目的檢測在人成纖維細(xì)胞成骨分化過程中肌動蛋白的改變及其介導(dǎo)的線粒體動力學(xué)改變。方法誘導(dǎo)人成纖維細(xì)胞成骨分化,檢測肌動蛋白和線粒體動力學(xué)的改變。在人成纖維細(xì)胞中打斷(細(xì)胞松弛素D,Cyto D)或者促進(jìn)(Jasplakinolide,JAS)肌動蛋白的聚合,于處理的第1、4、7 d分別進(jìn)行免疫熒光和Western blot等實驗檢測細(xì)胞性能及線粒體動力學(xué)相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果 Cyto D減弱成骨誘導(dǎo)液效果,JAS增強(qiáng)成骨誘導(dǎo)液效果。JAS增強(qiáng)線粒體動力學(xué)效果比Cyto D更加顯著。結(jié)論肌動蛋白的聚合促進(jìn)細(xì)胞成骨分化;肌動蛋白的聚合或解聚影響細(xì)胞成骨分化過程中線粒體與細(xì)胞骨架肌動蛋白的共定位比率。Cyto D和JAS引起的對細(xì)胞成骨分化的影響和線粒體動力學(xué)的改變,可為研究細(xì)胞線粒體以及成骨分化機(jī)制提供生物學(xué)信息。

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圖1免疫印跡法檢測成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)HSF第1、4、7、14、21d的相關(guān)蛋白表達(dá)

加入JAS促進(jìn)肌動蛋白聚合后第1～7d，線粒體融合蛋白Mfn2逐漸增加；線粒體分裂蛋白Drp1顯著增加，且第4、7d的增加倍數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于線粒體融合蛋白Mfn2，說明促進(jìn)肌動蛋白聚合后，線粒體動力學(xué)以線粒體分裂狀態(tài)為主；而β-actin蛋白隨著天數(shù)的增加，蛋白含量也隨之顯著增加，....

圖3JAS對HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響

圖2CytoD對HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響圖4CytoD和JAS對成骨誘導(dǎo)液下HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響

圖4CytoD和JAS對成骨誘導(dǎo)液下HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響

圖3JAS對HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響細(xì)胞松弛素D是微管和微絲的干擾劑，可解聚肌動蛋白，使肌動蛋白失去作用，常用于探討細(xì)胞骨架的作用[10]。邵開峰等[11]應(yīng)用CytoD抑制肝癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞的粘附性發(fā)生了改變，認(rèn)為肝癌細(xì)胞不具有正常細(xì)胞黏附行為，而是細(xì)胞骨架與肝癌細(xì)....

圖2CytoD對HSF線粒體和細(xì)胞骨架的影響

線粒體分裂蛋白Drp1被認(rèn)為是線粒體分裂特定的信號蛋白，其在肌動蛋白的組裝下聚集，Drp1相互結(jié)合形成一個圍繞線粒體的環(huán)狀“低聚物”。然后環(huán)收縮，將線粒體分成兩部分。通常認(rèn)為Drp1分子在分裂前立即進(jìn)入線粒體，形成寡聚物環(huán)。這種在線粒體上組裝和齊聚Drp1的過程稱為成熟。隨著Dr....

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