研究目的血管生成在生物體內(nèi)損傷修復(fù)起著重要的作用。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)硫酸銅能促進(jìn)角膜血管生成。同時(shí)硫酸鈣也能促進(jìn)脛骨骨缺損周圍血管形成。另外含銅生物陶瓷材料證實(shí)具備促成骨效應(yīng)。于是本實(shí)驗(yàn)制備硫酸銅及硫酸鈣復(fù)合材料,旨在驗(yàn)證復(fù)合材料理化表征及促血管和骨修復(fù)效應(yīng)。方法1、含銅硫酸鈣膠合劑的制備、物理表征及體外降解實(shí)驗(yàn)通過(guò)按照固定固液比例物理混合α-半水硫酸鈣粉末和不同濃度的五水硫酸銅溶液,通過(guò)制模得到圓柱狀含銅硫酸鈣復(fù)合材料樣品。檢測(cè)材料表征及了解體外降解特性。2、含銅硫酸鈣骨水泥對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）增值分化、遷移的影響按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)制備不同濃度復(fù)合材料浸提液,以浸提液干預(yù)HUVECs及BMSCs,通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增值能力;劃痕實(shí)驗(yàn)及成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)浸提液對(duì)HUVECs遷移和成管能力;PCR（Qrt-PCR）檢測(cè)相關(guān)血管基因（VEGF/HIF-1α/eNOS）和相關(guān)成骨分化基因（OCN、ALP、RUNX2 及 BSP）表達(dá);細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)相關(guān)蛋白（VEGF/HIF-1α）表達(dá);茜素紅染色檢測(cè)浸提液對(duì)BMSCs礦化的影響。3、復(fù)合材料對(duì)大鼠脛... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１不同含銅量復(fù)合材料浸提液干預(yù)ＨＵＶＥＣｓ細(xì)胞的增殖情況??（ｘ士ｓ，ｎ＝５，＊表示與同一培養(yǎng)時(shí)間Ｃｕ?（０）組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Ｐ＜０．０５；?＃表示同一組??

?博士學(xué)位論文???ｓｅ＾ｏ－ｊ?ｓ？１００］??ｒｅ?？?？??Ｓ?Ｔ?Ｓ?８０－?Ａ－??丨?ｋｌｉｉ?ｉＬｎｉ??Ａ?Ｇｒｏｕｐ?ｂ?Ｇｒｏｕｐ??圖２－３不同材料組浸提液干預(yù)后ＨＵＶＥＣｓ細(xì)胞的劃痕愈合率??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?（Ａ）?７＇ｈｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ａｒｅａ?ｗａｓ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?ａｔ?Ｉ６ｈ．?Ｍｅａｎ??±?ＳＤ；?ｎ＝３．＾Ｐ＜０．０５?Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｔｏ?Ｃｕ（０）．（Ｂ）?Ｔｈｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ａｒｅａ??ｗａｓ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?ａｔ?２４ｈ，?Ｍｅａｎ?土?ＳＤ；?ｎ＝３．?＊卩＜０．０５?Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｔｏ?Ｃｕ（０），％Ｐ＜０．０５?Ｃｏｍｐａｒｅ?ｔｏ??Ｃｕ（Ｏ．ｌ）??３．４不同濃度銅摻雜硫酸鈣對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞成管活力的結(jié)果??不同材料的浸提液對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的成管活力測(cè)定如圖２－４：結(jié)果表明：硫酸鈣??及不同濃度含銅硫酸鈣浸提液對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞都有不同程度的成管能力，但內(nèi)皮細(xì)??胞在Ｃｕ（０．５）組材料浸提液溶解產(chǎn)物中孵育１２小時(shí)后形成細(xì)長(zhǎng)的管狀結(jié)構(gòu)比其余??各組更完全及完整，內(nèi)皮細(xì)胞在其余各組材料溶解產(chǎn)物形成不完全或零星的管??狀結(jié)構(gòu)，在Ｃ’ｕ（２．５）組最明顯；所以成管能力Ｃｕ（０．５）最佳，Ｋ？次是Ｃｕ（Ｏ．ｌ）組、??Ｃｕ（ｌ）組、Ｃｕ（０）組，Ｃｕ（２．５）組最差。??Ｃｕ（０）?Ｃｕ（Ｏ．ｌ）?Ｃｕ（０．５）??＾＊ｖｖ；?ｊ：?＾??——■?－?４?—??＇＊ｒｌ??２９??

?第二部分不同濃度含銅硫酸鈣對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖分化及遷移的影響???Ｃｕ（ｌ）?Ｃｕ（２．５）??；？?？？Ｊ?ｐ?５?１?ｒ／－＇?ｒ．?＊?＼ｗ??攀．?＇■一?一??圖２－４成管活力實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ＨＵＶＥＣｓ在不同濃度含銅硫酸鈣浸提液中培養(yǎng)�。玻韬蟮某晒芮闆r??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｏｎｉｃ?ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｔｈｅ??ｆｉｖｅ?ｇｒｏｕｐｓ?ｏｆ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｔｕｂｕｌｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣｓ?ａｆｔｅｒ?ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?１２ｈ??３．５?ＶＥＧＦ、出Ｆ－ｌ＜ｘ和ｅＭ）Ｓ的基因表達(dá)結(jié)果??圖２－５中ＰＣＲ結(jié)果表明：在第４天，硫酸鈣和含銅復(fù)合材料浸提液產(chǎn)物培養(yǎng)??基干預(yù)的ＨＵＶＥＣｓ孵育提取物中，ＶＥＧＦ和ＨＩＦ－ｌａ的基因表達(dá)隨著復(fù)合材料中??銅含量的增加而增加。與Ｃｕ?（０）相比，Ｃｕ?（２．５）顯著增加ＶＥＧＦ和ＨＩＦ－ｌａ??的表達(dá)２０倍以上，并且組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但ｅＮＯＳ表達(dá)的結(jié)果表明，材料??浸提液的溶解離子產(chǎn)物對(duì)基因的表達(dá)略有增強(qiáng)，但組間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在??一定程度上，我們可以得出結(jié)論，銅與硫酸鈣的結(jié)合增強(qiáng)了它們促血管生成的??潛能。??ＶＥＧＦ?ＨＩＦ－１ａ?ｇ?４??Ｓ５０！?１?－ｒ??＞?ｉ－?ｉ３－??〇?３０－?°?〇??｜?丄?１３〇－?■?ｇ?２－?ｗｍ?＾??ｉ：ｉ：』ｌ?［ｌｉｉｎｌｉ??圣?〇?Ｉ?１?．??．?圣?〇＇?Ｉ??１?■


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