本文關(guān)鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞三維條件下混合培養(yǎng)成軟骨細(xì)胞的研究

  更多相關(guān)文章： 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 混合培養(yǎng) 殼聚糖 I型膠原 PLLA/PDLA

【摘要】：目的:滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與其他組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞相比成軟骨細(xì)胞的能力更強(qiáng)。通過共培養(yǎng),利用細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)干細(xì)胞的分化,結(jié)合復(fù)合支架材料提供三維空間更利于細(xì)胞的分化。本研究的目的是將滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞混合培養(yǎng)于天然及人工支架材料上,觀察三維環(huán)境下滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞混合培養(yǎng)后的粘附與生長及形成軟骨細(xì)胞的能力。方法:取SD大鼠滑膜組織及軟骨組織,酶消化法獲得滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞及軟骨細(xì)胞分別進(jìn)行培養(yǎng)。取第3代滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞和第2代軟骨細(xì)胞,二者以1∶2的比例混合培養(yǎng)負(fù)載于殼聚糖/I型膠原天然支架材料及I型膠原與PLLA/PDLA復(fù)合支架材料上培養(yǎng)21d,進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、激光共聚焦掃描及免疫組織化學(xué)檢測。結(jié)果:培養(yǎng)72h后,掃描電鏡觀察細(xì)胞黏附于兩種支架材料表面,可見大量細(xì)胞基質(zhì)成分。培養(yǎng)21d后,激光共聚焦掃描可見細(xì)胞在支架表面分布均勻,逐層掃描后細(xì)胞逐漸減少。免疫組化及甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果呈陽性表達(dá)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)表明復(fù)合支架材料可以為細(xì)胞的分化提供三維生長空間,通過共培養(yǎng),利用軟骨細(xì)胞分泌生長因子及細(xì)胞間的相互作用可以誘導(dǎo)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 混合培養(yǎng) 殼聚糖 I型膠原 PLLA/PDLA
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 內(nèi)容與方法12-19
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及主要試劑12-13
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器12
• 1.3 主要試劑12
• 1.4 主要試劑的配制12-13
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟13-17
• 2.1 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞的體外擴(kuò)增與培養(yǎng)13-14
• 2.1.1 大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織的獲取及原代培養(yǎng)13
• 2.1.2 軟骨細(xì)胞的獲取及原代培養(yǎng)13-14
• 2.1.3 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)14
• 2.1.4 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存14
• 2.1.5 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇14
• 2.1.6 形態(tài)學(xué)觀察14
• 2.1.7 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞吉姆薩染色14
• 2.2 殼聚糖/Ⅰ型膠原復(fù)合支架材料14-16
• 2.2.1 殼聚糖/Ⅰ型膠原復(fù)合支架材料形態(tài)觀察14-15
• 2.2.2 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)于殼聚糖Ⅰ型膠原復(fù)合支架材料15
• 2.2.3 掃描電鏡觀察混合培養(yǎng)細(xì)胞與支架材料的組織相容性15
• 2.2.4 激光共聚焦顯微鏡下觀察混合培養(yǎng)細(xì)胞在支架材料上的分布15
• 2.2.5 混合培養(yǎng)細(xì)胞支架復(fù)合物冰凍切片蘇木精-伊紅染色15
• 2.2.6 混合培養(yǎng)細(xì)胞支架復(fù)合物冰凍切片甲苯胺藍(lán)染色15
• 2.2.7 混合培養(yǎng)細(xì)胞支架復(fù)合物冰凍切片免疫組化染色15-16
• 2.3 I型膠原與PLLA/PDLA復(fù)合支架材料16-17
• 2.3.1 I型膠原與PLLA/PDLA復(fù)合支架材料形態(tài)掃描電鏡觀察16
• 2.3.2 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞混合培養(yǎng)于I型膠原/PLLA/PDLA支架材料16
• 2.3.3 支架材料對混合培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測16
• 2.3.4 掃描電鏡觀察細(xì)胞與I型膠原/PLLA/PDLA復(fù)合支架材料的組織相容性16
• 2.3.5 細(xì)胞與I型膠原/PLLA/PDLA復(fù)合支架材料復(fù)合物蘇木精- 伊紅染色16-17
• 2.3.6 細(xì)胞與I型膠原/PLLA/PDLA支架材料復(fù)合物免疫組化染色17
• 3. 質(zhì)量控制17
• 4. 統(tǒng)計方法17-18
• 5. 技術(shù)路線圖18-19
• 結(jié)果19-26
• 討論26-30
• 小結(jié)30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻(xiàn)32-37
• 綜述37-47
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文47-48
• 導(dǎo)師評閱表48

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本文編號：642317