本文關(guān)鍵詞：膜離子通道阻滯及細(xì)胞骨架破壞對拉伸應(yīng)力刺激兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞代謝的影響

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【摘要】：目的：探討在拉伸應(yīng)力作用下,膜離子通道阻滯劑和CSK(細(xì)胞骨架)破壞劑對離體培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞代謝的影響。 方法：2月齡新西蘭大白兔10只,無菌條件下分離培養(yǎng)雙膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,且將其隨機分為8組,對照組、微管破壞組、微絲破壞組、中間纖維破壞組、Na+通道阻滯組、K+通道阻滯組、Ca2+通道阻滯組、Cl-通道阻滯組。在拉伸應(yīng)力(拉伸率為10%,頻率為0.5Hz,正弦波,6h/D)作用下加載3天后,分別加入離子通道阻滯劑(Na+、K+、Ca2+及Cl-通道阻滯劑)和細(xì)胞骨架破壞劑(微管破壞劑、微絲破壞劑及中間纖維破壞劑),37℃培育3d。采用HE染色觀察其形態(tài)；ELASA法(酶聯(lián)免疫吸附測定法)檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-13(基質(zhì)金屬蛋白酶-13)、TIMP-1(金屬蛋白酶組織抑制劑-1)的含量；阿爾新藍(lán)染色法檢測各組培養(yǎng)液中GAG的含量；RT-PCR的方法檢測各組細(xì)胞中Col-Ⅱ (Ⅱ型膠原)、MMP-3(基質(zhì)金屬蛋白酶-3)、TIMP-1、Actin(肌動蛋白)、Tubulin(微管蛋白)、Vimentin(波形蛋白)mRNA的相對表達(dá)量。 結(jié)果：與對照組相比,細(xì)胞骨架破壞組及離子通道阻滯組軟骨細(xì)胞形態(tài)均出現(xiàn)排列不均勻,形態(tài)各異,細(xì)胞核深染,大小不一,細(xì)胞質(zhì)減少等現(xiàn)象；且細(xì)胞骨架破壞組上清液中GAG濃度均較對照組降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；蛋白水平檢測顯示,微絲、中間纖維破壞組MMP-13濃度較對照組降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),中間纖維破壞組TIMP-1濃度較對照組明顯上升,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05); Ca2+、Cl-離子通道阻滯組GAG濃度較對照組降低,有統(tǒng)計學(xué)意義；K+、Cl-通道阻滯組MMP-13濃度較對照組均降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；基因水平檢測結(jié)果與蛋白水平檢測結(jié)果一致；各實驗組軟骨細(xì)胞Col-Ⅱ mRNA相對表達(dá)量均下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：在拉伸應(yīng)力作用下,破壞CSK和阻滯離子通道均使軟骨細(xì)胞發(fā)生退化,其中細(xì)胞骨架蛋白和Na+、Cl-通道可能與軟骨細(xì)胞基質(zhì)的合成代謝密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞骨架 膜離子通道 拉伸應(yīng)力 軟骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中英文對照表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-20
• 結(jié)果20-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述39-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 個人簡歷53
• 研究生期間發(fā)表論文53-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：574895