本文關(guān)鍵詞：天然牛角材料的生物相容性的初步研究

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【摘要】：目的：生物材料在臨床中的重要性日益突出，已大量應(yīng)用于骨科、心血管內(nèi)科、傷口護理及整形外科等多個領(lǐng)域。天然牛角材料屬于生物衍生材料，其主要成分為含有17種氨基酸及無機元素的緊密排列的角蛋白，具有成本低、易于制備、理化性質(zhì)良好等特點。本實驗擬通過對天然牛角材料的生物相容性進行初步研究，從而為其臨床應(yīng)用打下實驗基礎(chǔ)。 方法：天然牛角材料浸提液制備 取天然牛角，制備成10mm×5mm×5mm的長方體，經(jīng)脫脂、超聲清洗、高壓蒸汽滅菌后置入Eppendof管中加入2.0mL浸提介質(zhì)（細胞毒性實驗浸提介質(zhì)為RPMI1640培養(yǎng)液，溶血實驗、急性毒實驗、遲發(fā)型超敏反應(yīng)實驗浸提介質(zhì)為生理鹽水），在培養(yǎng)箱中保存3天后收集浸提液并保存。 細胞毒性實驗 細胞形態(tài)觀察實驗：將L929細胞分別用RPMI1640培養(yǎng)液、50%天然牛角材料浸提液及100%天然牛角材料浸提液吹打成單細胞懸液培養(yǎng)、傳代，然后分別于24小時、48小時及72h在顯微鏡下觀察L929細胞的形態(tài)變化。 MTT實驗：實驗分為空白對照組（RPMI1640培養(yǎng)液）、50%天然牛角材料浸提液組及100%天然牛角材料浸提液組。將L-929細胞制備成細胞懸液接種于96孔板中，置入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后棄去原液，分別加入上述3組溶液再次置入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)24小時、48h小時及72小時后取出一塊96孔板，，加MTT液，加DMSO，在免疫酶標儀上測定492nm處的吸光度（OD）值。 溶血實驗 抽取兔血10ml，加入抗凝劑，制備成符合實驗要求的稀釋兔血。實驗分為陰性對照組（生理鹽水）、陽性對照組（蒸餾水）及實驗組（天然牛角材料浸提液）。分別取各組溶液10ml，預(yù)溫30分鐘（37℃水浴箱），各加入稀釋兔血0.2ml，保溫60分鐘（37℃水浴箱），離心5分鐘，最后在免疫酶標儀上測定540nm處的吸光度（OD）值。 急性毒性實驗 將20只小鼠隨機分為兩組，實驗組小鼠腹腔內(nèi)注射天然牛角材料浸提液（劑量為50ml/Kg），對照組小鼠腹腔內(nèi)注射與實驗組小鼠同等劑量的生理鹽水。注射后立刻觀察兩組小鼠狀態(tài),并稱量其體重，并分別于24小時、48小時及72h后重復(fù)觀察、稱重。 遲發(fā)型實驗方法 實驗分為實驗組（天然牛角材料浸提液）、陰性對照組（生理鹽水）及陽性對照組（5%甲醛）。誘導(dǎo)階段:分別將20mm×20mm敷料浸透天然牛角材料浸提液、生理鹽水及5%甲醛后局部貼覆在兩組動物體上,固定6小時,間隔1周重復(fù)該步驟,連續(xù)操作3周。激發(fā)階段:最后一次貼覆14天后,再用20mm×20mm敷料浸透相應(yīng)溶液局部貼覆于動物去毛未試部位,6小時后去除。動物觀察:激發(fā)接觸24小時后觀察相應(yīng)指標。 結(jié)果： 1倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：在培養(yǎng)24小時、48小時及72小時后，50%、100%天然牛角材料浸提液組與陰性對照組相比，對L929細胞形態(tài)及增殖的影響相似。細胞形態(tài)呈梭形、三角形或不規(guī)則形，貼壁生長良好，胞漿內(nèi)偶見離散顆粒，無細胞溶解，細胞數(shù)目明顯增多。 2通過多變量方差分析法對MTT實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，得到Wilks,Lambda值為0.736，F(xiàn)值為1.711，P值為0.1330.05，表明實驗組與對照組OD均值在各個時間段內(nèi)均無統(tǒng)計學(xué)差異。在各個時間段、各個實驗組計算所得RGR%均100%，毒性均屬0級。 3陰性對照組OD均值為0.005，陽性對照組OD均值為0.705，天然牛角材料浸提液OD均值為0.016；天然牛角材料浸提液溶血率（%）=（0.016-0.005）/（0.753-0.005）×100%=0.124%。 4實驗組及對照組動物一般狀況良好，觀察期內(nèi)兩組小鼠均無運動減少、呼吸困難、腹部刺激癥狀、衰竭、發(fā)紺和動物死亡等毒性反應(yīng)。 兩組小鼠體重均呈上升趨勢且通過重復(fù)測量方差分析法分析結(jié)果顯示：實驗組與對照組在24小時、48小時及72h不同觀察時間內(nèi)小鼠體重均數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組與對照組在24小時、48小時及72小時三個時間點之間小鼠體重均數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。 5用K-W-H秩和檢驗法對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析：紅斑做評價標準，陽性對照組發(fā)生紅斑的嚴重程度及發(fā)生率均明顯大于實驗組和陰性對照組(P0.000);雖然實驗組紅斑發(fā)生率（30%）大于陰性對照組（0%），但是其發(fā)生紅斑的嚴重程度較輕且與陰性對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.070）。水腫做評價標準，陽性對照組發(fā)生水腫的嚴重程度及發(fā)生率均明顯大于實驗組和陰性對照組(P0.000);雖然實驗組水腫發(fā)生率（30%）大于陰性對照組（0%），但是其發(fā)生水腫的嚴重程度較輕且與陰性對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.070）。 結(jié)論:本實驗結(jié)果表明天然牛角材料無細胞毒性、無溶血作用、無毒性、無明顯致敏作用，初步證實了：在本實驗條件下，天然牛角材料具有良好的生物相容性。
【關(guān)鍵詞】：生物材料 生物相容性 細胞毒性 溶血 急性毒性 遲發(fā)型超敏反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-18
• 附圖18-23
• 附表23-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-34
• 綜述 生物材料及其生物相容性評價方法的研究與展望34-43
• 參考文獻40-43
• 致謝43-44
• 個人簡歷44

【參考文獻】

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本文編號：741583