本文關(guān)鍵詞：PDMS基底彈性對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞骨向誘導(dǎo)分化的影響

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細胞 聚二甲基硅氧烷 基底彈性誘導(dǎo) 骨向分化

【摘要】：目的：觀察大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow-deri ved mesenchymal stem cells, BMSCs)在不同彈性的聚二甲基硅氧烷(Polydimethylsiloxane,PDMS)基底上的骨向分化差異,尋找合適的骨向分化基底硬度范圍,明確高彈性模量的基底是否適合BMSCs向成骨細胞分化,以期未來能夠通過調(diào)整骨替代材料的彈性,模擬適于骨向分化的理想條件,從而提高其成骨誘導(dǎo)能力,最終在體內(nèi)環(huán)境下達到骨組織重建的最佳狀態(tài)。方法：本研究擬結(jié)合材料學(xué)、生物力學(xué)和分子生物學(xué)的理論和方法,進行體外實驗。以PDMS制各彈性模量為2170±340KPa、354±40KPa、50±12KPa、14±1KPa、4± 0.1KPa的基底,模擬生物體內(nèi)不同組織的彈性,培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,利用實時定量聚合鏈式反應(yīng)(Real-time PCR)、免疫印跡檢測(Western blot)、免疫熒光染色檢測(Immunofluorescence)、堿性磷酸酶活性測定(Alkaline Phosphatase Assay)等方法,從細胞形態(tài)、成骨分化分子指標蛋白檢測和細胞功能等方面來評估調(diào)控PDMS的基質(zhì)彈性對骨髓間充質(zhì)干細胞骨向分化影響。結(jié)果：PDMS能夠模擬生物體內(nèi)不同組織的彈性,彈性模量可從2170±340KPa到4±0.1KPa,經(jīng)過表面修飾后,大鼠BMSCs在其上貼壁良好,形態(tài)規(guī)則,培養(yǎng)7天后,不同彈性基底上的BMSCs表現(xiàn)出骨向分化差異。在彈性模量為2170±340KPa.354±40KPa.50±12KPa.14±1KPa.4±0.1KPa的PDMS基底上誘導(dǎo)培養(yǎng)7天后,大鼠BMSCs在彈性模量為354±40KPa的基底上表現(xiàn)出更顯著的骨向分化能力,與本組實驗內(nèi)其他彈性模量的基底比較有顯著性差異。結(jié)論：PDMS可滿足彈性基底誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞骨向分化實驗的要求,可作為良好的觀察其體外培養(yǎng)的實驗基底材料。PDMS基底的彈性模量在354±40KPa范圍內(nèi)時,BMSC向成骨系方向分化最理想。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 聚二甲基硅氧烷 基底彈性誘導(dǎo) 骨向分化
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 引言6-8
• 實驗材料8-11
• 1.1 實驗動物8
• 1.2 各類試劑及試劑盒8-9
• 1.3 所用抗體9
• 1.4 實驗儀器9-10
• 1.5 試劑配制10-11
• 實驗方法11-18
• 2.1 原代大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)、傳代及收集11-12
• 2.2 PDMS基底制備方法12
• 2.3 原子力顯微鏡(AFM)測量基底硬度12-13
• 2.4 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化標志蛋白的檢測13-15
• 2.5 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨標記物mRNA水平表達15-17
• 2.6 免疫熒光染色檢測成骨標記物的分布狀態(tài)17
• 2.7 堿性磷酸酶活性測定17-18
• 統(tǒng)計分析方法18
• 實驗結(jié)果18-24
• 4.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)18
• 4.2 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在PDMS基底上的培養(yǎng)18-19
• 4.3 基底材料硬度測量值19
• 4.4 免疫印跡檢測(Western blot)成骨標記物蛋白水平表達19-20
• 4.5 實時定量聚合鏈式反應(yīng)(Real-time PCR)檢測成骨標記物mRNA水平表達20-21
• 4.6 免疫熒光染色檢測成骨標記物的分布狀態(tài)21-23
• 4.7 堿性磷酸酶活性測定23-24
• 分析討論24-28
• 結(jié)論和展望28-29
• 參考文獻29-32
• 綜述 BMSCs的骨向誘導(dǎo)分化及在口腔醫(yī)學(xué)的應(yīng)用32-39
• BMSC的生物學(xué)特性32
• 誘導(dǎo)分化的方法32-34
• 骨髓間充質(zhì)干細胞在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用34-35
• 討論與展望35-36
• 參考文獻36-39
• 致謝39

【參考文獻】

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1 王tR;李正;王小娜;蘭愛平;吳文;;雷奈酸鍶通過上調(diào)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的表達促進骨髓間充質(zhì)干細胞分化為成骨細胞[J];中國病理生理雜志;2012年03期

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本文編號：762782