高靈敏度、廣通用性的生化分析方法對于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境研究、食品學(xué)等學(xué)科的發(fā)展至關(guān)重要。電致化學(xué)發(fā)光技術(shù)在檢測應(yīng)用中具有靈敏度高、可控性好、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品分析和環(huán)境檢測、生化試劑檢測與免疫檢測分析中。許多材料都能發(fā)生電致化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象,尋找更高效率的發(fā)光體或者修飾發(fā)光體用于生物分子標(biāo)記是目前的研究重點(diǎn)。其中卟啉作為電致化學(xué)發(fā)光體具有獨(dú)特的發(fā)光性能,可以通過將卟啉與DNA、納米材料或合適的生物蛋白組裝,以此提高卟啉基發(fā)光材料的電致化學(xué)發(fā)光的穩(wěn)定性及效率。本文圍繞卟啉基電致化學(xué)發(fā)光材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。選擇一種電致化學(xué)發(fā)光性能較好的卟啉化合物,以細(xì)胞色素C、血紅蛋白、肌紅蛋白為原材料,通過酸性條件下將輔基分離,制備脫輔基細(xì)胞色素C、脫輔基血紅蛋白及脫輔基肌紅蛋白,然后與卟琳結(jié)合制備重組蛋白,通過紫外吸收光譜,熒光發(fā)射光譜以及電致化學(xué)發(fā)光等檢測方法的檢測結(jié)果表明,對比卟啉單體,重組肌紅蛋白電致化學(xué)發(fā)光性能更穩(wěn)定、活性更強(qiáng),并且利用重組肌紅蛋白構(gòu)建早期癌癥標(biāo)記物-血管上表皮生長因子（VEGF）檢測傳感器,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明傳感器檢測靈敏度高,選擇性好,穩(wěn)定性好,在實(shí)際應(yīng)用中具有... 

【文章來源】：南京理工大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２?ＥＣＬ的原理示意圖??

本文的主要工作圍繞目前卟啉基電致化學(xué)發(fā)光材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。選擇一種電致化學(xué)發(fā)??光性能較好的卟啉化合物，通過與不同的氨基酸或蛋白質(zhì)結(jié)合，測定重組蛋白的電致化??學(xué)發(fā)光活性，并應(yīng)用到免疫分析中，探索其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，實(shí)驗(yàn)流程圖如圖１．５。??９種卟啉??篩選???ｒ＊ｉ????「＾色脫輔基?＋?ｉ?一?重組?＾??翌竺、馳色素ｃ?＋埋?細(xì)胞色素ｃ???????—ｌＪ脫輔基?ｉ?＾?？ａｍ￣￣￣１重組蛋白的｜重組??Ｌ血紅蛋白—血紅蛋白＋?ｐ?—血紅蛋白ｈ．亡、肌紅一?Ｓ??Ｌｇ－丄刪?活?ＬＥ：丄蟲Ｈ?ＥＣＬ活性對比蛋白?檢測??ｔｔ?１…蟲Ｈ??一ｊ±ｉ一１＾，脫輔基?？的?＾?重組??．．．．．．．？蛍日卜肌紅蛋白＋卟?肌紅蛋白＾??????圖１．５論文實(shí)驗(yàn)流程圖??最初，為了尋找水溶性好并且發(fā)光穩(wěn)定的卟啉，我們對不同結(jié)構(gòu)的卟啉分子進(jìn)行研??１１??

的金屬離子可以實(shí)現(xiàn)不同的發(fā)射波長。由于卟啉化合物本身可能由于共軛效應(yīng)導(dǎo)致猝滅，??可以通過將卟啉與ＤＮＡ、納米材料或合適的生物蛋白組裝，以此提高卟啉基發(fā)光材料??電致化學(xué)發(fā)光的穩(wěn)定性及效率（如圖１．４），擴(kuò)大其應(yīng)用范圍ｔ７２］。Ｃｈｅｒｕｚｅｌ課題組利用??卟啉與多種蛋白組裝，由于不同的卟啉具有不同的熒光發(fā)射波長，因此利用不同卟啉分??子的熒光強(qiáng)弱程度和發(fā)射峰的位置不同，可以實(shí)現(xiàn)蛋白的定向檢測，進(jìn)一步將其與不同??蛋白的特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)的定量檢測及對生物反應(yīng)機(jī)理的研究。Ｓｃｈｅｉｃｈｅｒ課題組??［７４］研宂了蛋白質(zhì)與卟啉結(jié)合的方式，通過設(shè)計(jì)一定結(jié)構(gòu)的蛋白與特定的卟啉分子進(jìn)行組??裝，利用卟啉分子優(yōu)良的光電化學(xué)性能和催化性能，發(fā)現(xiàn)在不同氧分壓下卟啉的發(fā)光強(qiáng)??度也有所變化，利用這一關(guān)系實(shí)現(xiàn)了對氧氣濃度的檢測，這一技術(shù)也對未來生物體氧濃??度檢測方面做出了巨大的貢獻(xiàn)。??＼?／ＳｕＳｓｓｉｒａｔｅ??２Ｈ＊?Ｖｃ?２Ｈ，??ＮＡＤ（Ｐｆ?Ｖ?ｐｊｏｔｊｙｃｊ?＇Ｐｒｏｄｕｄ???Ｎａｔｕｒｓ丨?Ｐａｔｈｗａｙ?Ｈｙｂｒｉｄ?Ｅｎｚｙｍｅ?Ａｐｐｒｏａｃｈ??ｐ－＾??圖１．４卟啉與蛋白組裝在呼吸代謝模型的應(yīng)用［７２］??１３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于魯米諾修飾AuAg@MnO2納米復(fù)合材料構(gòu)建的β淀粉樣蛋白電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的研究[J]. 王靖茜,朱阿敏,袁若,柴雅琴.  化學(xué)傳感器. 2016(04)
[2]血紅蛋白的電化學(xué)和電分析化學(xué)研究進(jìn)展[J]. 孫偉,江宏,尤加宇,陸路德.  化學(xué)世界. 2005(08)

碩士論文
[1]新型納米材料的制備及其在細(xì)胞色素C檢測中的應(yīng)用[D]. 尹雪花.湖南大學(xué) 2016
[2]基于卟啉的新型電致化學(xué)發(fā)光生物傳感器及其核酸蛋白分析應(yīng)用研究[D]. 季旭波.南京理工大學(xué) 2016
[3]基于銅納米顆粒和分子信標(biāo)的新型熒光生物傳感器的研究[D]. 劉雅如.湖南大學(xué) 2013
[4]血紅素輔基對肌紅蛋白局部構(gòu)象影響的研究[D]. 劉榮生.吉林大學(xué) 2008



本文編號：3288789