發(fā)布時(shí)間：2017-08-21 13:00

  本文關(guān)鍵詞：雙基因pCDNA 3.1-NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的研究

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【摘要】：[目的]研究雙基因NGF與BMP2轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs并誘導(dǎo)BMSCs成骨分化后表達(dá)情況。[方法]將第三代大鼠BMSCs,分為五組,單基因pCDNA3.1-NGF轉(zhuǎn)染組(A組),單基因pCDNA3.1-BMP2轉(zhuǎn)染組(B組),雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉(zhuǎn)染組(C組),空質(zhì)粒對照組(D組)、陰性對照組(E組)。運(yùn)用Lipofectamine2000介導(dǎo)將各組基因轉(zhuǎn)染BMSCs,Western-blot檢測目的基因蛋白表達(dá)情況,免疫組織化學(xué)染色檢測I型膠原蛋白表達(dá)含量并測定灰度值。ALP試劑盒檢測ALP表達(dá)含量,茜素紅染色測定轉(zhuǎn)染后各組鈣結(jié)節(jié)并計(jì)數(shù)。[結(jié)果]各組基因轉(zhuǎn)染BMSCs后,Western-blot、I型膠原免疫組化染色、ALP試劑盒檢測、茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均提示雙基因轉(zhuǎn)染組的目的蛋白表達(dá)量、I型膠原蛋白表達(dá)量、ALP表達(dá)量、鈣結(jié)節(jié)形成數(shù)目均高于單基因轉(zhuǎn)染組、空質(zhì)粒組及陰性對照組。[結(jié)論]轉(zhuǎn)染雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2組BMSCs可同時(shí)表達(dá)兩種目的蛋白,能誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化,NGF的加入能夠增強(qiáng)BMP2的成骨作用。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院四肢創(chuàng)傷骨科;桂林醫(yī)學(xué)院生物技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： BMSCs 轉(zhuǎn)染 NGF BMP 誘導(dǎo)成骨
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:81160223) 廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:2015GXNSFAA139117)
【分類號】：R68;R318
【正文快照】： 近些年來基因工程在骨科領(lǐng)域的研究已初具規(guī)模,骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromastem cells,BMSCs)因其能在特有條件下誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞而成為理想的種子細(xì)胞,而神經(jīng)生長因子(nerve growthfactor,NGF)與骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogeneticprotein 2,BMP2)作為兩種生長因，

本文編號：713001