發(fā)布時(shí)間：2017-05-10 22:00

  本文關(guān)鍵詞：微應(yīng)變環(huán)境對(duì)組織工程化周?chē)窠?jīng)功能恢復(fù)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.采用低滲聯(lián)合凍干技術(shù)改良脫細(xì)胞神經(jīng)支架制作方法,并在現(xiàn)有方法的基礎(chǔ)上改良兔SCs分離純化方法,將所得的神經(jīng)支架和SCs于體外構(gòu)建新型組織工程化周?chē)窠?jīng)。2.對(duì)體外構(gòu)建的新型組織工程化周?chē)窠?jīng)給予不同程度的微應(yīng)變牽張刺激,通過(guò)顯微縫合技術(shù)植入周?chē)窠?jīng)缺損動(dòng)物模型體內(nèi),檢測(cè)其神經(jīng)功能恢復(fù)情況及種子細(xì)胞在體內(nèi)的分子生物學(xué)變化。方法:1.在傳統(tǒng)化學(xué)脫細(xì)胞神經(jīng)支架制作方法基礎(chǔ)上對(duì)其進(jìn)行低滲和冷凍干燥處理,并進(jìn)行HE染色和掃描電鏡檢測(cè),觀察脫細(xì)胞是否完全。綜合多種SCs分離純化方法,通過(guò)酶消化法獲得混有成纖維細(xì)胞的原代SCs,利用抗代謝藥物Ara-C抑制成纖維細(xì)胞的增殖,HRG1-β1修復(fù)并刺激初次純化后的SCs,再結(jié)合差速酶法和差速貼壁法對(duì)其進(jìn)一步純化。用PKH26熒光示蹤劑對(duì)所得的高純度SCs進(jìn)行標(biāo)記,在體式顯微鏡下通過(guò)顯微注射的方法于體外構(gòu)建新型組織工程化周?chē)窠?jīng),并進(jìn)行HE染色觀察SCs在支架內(nèi)的生長(zhǎng)狀況。2.將前期體外構(gòu)建的新型組織工程化周?chē)窠?jīng)置于Bio Dynamic生物反應(yīng)艙系統(tǒng)內(nèi)通過(guò)EF3200生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)儀對(duì)其進(jìn)行不同程度的周期性循環(huán)牽張微應(yīng)變刺激(形變量分別為0%、5%、10%和15%)。通過(guò)顯微縫合技術(shù)將不同形變量刺激后的神經(jīng)支架植入坐骨神經(jīng)缺損動(dòng)物模型(缺損長(zhǎng)度1cm)體內(nèi)修復(fù)神經(jīng)缺損。分別于4周和8周通過(guò)超聲觀察支架在體內(nèi)的形態(tài)變化和連續(xù)性,于8周時(shí),檢測(cè)動(dòng)物模型術(shù)側(cè)神經(jīng)電生理和腓腸肌恢復(fù)情況,并取出神經(jīng)支架進(jìn)行HE、甲苯胺藍(lán)染色,觀察支架內(nèi)細(xì)胞分布及髓鞘計(jì)數(shù);S-100、GFAP及NF-200免疫熒光染色并測(cè)IOD值。病理切片后觀察遠(yuǎn)端吻合口PKH26熒光示蹤情況。結(jié)果:1.改良后的脫細(xì)胞神經(jīng)支架HE染色及掃描電鏡觀察結(jié)果顯示支架內(nèi)部髓鞘及SCs均被完全去除,支架內(nèi)部存在豐富的孔狀結(jié)構(gòu)。綜合多種SCs分離純化方法可以快速獲得大量增殖活性好的高純度雪旺細(xì)胞。HE染色結(jié)果顯示SCs在改良支架內(nèi)存活良好。2.在不同微應(yīng)變環(huán)境下四組不同形變量刺激的神經(jīng)支架的超聲長(zhǎng)軸圖像可見(jiàn)各組吻合口處神經(jīng)外膜平滑延續(xù),無(wú)斷離發(fā)生,短軸圖像可見(jiàn)神經(jīng)纖維束的結(jié)構(gòu)清晰完整。肌電圖檢測(cè)結(jié)果中10%形變量刺激后的神經(jīng)支架NCV明顯高于其余三種形變量組,且0%、5%、15%形變量刺激組肌電圖上可見(jiàn)低電壓、多相位的新生電位,10%形變量刺激組可見(jiàn)短時(shí)程、高波幅的再生電位。10%形變量組雙側(cè)腓腸肌濕重比明顯高于其余三種形變量組。植入體內(nèi)的支架8周時(shí)除15%形變量組結(jié)構(gòu)崩解外,0%、5%、10%組支架內(nèi)部及自體移植組基底層和神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)完整,呈波浪狀分布。10%形變量組髓鞘數(shù)目高于0%、5%組,低于自體神經(jīng)移植組。10%形變量組S-100及GFAP免疫熒光染色I(xiàn)OD值明顯高于0%、5%和自體神經(jīng)移植組,低于空白對(duì)照組,NF-200免疫熒光染色I(xiàn)OD值高于0%和5%組,低于自體神經(jīng)移植組和空白對(duì)照組。0%、5%及10%形變量組8周時(shí)遠(yuǎn)端吻合口均可見(jiàn)PKH26紅色熒光,15%組呈陰性。結(jié)論:適當(dāng)程度的微應(yīng)變刺激可促進(jìn)SCs復(fù)合低滲聯(lián)合凍干處理后的神經(jīng)支架在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)修復(fù)神經(jīng)缺損的功能恢復(fù)情況。
【關(guān)鍵詞】：周?chē)窠?jīng) 脫細(xì)胞神經(jīng)支架 許旺細(xì)胞 微應(yīng)變環(huán)境 生物力學(xué) 組織工程
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R651;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、組織工程化周?chē)窠?jīng)的體外構(gòu)建實(shí)驗(yàn)14-23
• 1.1 對(duì)象和方法14-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和主要試劑、儀器14-16
• 1.1.2 改良同種異體脫細(xì)胞神經(jīng)支架制備16
• 1.1.3 支架組織形態(tài)學(xué)及掃描電鏡觀察16
• 1.1.4 兔SCs分離培養(yǎng)并純化16-17
• 1.1.5 SCs與神經(jīng)支架體外復(fù)合17
• 1.1.6 復(fù)合后的神經(jīng)支架組織形態(tài)學(xué)觀察17-18
• 1.2 結(jié)果18-19
• 1.2.1 支架組織形態(tài)學(xué)及掃描電鏡觀察結(jié)果18
• 1.2.2 兔SCs的形態(tài)學(xué)觀察18-19
• 1.2.3 復(fù)合SCs的神經(jīng)支架組織形態(tài)學(xué)觀察19
• 1.3 討論19-22
• 1.3.1 神經(jīng)支架的材料和制備方法19-21
• 1.3.2 高純度SCs的獲取21-22
• 1.4 小結(jié)22-23
• 二、微應(yīng)變環(huán)境對(duì)組織工程化周?chē)窠?jīng)功能恢復(fù)的影響23-37
• 1.1 對(duì)象和方法23-27
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑、儀器23
• 1.1.2 SCs-支架復(fù)合后給予循環(huán)牽張應(yīng)力刺激23-24
• 1.1.3 神經(jīng)移植修復(fù)坐骨神經(jīng)缺損24-25
• 1.1.4 神經(jīng)支架超聲觀察25
• 1.1.5 神經(jīng)電生理檢測(cè)25-26
• 1.1.6 腓腸肌濕重比計(jì)算26
• 1.1.7 組織形態(tài)學(xué)及熒光示蹤觀察26
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 1.2 結(jié)果27-33
• 1.2.1 神經(jīng)支架超聲觀察結(jié)果27
• 1.2.2 術(shù)后8周神經(jīng)支架大體觀察及神經(jīng)電生理檢查結(jié)果27-29
• 1.2.3 腓腸肌濕重比29-30
• 1.2.4 組織形態(tài)學(xué)及熒光示蹤觀察30-33
• 1.3 討論33-35
• 1.4 小結(jié)35-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明43-44
• 綜述44-65
• 綜述參考文獻(xiàn)53-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 何晶;丁文龍;;雪旺氏細(xì)胞在周?chē)窠?jīng)損傷修復(fù)中的作用及其分子機(jī)制[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2005年04期

2 ;Biomechanical properties of acellular sciatic nerves treated with a modified chemical method[J];Neural Regeneration Research;2011年04期

  本文關(guān)鍵詞：微應(yīng)變環(huán)境對(duì)組織工程化周?chē)窠?jīng)功能恢復(fù)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：355533