再加PS組PDT對細菌的殺傷作用最強,與細菌結合的光敏劑含量最高。先加PS再加PAβN時,PDT殺傷效果最差。(4)PDT后細菌負荷明顯低于空白對照組(p0.01),并達到了有效殺傷標準(細菌數(shù)降低3 Log)。24h時有細菌再生長現(xiàn)象,但PDT處理后24h細菌負荷仍然低于感染2h和24h組。PDT處理后小鼠皮膚創(chuàng)面有明顯的縮小結論：1. Ru-PDT具有殺傷銅綠假單胞菌的作用,其機制可能是通過破壞細菌膜結構的完整性引起胞質(zhì)成分外泄,導致細菌死亡。2. Ru-PDT具有殺傷銅綠假單胞菌生物被膜內(nèi)細菌及破壞被膜的作用。PDT對生物被膜內(nèi)細菌的殺傷比對浮游菌的殺傷弱。3.外排泵抑制劑PA β N可以增強Ru-PDT作用,可能是通過抑制細菌外排泵,減少光敏劑排出菌體外而起作用。4.PDT干預可有效殺傷皮膚感染灶內(nèi)病菌,減少炎癥反應,促進創(chuàng)面愈合。
【關鍵詞】：光動力療法 銅綠假單胞菌 多重耐藥 生物被膜 感染
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R454.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-16
• 第一部分：Ru-PDT對5株耐藥性不同的銅綠假單胞菌的體外殺傷效果及作用位點觀察16-25
• 引言16
• 材料與方法16-19
• 結果19-22
• 討論22-24
• 小結24-25
• 第二部分：Ru-PDT對銅綠假單胞菌生物被膜的清除作用25-32
• 引言25
• 材料與方法25-27
• 結果27-29
• 討論29-31
• 小結31-32
• 第三部分：細菌多重耐藥外排泵抑制劑對Ru-PDT殺菌作用的影響32-44
• 引言32
• 材料與方法32-35
• 結果35-40
• 討論40-43
• 小結43-44
• 第四部分：Ru-PDT在體抗感染效果觀察44-59
• 引言44
• 材料與方法44-47
• 結果47-55
• 討論55-58
• 小結58-59
• 結論與展望59-60
• 參考文獻60-68
• 文獻綜述68-82
• 參考文獻77-82
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬紅霞,鄧旭明,歐陽紅生;細菌多重耐藥分子機制的研究進展[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);2002年03期

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本文編號：786778