目的探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）復(fù)合膠原支架用于小型豬全層皮膚缺損修復(fù)的治療作用。方法在小型豬背部沿正中線兩側(cè)切取正方形全層皮膚缺損創(chuàng)面,隨機(jī)分為兩組,每組6個(gè)創(chuàng)面,分別給予膠原支架（對(duì)照組）及hUC-MSCs復(fù)合膠原支架（實(shí)驗(yàn)組）治療。術(shù)后連續(xù)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理狀況及創(chuàng)面愈合情況,分別于治療3周及6周切取創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色,評(píng)估創(chuàng)面皮膚損傷修復(fù)效果;并通過(guò)CK14及Ki67免疫組織化學(xué)染色,評(píng)估治療3周后表皮層細(xì)胞增殖情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組治療3周后皮膚創(chuàng)面愈合率[（91.25±3.58）%]明顯高于對(duì)照組[（73.79±5.73）%]（P<0.05）。組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)組治療3周后創(chuàng)面再表皮化速度較對(duì)照組顯著提高;治療6周后,實(shí)驗(yàn)組新生表皮層結(jié)構(gòu)較對(duì)照組完整且厚度均一,并可見(jiàn)類似正常皮膚的表皮釘突及真皮乳頭結(jié)構(gòu)。免疫組織化學(xué)分析顯示,治療3周后,實(shí)驗(yàn)組表皮層細(xì)胞CK14呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);實(shí)驗(yàn)組表皮基底層細(xì)胞Ki67陽(yáng)性率[（35.03±6.46）%]較對(duì)照組[（2.07±1.07）%]顯著提高（P<0.01）,表明實(shí)驗(yàn)組表皮層細(xì)胞增殖活躍。結(jié)論 hUCMSC... 

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hUC‐MSCsUC‐MSCs復(fù)合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析

軍事醫(yī)學(xué)2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020圖4hUC‐MSCsUC‐MSCs復(fù)合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析（n=3）22.3組織學(xué)觀察HE染色結(jié)果顯示，治療3周后，對(duì)照組可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)表皮層形成（圖5A，B）；而實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面再表皮化速度較對(duì)照組明顯提高，具有良好的表皮結(jié)構(gòu)（圖5C，D）。治療6周后，兩組創(chuàng)面均已完成再表皮化，對(duì)照組表皮厚度不均一，表皮基底層平坦（圖5E，F(xiàn)）；實(shí)驗(yàn)組修復(fù)狀況良好，表皮層結(jié)構(gòu)完整，可明顯區(qū)分基底層、棘層、顆粒層和角質(zhì)層，可見(jiàn)與正常皮膚組織相似的表皮釘突及真皮乳頭結(jié)構(gòu)，真皮層可見(jiàn)排列成束的膠原纖維（圖5G，H）。圖2hUC‐MSCsUC‐MSCs表面標(biāo)志蛋白的流式細(xì)胞儀鑒定圖3hUC‐MSCsUC‐MSCs復(fù)合膠原支架治療3周后創(chuàng)面大體觀察（黃色虛線指示創(chuàng)面區(qū)域）A.治療前；B.對(duì)照組；C.實(shí)驗(yàn)組圖5hUC‐MSCsUC‐MSCs復(fù)合膠原支架治療3和6周后創(chuàng)面組織HE染色觀察（A，C，E，G：scalebar=100μm；B，D，F(xiàn)，H：scalebar=25μm）A，B.對(duì)照組治療3周；C，D.實(shí)驗(yàn)組治療3周；E，F(xiàn).對(duì)照組治療6周；G，H.實(shí)驗(yàn)組治療6周195

，Ki67抗體1∶200稀釋），4℃孵育過(guò)夜，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行顯色；然后用蘇木素襯染細(xì)胞核后進(jìn)行脫水處理，經(jīng)中性樹(shù)脂封片后觀察。11.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用GraphPadPrism7軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以xˉ±s表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果22.1人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定hUCMSCs在無(wú)血清培養(yǎng)體系下呈貼壁狀態(tài)生長(zhǎng)，培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞增殖速度較快。倒置相差顯微鏡下觀察，hUCMSCs胞體呈梭形，細(xì)胞密度高時(shí)呈漩渦狀排列（圖1）。圖1hUUC‐MSCsC‐MSCs形態(tài)觀察（scalebar=200μm）流式細(xì)胞分析顯示，第3代細(xì)胞的基質(zhì)細(xì)胞抗原CD105、CD90、CD73的表達(dá)陽(yáng)性率分別為99.9%、100.0%及98.1%，而造血細(xì)胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD19、HLADR的表達(dá)均呈陰性（陽(yáng)性率≤2%），符合MSCs的免疫表型特征（圖2）。22.2小型豬皮膚大體觀察及創(chuàng)面愈合率分析對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行6周連續(xù)觀察。結(jié)果顯示，單純膠原支架組（對(duì)照組）與hUCMSCs復(fù)合膠原支架組（實(shí)驗(yàn)組）動(dòng)物生存狀態(tài)良好，體溫正常，創(chuàng)面及周邊區(qū)域均未出現(xiàn)紅腫、感染、皮疹或其他急性過(guò)敏反應(yīng)。初步表明，負(fù)載hUCMSCs的膠原支架免疫原性較低，具備一定的應(yīng)用安全性。治療3周后，對(duì)照組創(chuàng)面瘢痕攣縮明顯，大部分區(qū)域形成褐色血痂，痂皮較厚且質(zhì)地堅(jiān)硬（圖3B）；實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面修復(fù)效果顯著改善，創(chuàng)面邊緣區(qū)域缺損已基本愈合，皮膚具有一定彈性，創(chuàng)面中央?yún)^(qū)域仍有少量血痂（圖3C）。對(duì)治療3周后兩組的創(chuàng)面面積進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面面積較對(duì)照組明顯縮小，兩組創(chuàng)面愈合率分別為對(duì)照組（73.79±5.73）%，實(shí)驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]膠原-纖維蛋白膠膜復(fù)合臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)小鼠全層皮膚創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 南文濱,陳紅麗,劉瑞,徐志浩,原志慶.  中華損傷與修復(fù)雜志(電子版). 2015(01)
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