人臍帶間充質干細胞復合膠原支架治療小型豬皮膚缺損的實驗研究
發(fā)布時間：2022-01-03 15:03
目的探討人臍帶間充質干細胞（hUC-MSCs）復合膠原支架用于小型豬全層皮膚缺損修復的治療作用。方法在小型豬背部沿正中線兩側切取正方形全層皮膚缺損創(chuàng)面,隨機分為兩組,每組6個創(chuàng)面,分別給予膠原支架（對照組）及hUC-MSCs復合膠原支架（實驗組）治療。術后連續(xù)監(jiān)測實驗動物的生理狀況及創(chuàng)面愈合情況,分別于治療3周及6周切取創(chuàng)面組織進行HE染色,評估創(chuàng)面皮膚損傷修復效果;并通過CK14及Ki67免疫組織化學染色,評估治療3周后表皮層細胞增殖情況。結果實驗組治療3周后皮膚創(chuàng)面愈合率[（91.25±3.58）%]明顯高于對照組[（73.79±5.73）%]（P<0.05）。組織學檢測結果表明,實驗組治療3周后創(chuàng)面再表皮化速度較對照組顯著提高;治療6周后,實驗組新生表皮層結構較對照組完整且厚度均一,并可見類似正常皮膚的表皮釘突及真皮乳頭結構。免疫組織化學分析顯示,治療3周后,實驗組表皮層細胞CK14呈強陽性表達;實驗組表皮基底層細胞Ki67陽性率[（35.03±6.46）%]較對照組[（2.07±1.07）%]顯著提高（P<0.01）,表明實驗組表皮層細胞增殖活躍。結論 hUCMSC...
【文章來源】：軍事醫(yī)學. 2020,44(03)北大核心
【文章頁數】：6 頁
【部分圖文】：
hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析
軍事醫(yī)學2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020圖4hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析（n=3）22.3組織學觀察HE染色結果顯示，治療3周后，對照組可見大量炎性細胞浸潤，未見表皮層形成（圖5A，B）；而實驗組創(chuàng)面再表皮化速度較對照組明顯提高，具有良好的表皮結構（圖5C，D）。治療6周后，兩組創(chuàng)面均已完成再表皮化，對照組表皮厚度不均一，表皮基底層平坦（圖5E，F）；實驗組修復狀況良好，表皮層結構完整，可明顯區(qū)分基底層、棘層、顆粒層和角質層，可見與正常皮膚組織相似的表皮釘突及真皮乳頭結構，真皮層可見排列成束的膠原纖維（圖5G，H）。圖2hUC‐MSCsUC‐MSCs表面標志蛋白的流式細胞儀鑒定圖3hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面大體觀察（黃色虛線指示創(chuàng)面區(qū)域）A.治療前；B.對照組；C.實驗組圖5hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3和6周后創(chuàng)面組織HE染色觀察（A，C，E，G：scalebar=100μm；B，D，F，H：scalebar=25μm）A，B.對照組治療3周；C，D.實驗組治療3周；E，F.對照組治療6周；G，H.實驗組治療6周195
，Ki67抗體1∶200稀釋），4℃孵育過夜，按試劑盒說明進行顯色；然后用蘇木素襯染細胞核后進行脫水處理，經中性樹脂封片后觀察。11.4統計學分析利用GraphPadPrism7軟件進行數據分析，數據以xˉ±s表示。組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。2結果22.1人臍帶來源間充質干細胞培養(yǎng)及鑒定hUCMSCs在無血清培養(yǎng)體系下呈貼壁狀態(tài)生長，培養(yǎng)10代以內的細胞增殖速度較快。倒置相差顯微鏡下觀察，hUCMSCs胞體呈梭形，細胞密度高時呈漩渦狀排列（圖1）。圖1hUUC‐MSCsC‐MSCs形態(tài)觀察（scalebar=200μm）流式細胞分析顯示，第3代細胞的基質細胞抗原CD105、CD90、CD73的表達陽性率分別為99.9%、100.0%及98.1%，而造血細胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD19、HLADR的表達均呈陰性（陽性率≤2%），符合MSCs的免疫表型特征（圖2）。22.2小型豬皮膚大體觀察及創(chuàng)面愈合率分析對實驗動物進行6周連續(xù)觀察。結果顯示，單純膠原支架組（對照組）與hUCMSCs復合膠原支架組（實驗組）動物生存狀態(tài)良好，體溫正常，創(chuàng)面及周邊區(qū)域均未出現紅腫、感染、皮疹或其他急性過敏反應。初步表明，負載hUCMSCs的膠原支架免疫原性較低，具備一定的應用安全性。治療3周后，對照組創(chuàng)面瘢痕攣縮明顯，大部分區(qū)域形成褐色血痂，痂皮較厚且質地堅硬（圖3B）；實驗組創(chuàng)面修復效果顯著改善，創(chuàng)面邊緣區(qū)域缺損已基本愈合，皮膚具有一定彈性，創(chuàng)面中央區(qū)域仍有少量血痂（圖3C）。對治療3周后兩組的創(chuàng)面面積進行分析，實驗組創(chuàng)面面積較對照組明顯縮小，兩組創(chuàng)面愈合率分別為對照組（73.79±5.73）%，實驗
【參考文獻】：
期刊論文
[1]膠原-纖維蛋白膠膜復合臍帶間充質干細胞修復小鼠全層皮膚創(chuàng)面的實驗研究[J]. 南文濱,陳紅麗,劉瑞,徐志浩,原志慶. 中華損傷與修復雜志(電子版). 2015(01)
[2]自體BMSCs復合膠原膜修復豬全層皮膚缺損[J]. 何麗娟,劉大慶,白慈賢,閆迎軍,管利東,裴雪濤. 中國修復重建外科雜志. 2009(03)
[3]生物支架材料膠原膜交聯前后的特性分析[J]. 陳琳,呂洋,管利東,王韞芳,何麗娟,李艷華,白慈賢,劉大慶,裴雪濤. 中國修復重建外科雜志. 2008(02)
本文編號：3566481
【文章來源】：軍事醫(yī)學. 2020,44(03)北大核心
【文章頁數】：6 頁
【部分圖文】：
hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析
軍事醫(yī)學2020年3月第44卷第3期MilMedSci，Vol44，No3，Mar，2020圖4hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面愈合率分析（n=3）22.3組織學觀察HE染色結果顯示，治療3周后，對照組可見大量炎性細胞浸潤，未見表皮層形成（圖5A，B）；而實驗組創(chuàng)面再表皮化速度較對照組明顯提高，具有良好的表皮結構（圖5C，D）。治療6周后，兩組創(chuàng)面均已完成再表皮化，對照組表皮厚度不均一，表皮基底層平坦（圖5E，F）；實驗組修復狀況良好，表皮層結構完整，可明顯區(qū)分基底層、棘層、顆粒層和角質層，可見與正常皮膚組織相似的表皮釘突及真皮乳頭結構，真皮層可見排列成束的膠原纖維（圖5G，H）。圖2hUC‐MSCsUC‐MSCs表面標志蛋白的流式細胞儀鑒定圖3hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3周后創(chuàng)面大體觀察（黃色虛線指示創(chuàng)面區(qū)域）A.治療前；B.對照組；C.實驗組圖5hUC‐MSCsUC‐MSCs復合膠原支架治療3和6周后創(chuàng)面組織HE染色觀察（A，C，E，G：scalebar=100μm；B，D，F，H：scalebar=25μm）A，B.對照組治療3周；C，D.實驗組治療3周；E，F.對照組治療6周；G，H.實驗組治療6周195
，Ki67抗體1∶200稀釋），4℃孵育過夜，按試劑盒說明進行顯色；然后用蘇木素襯染細胞核后進行脫水處理，經中性樹脂封片后觀察。11.4統計學分析利用GraphPadPrism7軟件進行數據分析，數據以xˉ±s表示。組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。2結果22.1人臍帶來源間充質干細胞培養(yǎng)及鑒定hUCMSCs在無血清培養(yǎng)體系下呈貼壁狀態(tài)生長，培養(yǎng)10代以內的細胞增殖速度較快。倒置相差顯微鏡下觀察，hUCMSCs胞體呈梭形，細胞密度高時呈漩渦狀排列（圖1）。圖1hUUC‐MSCsC‐MSCs形態(tài)觀察（scalebar=200μm）流式細胞分析顯示，第3代細胞的基質細胞抗原CD105、CD90、CD73的表達陽性率分別為99.9%、100.0%及98.1%，而造血細胞表面抗原CD34、CD45、CD14、CD19、HLADR的表達均呈陰性（陽性率≤2%），符合MSCs的免疫表型特征（圖2）。22.2小型豬皮膚大體觀察及創(chuàng)面愈合率分析對實驗動物進行6周連續(xù)觀察。結果顯示，單純膠原支架組（對照組）與hUCMSCs復合膠原支架組（實驗組）動物生存狀態(tài)良好，體溫正常，創(chuàng)面及周邊區(qū)域均未出現紅腫、感染、皮疹或其他急性過敏反應。初步表明，負載hUCMSCs的膠原支架免疫原性較低，具備一定的應用安全性。治療3周后，對照組創(chuàng)面瘢痕攣縮明顯，大部分區(qū)域形成褐色血痂，痂皮較厚且質地堅硬（圖3B）；實驗組創(chuàng)面修復效果顯著改善，創(chuàng)面邊緣區(qū)域缺損已基本愈合，皮膚具有一定彈性，創(chuàng)面中央區(qū)域仍有少量血痂（圖3C）。對治療3周后兩組的創(chuàng)面面積進行分析，實驗組創(chuàng)面面積較對照組明顯縮小，兩組創(chuàng)面愈合率分別為對照組（73.79±5.73）%，實驗
【參考文獻】：
期刊論文
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[2]自體BMSCs復合膠原膜修復豬全層皮膚缺損[J]. 何麗娟,劉大慶,白慈賢,閆迎軍,管利東,裴雪濤. 中國修復重建外科雜志. 2009(03)
[3]生物支架材料膠原膜交聯前后的特性分析[J]. 陳琳,呂洋,管利東,王韞芳,何麗娟,李艷華,白慈賢,劉大慶,裴雪濤. 中國修復重建外科雜志. 2008(02)
本文編號：3566481
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