本文關(guān)鍵詞：低密度脂蛋白親和膜表面模型化構(gòu)建與相互作用研究

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【摘要】：人體血液中低密度脂蛋白(LDL)含量過高會(huì)引發(fā)心腦血管疾病,嚴(yán)重威脅人類健康。對(duì)于重癥高血脂癥患者的治療,低密度脂蛋白血液凈化療法因其高效性而長(zhǎng)期備受關(guān)注。近年來,各種血液凈化療法被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)研究,其研發(fā)核心為低密度脂蛋白親和吸附材料。本文旨在通過分子自組裝法構(gòu)建富含糖基／磺酸基的模型表面,系統(tǒng)研究LDL蛋白與模型表面之間的相互作用過程,重點(diǎn)關(guān)注糖基在相互作用過程中發(fā)揮的協(xié)同效應(yīng),并提出“多重相互作用模型”；在此基礎(chǔ)上,組合紫外光輻射接枝技術(shù)與“點(diǎn)擊”化學(xué)表面改性方法,制備低密度脂蛋白親和改性聚砜膜,用于LDL高效親和吸附分離過程。具體研究?jī)?nèi)容如下： 首先,通過混合自組裝單分子層(mixed-SAM)法構(gòu)建不同糖基/磺酸基組成的模型表面,利用表面等離子體共振(SPR)技術(shù)研究固-液體系低密度脂蛋白吸附動(dòng)力學(xué)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著自組裝模型表面糖基含量的增加,表面吸附蛋白量在糖基／磺酸基摩爾比為1.20時(shí)達(dá)到極大值,藉此提出“多重相互作用模型”,即除了被普遍認(rèn)可的磺酸基與低密度脂蛋白間靜電相互作用外,表面固定的糖基也參與了蛋白相互作用過程,表現(xiàn)為蛋白吸附過程中的協(xié)同效應(yīng)；采用圓二色譜(CD)技術(shù)進(jìn)一步研究糖基與對(duì)蛋白三維構(gòu)象的影響,結(jié)果表明糖基促使LDL蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生解螺旋現(xiàn)象。 基于上述“多重相互作用模型”,通過紫外光輻射法引發(fā)丙烯酸(AA)在聚砜膜表面接枝聚合,再以EDC/NHS介導(dǎo)酰胺化反應(yīng)與巰基糖/巰基磺酸類巰基試劑的巰-炔點(diǎn)擊反應(yīng)實(shí)現(xiàn)聚砜膜表面糖基/磺酸基化改性,制備LDL高效親和吸附改性聚砜膜；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試(ELISA)法系統(tǒng)研究改性膜表面蛋白吸附與脫吸附行為,當(dāng)改性聚砜膜表面糖基/磺酸基摩爾比為0.95時(shí),其對(duì)LDL蛋白吸附量出現(xiàn)極大值0.49μg/cm2,洗脫劑NaCl/Urea(1:1)溶液對(duì)糖基/磺酸基混合組成表面脫吸附效率高于單一羧基、磺酸基、糖基組成表面；上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果在糖基/磺酸基化改性聚砜膜復(fù)雜形貌表面進(jìn)一步驗(yàn)證了“多重相互作用模型”的適用性。 本論文首創(chuàng)性提出的“多重相互作用模型”有望為新型低密度脂蛋白親和吸附材料的研制開辟新思路。
【關(guān)鍵詞】：低密度脂蛋白 血液凈化 多重相互作用模型 表面改性 蛋白親和膜
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：O629.73;R318.08
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-25
• 1.1 概述12-13
• 1.2 低密度脂蛋白血液凈化療法13-17
• 1.2.1 雙重濾過血漿置換法(DFPP)13-14
• 1.2.2 免疫吸附法(IMA)14
• 1.2.3 硫酸右旋糖酐吸附法(DSA)14-15
• 1.2.4 肝素誘導(dǎo)體外LDL沉淀法(HELP)15-16
• 1.2.5 聚丙烯酸系列全血灌流分離法(DALI)16-17
• 1.2.6 硫酸右旋糖酐系列全血灌流分離法(Liposorber D)17
• 1.3 低密度脂蛋白吸附分離材料17-20
• 1.3.1 免疫型吸附材料18
• 1.3.2 非離子型吸附材料18
• 1.3.3 疏水型吸附材料18
• 1.3.4 陰離子型吸附材料18-20
• 1.3.5 雙親型吸附材料20
• 1.4 課題設(shè)計(jì)20-25
• 1.4.1 課題啟發(fā)與設(shè)計(jì)思想21-22
• 1.4.2 課題提出與涉及內(nèi)容22-25
• 第2章 實(shí)驗(yàn)部分25-38
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2.3 原料純化與預(yù)處理27-28
• 2.4 金表面自組裝反應(yīng)過程28-29
• 2.4.1 金片預(yù)清洗與再生28
• 2.4.2 混合自組裝過程28-29
• 2.4.3 脫乙酰化過程29
• 2.5 聚砜膜表面改性過程29-31
• 2.5.1 紫外光輻射法表面接枝過程29-30
• 2.5.2 酰胺化過程30
• 2.5.3 “點(diǎn)擊”法磺酸基/糖基化過程30-31
• 2.6 表面結(jié)構(gòu)與性能表征31-34
• 2.6.1 稱重法(WM)31
• 2.6.2 甲苯胺藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.6.3 衰減全反射傅里葉變換紅外光譜(ATR/FT-IR)32
• 2.6.4 X-射線光電子能譜(XPS)32-33
• 2.6.5 場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡(FESEM)33
• 2.6.6 原子力顯微鏡(AFM)33
• 2.6.7 靜/動(dòng)態(tài)水接觸角(WCA)33-34
• 2.7 蛋白相互作用研究34-38
• 2.7.1 表面等離子體共振(SPR)34-35
• 2.7.2 圓二色譜(CD)35
• 2.7.3 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試(ELISA)35-38
• 第3章 低密度脂蛋白親和界面模型化研究38-54
• 3.1 引言38-39
• 3.2 混合自組裝反應(yīng)過程39-40
• 3.3 LDL親和表面的模型化構(gòu)建40-42
• 3.3.1 表面組成測(cè)定40-41
• 3.3.2 表面形貌表征41-42
• 3.4 固-液體系LDL吸附性能研究42-49
• 3.4.1 蛋白吸附動(dòng)力學(xué)43-45
• 3.4.2 不同組成表面對(duì)蛋白吸附性能研究45-47
• 3.4.3 蛋白脫吸附性能研究47-49
• 3.5 均相體系LDL-配基相互作用研究49-52
• 3.5.1 定性觀測(cè)蛋白構(gòu)象變化49-51
• 3.5.2 計(jì)算機(jī)擬合定量分析計(jì)算51-52
• 3.6 本章小結(jié)52-54
• 第4章 低密度脂蛋白親和聚砜膜的制備及其性能研究54-75
• 4.1 引言54-56
• 4.2 紫外光輻射法表面接枝過程56-61
• 4.2.1 接枝反應(yīng)條件57-59
• 4.2.2 清洗過程條件59-60
• 4.2.3 表面接枝均勻度60
• 4.2.4 親水性能研究60-61
• 4.3 化學(xué)反應(yīng)改性過程61-65
• 4.3.1 酰胺化反應(yīng)過程61-63
• 4.3.2 “點(diǎn)擊”化學(xué)反應(yīng)過程63-65
• 4.4 LDL親和膜表面組成65-68
• 4.4.1 FESEM法表征改性膜表面形貌66
• 4.4.2 ATR/FT-IR法測(cè)定表面基團(tuán)組成66-67
• 4.4.3 XPS法測(cè)定表面元素組成67-68
• 4.5 LDL親和膜蛋白吸附性能研究68-72
• 4.5.1 ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線69-70
• 4.5.2 ELISA法研究蛋白吸附性能70-72
• 4.6 LDL親和膜蛋白脫吸附性能研究72-73
• 4.7 本章小結(jié)73-75
• 第5章 主要結(jié)論與展望75-78
• 5.1 主要結(jié)論75-76
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)與研究意義76
• 5.3 不足與展望76-78
• 參考文獻(xiàn)78-85
• 作者簡(jiǎn)歷85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 胡箭,李元;低密度脂蛋白受體研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2000年06期

2 叢海霞;杜龍兵;方波;尤超;;月桂酸修飾的低密度脂蛋白吸附劑研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2010年03期

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本文編號(hào)：628722