發(fā)布時(shí)間：2021-07-06 04:53

　　在我國,由病毒性肝炎及藥物性肝損害導(dǎo)致的急性肝衰竭,其病情危急,死亡率很高。生物人工肝可以使患者過渡到肝移植或自身肝細(xì)胞再生,因此一直是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。而生物人工肝的開展,需要大量的肝細(xì)胞。因此,我們需要建立一個(gè)肝細(xì)胞庫,從而源源不斷地為生物人工肝提供足量的肝細(xì)胞。肝細(xì)胞凍存被認(rèn)為是肝細(xì)胞長(zhǎng)期儲(chǔ)存的最理想也是唯一的方案。微囊化肝細(xì)胞不僅僅是填充灌流床式或流化床式生物人工肝的理想生物活性成分,同時(shí)也被認(rèn)為是肝細(xì)胞凍存極為有前景的凍存方式。本研究的目的在于為海藻酸鈉-殼聚糖微囊化原代豬肝細(xì)胞及可逆性人源性永生化肝細(xì)胞（HepLi4）的凍存,摸索出一個(gè)理想的微囊凍存方案。然后,在這一凍存條件下,開展海藻酸鈉-殼聚糖微囊化原代豬肝細(xì)胞及可逆性人源性永生化肝細(xì)胞（HepLi4）的大規(guī)模凍存。本實(shí)驗(yàn)通過本實(shí)驗(yàn)室建立的Dispase-膠原酶四步灌流法分離獲得原代豬肝細(xì)胞,而通過復(fù)蘇及培養(yǎng)獲得足量的可逆性人源性永生化肝細(xì)胞（HepLi4）。對(duì)兩種肝細(xì)胞進(jìn)行海藻酸鈉-殼聚糖（AC）微囊化包裹,分別獲取AC微囊化原代豬肝細(xì)胞及AC微囊化HepLi4細(xì)胞,并對(duì)兩種微囊化肝細(xì)胞進(jìn)行凍存,在液氮中凍存40天。其... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

組采用不同DMSO濃度凍存方案復(fù)蘇的微囊化豬肝細(xì)胞的微囊完整性比較

(14.5873%士1.8228%)，而20%DMSO濃度組則以破損微囊多見(21.594%士1.4674%)。相對(duì)于以上兩組，15%DMSO濃度組可獲得最高的微囊規(guī)則性及完整性(96.484%士 1.3664%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=3，P<0.05)(圖1一4)。微 微囊化豬肝細(xì)胞微囊完整性性 11100F一 一 9990卜膠葵篆翻王粉杰象別 ___燕燕80卜足澳燕翻嗓泰滋翔睡桑器安廷匆璐藥滋瀚 瀚卞卞70卜卜瑟熙娜跪篆然瀚磁巍熟瀚眨茲}蒸茲泊 泊沖沖60卜膠簇綴繃麟嫩粼撇瀚繃麟裁溯 溯姚姚50卜膝裹熙翻隴滋澡抽滾攝攝翎滾裹鬢變擬 擬擔(dān)擔(dān)40卜一麟襄瑙麟麟到麟麟翻麟瀚溯 溯貂貂;l「黝黝黝黝黝 黝 1110卜談姨惡瀏姍淡淵欲菠簇到麟艇條溯賡滋澎翻翻 00000 555%10%15%20%25%%%凍 凍存組別 別圖1一35組采用不同DMSO濃度凍存方案復(fù)蘇的微囊化豬肝細(xì)胞的微囊完整性比較微囊化H即Li4細(xì)胞微囊完整性 nUCU︷11︸目曰八二nU八 UnU日一︸n曰曰八八 9OUOt才n匕民 4ddQg目，上﹃1.戴嘿爾陣擔(dān)報(bào)翩凍存組別圖1一43組采用不同DMso濃度凍存方案復(fù)蘇的微囊化HePLi4細(xì)胞的微囊完整性比較

力(0.59302士0.032976)與20%DMSO組細(xì)胞的活力(0.61694士0.147792)相比接近，略高于10%DMSO組細(xì)胞的活力(0.4909士0.130186)，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=5，P>0.05)(圖1一7)。微 微囊化HepLi4細(xì)胞活力 力 000.sr___冽冽 0.6r}暇服刻~膝襄燕瞬蒸翻 翻少少 0.4卜眺然緞粼緞匆麟然李鄉(xiāng)蒸忿滋〕彩磁摧姍魏溯 溯疊疊“’‘!跳漱滋滋滋朔賺滋滋滋要彩溯貶彭彤毅滋滋翔 翔卜卜~.膠長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)長(zhǎng)能澎窮長(zhǎng)幻暇筋;召弓弓狡歡杯召多列不召召召召召召召么么汾 汾芝芝 0.2卜麟券毅群瀚到眺務(wù)務(wù)要彭漆淵瞪愁蒸遙然麟習(xí) 習(xí) 00000 1110%15%20%%%凍 凍存組別 別圖1一73組采用不同DMsO濃度凍存方案復(fù)蘇的微囊化HePLi4細(xì)胞的活力比較


本文編號(hào)：3267566