目的:為進一步優(yōu)化組織工程骨仿生性能,本研究擬通過將具有優(yōu)良增殖分化性能、分泌合成膠原能力、含多種調(diào)控因子的成纖維細胞(FB)與血管內(nèi)皮細胞(VECs)聯(lián)合共培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細胞(ADSCs),探討FB對ADSCs的作用,明確FB是否能加強VECs的直接誘導(dǎo)作用,為解決組織工程骨形成緩慢、血管化緩慢等問題以及臨床骨缺損治療方案提供捷徑和新思路。方法:①將血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、脂肪干細胞三種細胞株分別體外培養(yǎng),并通過細胞形態(tài)學(xué)及表面標記進行檢測和鑒定,確定其各自細胞生物學(xué)特性;②將細胞分為四組:ADSCs組、ADSCs+VECs共培養(yǎng)組、ADSCs+FB共培養(yǎng)組、ADSCs+VECs+FB共培養(yǎng)組,分別倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化;③CCK-8法繪制出各組細胞的生長曲線,比較各組細胞增殖情況;④共培養(yǎng)第7、14、21、28天各組進行茜素紅染色、ALP染色,分別進行定性及定量檢測;⑤共培養(yǎng)第3周行Western blot檢測各組BMP-2蛋白水平表達;⑥共培養(yǎng)第3周行RT-PCR檢測成骨標志基因(ALP、OCN)mRNA的表達,以評估共培養(yǎng)體系的成骨分化能力。結(jié)果:①三種細胞的形態(tài)及...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２脂肪間充質(zhì)干細胞（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．?１－２?Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ?１００）??

３．結(jié)果??３．１脂肪干細胞的培養(yǎng)與鑒定??１）倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)：穩(wěn)定傳至４周３代后可見大量梭形細胞和多??角細胞，胞體大，核居中（圖１－１），呈巢狀生長，排列緊湊且規(guī)律（圖１－２）。??■■Ｉ??＿＿＿??酶纏??圖１－１脂肪間充質(zhì)干細胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?....

圖１－１脂肪間充質(zhì)干細胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ４０）??

３．結(jié)果??３．１脂肪干細胞的培養(yǎng)與鑒定??１）倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)：穩(wěn)定傳至４周３代后可見大量梭形細胞和多??角細胞，胞體大，核居中（圖１－１），呈巢狀生長，排列緊湊且規(guī)律（圖１－２）。??■■Ｉ??＿＿＿??酶纏??圖１－１脂肪間充質(zhì)干細胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?....

圖１－６脂肪間充質(zhì)干細胞ｖＷＦ免疫熒光染色（－）??Ｆｉ．?１－６?ｖＷＦ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓａｉｎｉｎｏｆ?ａｄｉｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ－

２）表面抗原鑒定檢測：第３代脂肪間充質(zhì)干細胞免疫熒光檢測ＣＤ９０、ＣＤ１０５??染色均為陽性表達（圖１－３，?１－４）；?ＣＤ１３３、ｖＷＦ均陰性表達（圖１－５，１－６）。??圖１－３脂肪間充質(zhì)干細胞ＣＤ９０免疫熒光染色（＋）??Ｆｉｇ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ....

圖１－３脂肪間充質(zhì)干細胞ＣＤ９０免疫熒光染色（＋）??Ｆｉ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｏｆ?ａｄｉｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ＋

２）表面抗原鑒定檢測：第３代脂肪間充質(zhì)干細胞免疫熒光檢測ＣＤ９０、ＣＤ１０５??染色均為陽性表達（圖１－３，?１－４）；?ＣＤ１３３、ｖＷＦ均陰性表達（圖１－５，１－６）。??圖１－３脂肪間充質(zhì)干細胞ＣＤ９０免疫熒光染色（＋）??Ｆｉｇ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ....

本文編號：3998312